李研東+熊雅婷+李云

1 卡那霉素的檢測現(xiàn)狀

卡那霉素（Kanamycin）是一種氨基糖苷類抗生素，具有很強的抑菌作用，因價格低廉且抗菌性廣，而作為獸藥被廣泛使用。然而，在動物實際養(yǎng)殖過程中，濫用卡那霉素的現(xiàn)象屢見不鮮，造成其在動物源性食品中存在殘留，尤其是在乳品中的殘留現(xiàn)象更為嚴重。過量的卡那霉素可給人體帶來嚴重的副作用，主要包括腎毒性、造血系統(tǒng)毒性、過敏性等。另外，卡那霉素對嬰幼兒有很強的耳毒性，會導(dǎo)致嬰幼兒耳蝸細胞凋亡，嚴重者會造成聽力喪失。因此，嚴格控制卡那霉素在乳品中的殘留對保障乳品安全，維護消費者健康意義重大。

由于我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《動物性食品中獸藥最高殘留限量》（農(nóng)業(yè)部公告第235號）發(fā)布時間較早，所以公告中并未規(guī)定卡那霉素的限量要求。參照歐盟獸藥殘留限量標準，卡那霉素在乳品中的最高殘留限量為150μg/kg，因此可預(yù)測我國的獸藥殘留限量標準修訂會參考歐盟的限量標準對卡那霉素限量進行嚴格把控。目前，檢測卡那霉素藥物殘留最普遍的方法為實驗室檢測方法，即儀器方法，如高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）等。雖然此類檢測方法靈敏度高，但操作復(fù)雜，耗時較長，價格昂貴，因此也限制了其在現(xiàn)場實際的應(yīng)用，故建立一種快速、靈敏、便捷的食品中卡那霉素的檢測方法對于保障食品安全很有必要。

北京維德維康生物技術(shù)有限公司（以下簡稱“維德維康”）基于前期深厚的研發(fā)基礎(chǔ)，研制出一系列卡那霉素快速檢測產(chǎn)品，包括卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、卡那霉素膠體金快速檢測試紙條等產(chǎn)品，可實現(xiàn)生鮮乳、原奶、奶粉、成品奶等多種質(zhì)地乳品產(chǎn)品的快速定量、定性檢測，覆蓋乳品生產(chǎn)加工全產(chǎn)業(yè)鏈，可滿足多層次用戶的檢測需求。其中膠體金快速檢測試紙條操作簡單、檢測速度快，5min即可判讀檢測結(jié)果；酶聯(lián)免疫試劑盒反應(yīng)靈敏，檢測限低至0.3μg/kg，達到行業(yè)領(lǐng)先技術(shù)水平。

2 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系

2.1 卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理

酶聯(lián)免疫吸附測定法是將已知抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，加入底物顯色，顯色反應(yīng)可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就可將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

維德維康基于酶聯(lián)免疫吸附測定法的原理，研制了卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒，用于快速檢測乳品中卡那霉素藥物殘留。檢測樣品中的卡那霉素與酶標板上固定的抗原特異性競爭抗體，加入酶標記物，催化底物顯色，根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中卡那霉素的含量：顯色深，含量少；顯色淺，含量多。

2.2 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系的組成

卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系由卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒和酶標儀兩部分組成，酶聯(lián)免疫試劑盒具有配套的96孔酶標板，板內(nèi)包被維德維康自主研發(fā)的卡那霉素抗原物質(zhì)，可與卡那霉素抗體特異性結(jié)合，敏感性強；試劑盒內(nèi)配有酶標記物工作液，通過催化作用使底物顯色，根據(jù)顯色深淺可進行定量檢測。酶標儀中內(nèi)置標準曲線，可讀取定量檢測結(jié)果。

2.3 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系的優(yōu)點

2.3.1 樣本前處理簡單快速：稱取1g乳制品樣本于離心管中；加入1mL 1%的三氯乙酸，震蕩離心5min；取50μL中間層清液于2mL離心管中；加入950μL樣品稀釋液，充分混勻；待測。

2.3.2 “一步法”檢測步驟：將板條插入酶標板架上，依次加入50μL樣品溶液、酶標記物工作液和抗體工作液；避光反應(yīng)30min；充分洗滌，立即加入100μL底物溶液，避光反應(yīng)15min；終止反應(yīng)，用酶標儀在雙波長450nm、630nm下讀取酶標板吸光度值，即可得出定量檢測結(jié)果。

2.3.3 檢測結(jié)果準確：隨機選取3批卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒進行驗證，結(jié)果證實，試劑盒在生鮮乳、原奶、奶粉、成品奶等多種類型樣本中的檢測限均可達到10μg/kg，添加回收率為70%～118%，批內(nèi)批間變異系數(shù)均不超過10%。以《GB/T 22969-2008奶粉和牛奶中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法的檢測結(jié)果作為認定值，與卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測結(jié)果相比較，結(jié)果顯示，兩種方法的符合率達到99.5%以上，符合國家標準規(guī)定的檢測范圍。

3 卡那霉素膠體金免疫層析

快速檢測體系

3.1 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系原理

利用間接競爭原理，待測物和T線標記的抗原共同競爭金標抗體，根據(jù)膠體金試紙T線的顯色情況，來定性判斷待測樣品中是否含有目標化合物。檢測試紙條含有被事先固定于硝酸纖維素膜上的測試區(qū)（T）的抗原和控制區(qū)（C）的Ⅱ抗。微孔中的金標抗體經(jīng)奶樣溶解后，50℃孵育3min，將試紙條插入金標微孔中反應(yīng)5min，根據(jù)T區(qū)、C區(qū)的顏色深淺對比判讀結(jié)果。

3.2 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系的組成

卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系由卡那霉素試紙條、金標微孔和孵育器3部分組成，試紙條上具有檢測線（T線）和質(zhì)控線（C線），分別固定有抗原和Ⅱ抗，能夠特異性結(jié)合金標抗體，靈敏度高；金標微孔內(nèi)裝有膠體金標記的抗體；孵育器為保溫裝置，可促進樣本溶液流動并控制合適的反應(yīng)溫度。各部分組成如圖1所示。

3.3 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系的優(yōu)點

3.3.1 前處理簡單：膠體金免疫層析體系無需復(fù)雜的前處理，對于生鮮乳、原奶、成品奶等液態(tài)產(chǎn)品，只需充分搖勻即可檢測；對于奶粉等樣本，用去離子水溶解后也可直接檢測。

3.3.2 操作簡單：檢測時，吸取200μL奶樣于金標微孔中，小心吹打至紫紅色顆粒溶解，置于50℃孵育器內(nèi)孵育3min，將試紙條插入金標微孔中，反應(yīng)5min，取出試紙條即可判定檢測結(jié)果。全程檢測在10min內(nèi)完成，反應(yīng)時間快；無需額外有機化學(xué)試劑，綠色環(huán)保無污染；操作簡單，無需專業(yè)培訓(xùn)，適合基層檢測單位、質(zhì)監(jiān)部門現(xiàn)場快速監(jiān)測及企業(yè)常規(guī)質(zhì)檢。

3.3.3 判讀精確：對于原奶和奶粉樣本，卡那霉素快速檢測試紙條檢測限可達到3μg/kg，與目前歐盟獸藥殘留限量標準制定的限量值（150μg/kg）相比，靈敏度更高。同時，經(jīng)大量實驗驗證，該產(chǎn)品的假陽性率可控制在3%以內(nèi)，假陰性率低于1%；能夠?qū)崿F(xiàn)準確判讀。

3.3.4 包裝小巧，便于攜帶：試紙條采用封閉包裝，可有效避免環(huán)境中污染物質(zhì)污染試紙條，影響檢測結(jié)果。試紙條保存溫度在20±5℃之間，即開即用，且有效期為12個月，適用于車間、市場、養(yǎng)殖場等多種檢測環(huán)境，能夠滿足一線檢測的需求。

4 結(jié)論

卡那霉素快速檢測系統(tǒng)，包括卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、卡那霉素膠體金快速檢測試紙條等產(chǎn)品均具有檢測準確度高、操作簡單、便于攜帶的優(yōu)勢，能夠?qū)崿F(xiàn)生鮮乳、原奶、奶粉等多種乳及乳制品中卡那霉素殘留的快速檢測，填補了國內(nèi)卡那霉素快速檢測的空白，防止卡那霉素殘留超標產(chǎn)品上市對消費者造成危害。同時，卡那霉素快速檢測系統(tǒng)的使用和推廣將有效提升各應(yīng)用地區(qū)的乳品檢測技術(shù)手水平，切實解決一線檢測單位及生產(chǎn)企業(yè)經(jīng)費不足、專業(yè)性差的問題，滿足各級質(zhì)檢單位、乳品生產(chǎn)加工企業(yè)的檢測需求，促進乳品產(chǎn)業(yè)鏈向著健康安全的方向發(fā)展。endprint