林百豐 王鑫 唐鷺 張學志 陳麗

肺結核是一種嚴重危害人類健康的重大呼吸道傳染病。針對肺結核患者的檢測，我國大部分基層實驗室仍以痰涂片和痰培養(yǎng)為主。痰涂片檢查雖然速度快、成本低，但檢出率低；痰培養(yǎng)檢查檢出率高、成本也不高，但是培養(yǎng)時間大約需要1個月。目前，有很多實驗室將分子檢測技術應用于臨床以發(fā)現活動性肺結核患者。筆者將GeneXpert MTB/RIF(簡稱“GeneXpert”)與傳統(tǒng)肺結核診斷技術(痰涂片和痰培養(yǎng))進行對比分析，現報告如下。

資料和方法

一、研究對象

選取2015年8月至2017年1月黑龍江省縣級結核病防治所門診連續(xù)收集的未經治療的1355例初診患者作為研究對象，包括活動性肺結核患者636例，非活動性肺結核患者719例。肺結核患者的診斷參照《WS 288—2008肺結核診斷標準》[1]。研究對象均留取痰標本，由縣級實驗室人員進行檢測。

二、研究方法

1.標本采集：參照文獻[2]的要求，收集合格的痰標本，標本量3～5 ml，對不合格的痰標本要求患者重新留取。

2.痰涂片檢查：采用萋-尼抗酸染色法，參照文獻[2]要求進行操作。

3.痰固體培養(yǎng)：對所有痰標本采用簡單法培養(yǎng)，操作方法參照文獻[3]的要求。培養(yǎng)基購自珠海貝索生物技術有限公司。

4.藥物敏感性試驗(簡稱“藥敏試驗”)：采用比例法對培養(yǎng)陽性的標本進行藥敏試驗，操作要求參照文獻[4]。培養(yǎng)基購自珠海貝索生物技術有限公司。

5.GeneXpert：取1 ml合格的痰標本放入帶螺旋蓋的無菌前處理管中，加入2倍體積試劑配備的痰標本處理液，旋緊前處理管，在漩渦振蕩器上振蕩15～30 s，室溫靜置15 min，使痰液完全液化。打開試劑盒，用試劑配備的一次性吸管吸取液化的痰標本到規(guī)定的刻度，加入到反應盒的加樣孔，然后將反應盒放入檢測模塊。儀器進入倒計時自動檢測，當反應結束后讀取結果。儀器與試劑均購自美國賽沛公司。

三、統(tǒng)計學分析

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數資料采用“率(%)”表示。計算GeneXpert的檢測效能指標，指標計算方法：敏感度=真陽性例數/(真陽性例數+假陰性例數)×100%；特異度=真陰性例數/(真陰性例數+假陽性例數)×100%。

結 果

1355例患者包括活動性肺結核患者636例，非活動性肺結核患者719例。痰涂片檢測陽性173例，陰性1182例；痰培養(yǎng)陽性317例，陰性1038例；GeneXpert檢測陽性386例，陰性969例。以痰涂片檢查為標準，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為98.3%(170/173)和81.7%(966/1182)。以痰培養(yǎng)為標準，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為93.4%(296/317)和91.3%(948/1038)。以臨床診斷為標準，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為58.0%(369/636)和97.6%(702/719)；痰涂片檢測的敏感度和特異度分別為27.2%(173/636)和100.0%(719/719)；痰培養(yǎng)的敏感度和特異度分別為48.4%(308/636)和98.7%(710/719)。

296例痰培養(yǎng)陽性患者經比例法藥敏試驗檢測對利福平敏感241例，耐藥55例；GeneXpert檢測敏感245例，耐藥51例；以比例法藥敏試驗為標準，GeneXpert檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為85.5%(47/55)和98.3%(237/241)。

討 論

本次研究中GeneXpert檢測分別以痰涂片和痰培養(yǎng)為標準，其敏感度和特異度分別為98.3%、93.4%和81.7%、91.3%。國外有報道，GeneXpert檢測結核分枝桿菌的敏感度和特異度分別為92.2%和98.2%，檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為97.6%和98.1%[5]。國內報道GeneXpert檢測以痰涂片、痰培養(yǎng)為標準的敏感度和特異度分別為93.27%、91.93%和91.6%、95.55%[6]。以上報道的研究對象均來源于結核病專科醫(yī)院，而筆者本次研究選取的研究對象來源于縣級結核病防治所。?？漆t(yī)院的患者一般都是住院患者，患者的依從性較好，留取痰標本的質量有保證。本次研究GeneXpert檢測以痰涂片和痰培養(yǎng)為標準的特異度分別為81.7%和91.3%，特異度較高。

以臨床診斷為標準，痰涂片、痰培養(yǎng)和GeneXpert檢測的敏感度分別為27.2%、48.4%和58.0%，可見GeneXpert檢測的敏感度較高，這對于痰涂片檢測陰性，而培養(yǎng)還在等待時，在最短時間內來確定排菌患者有很大意義，但此方法不能鑒別死菌與活菌；而痰涂片、痰培養(yǎng)和GeneXpert檢測特異度分別為100.0%、98.7%和97.6%，可見GeneXpert檢測特異度略低，但其檢測時間較短，可在2 h得出結果，這對臨床用藥有一定的指導作用。

GeneXpert檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為85.5%和98.3%，與趙冰等[7]報告的結果相一致。GeneXpert檢測對利福平耐藥敏感度只有85.5%，比較低。世界衛(wèi)生組織建議如果將GeneXpert檢測應用于對利福平耐藥率較低的人群進行耐藥檢測時，對于檢測為對利福平耐藥的患者需要使用傳統(tǒng)藥敏試驗或其他分子生物學檢測進一步驗證，以避免假陽性[8]。

綜上，GeneXpert檢測的自動化程度、敏感度和特異度比較高，并且其檢測時間短，對實驗室的生物安全及對工作人員的技術水平要求不高，因此，很適合在基層實驗室應用。但由于GeneXpert只能檢測是否對利福平耐藥，并且受基層實驗室經濟條件的影響，其應用也受到了一定限制。