石 磊

（山東省濟(jì)南市平陰縣畜牧獸醫(yī)局，山東 濟(jì)南 250400）

胚胎移植是將具有優(yōu)良遺傳性狀的早期胚胎從供體母牛體內(nèi)取出，移植到另一頭生理狀態(tài)相同的母牛的子宮內(nèi)，使其繼續(xù)發(fā)育形成胎兒直到順利分娩的過程。胚胎移植涉及的技術(shù)環(huán)節(jié)較多，每一環(huán)節(jié)的工作都對胚胎移植的成功與否影響極大，需做好各環(huán)節(jié)的工作。

提供胚胎的母牛為供體牛，接受胚胎的母牛為受體牛。胚胎移植技術(shù)充分發(fā)揮了優(yōu)秀母牛的遺傳和繁殖潛力，增加了優(yōu)秀母牛的群體數(shù)量，對我國黃牛改良的意義重大。胚胎移植所涉及的技術(shù)環(huán)節(jié)較多，其中包括供、受體牛的選擇和飼養(yǎng)管理、超數(shù)排卵、人工授精、胚胎采集、受體牛的同期發(fā)情和胚胎移植等。胚胎的遺傳物質(zhì)來源于供體母牛和與之配種的公牛，而胚胎發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì)則來自于受體牛，因此，胚胎移植的每一環(huán)節(jié)的工作都對胚胎移植的成功與否都影響極大。

1 供受體肉牛的選擇與飼養(yǎng)管理

供體牛選擇品種特征明顯，具有較高生產(chǎn)性能的母牛，其遺傳性狀要求穩(wěn)定，并且要系譜清楚。而受體牛一般選擇當(dāng)?shù)氐狞S牛品種，應(yīng)選擇14～15月齡，體重在360kg以上的育成?；蚰挲g在2.5～5歲的1～2胎的成年母牛。供受體牛都要健康無病，繁殖性能良好，沒有流產(chǎn)史，發(fā)情周期正常，并且性器官的發(fā)育也要求正常。從外形上看母牛的體格要求較大、膘情保持在中等以上、性情溫馴，對長期空情，有流產(chǎn)史且性器官畸形的母牛不宜選擇作為供、受體母牛使用。

無論是供受體母牛都要進(jìn)行科學(xué)的飼養(yǎng)管理，合理的飼喂，提供適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)是影響母牛繁殖能力的主要因素，所提供的飼料要求多樣且品質(zhì)優(yōu)良，青飼料、粗飼料、精飼料以及各種飼料添加都要搭配合理，以保證肉牛攝入充足的營養(yǎng)物質(zhì)，同時還要保證母牛攝入充足且清潔的飲水。

2 供體牛的超數(shù)排卵處理

胚胎移植需要對供體母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，以獲得多枚胚胎，一般要求供體母牛的排卵數(shù)量要在10枚左右，如果排卵數(shù)量過多，會易起卵巢囊腫，并且排卵效果不穩(wěn)定，如果排卵過少則會降低胚胎移植的意義，還會造成胚胎難以采集。超數(shù)排卵主要使用的藥物有促卵泡素(FSH)、氯前列烯醇(PG)或陰道栓(CIDR)等，超數(shù)排卵過程中在發(fā)情后的第9～13天，連續(xù)4d早晚肌注促卵泡素，中間間隔12h，在注射后的第3天用氯前列烯醇處理?；蚩梢栽诠w牛發(fā)情期到來前的4d即發(fā)情周期的第16d注射促性腺激素，然后在出現(xiàn)發(fā)情狀況的當(dāng)天注射絨毛膜促性腺激素。

3 受體牛同期發(fā)情技術(shù)

同期發(fā)情技術(shù)是胚胎移植的一個重要的環(huán)節(jié)，可為超數(shù)排卵的供體牛在同一時間內(nèi)準(zhǔn)備足夠的用于移植的受體牛，通過與受體牛同期化處理可以使供、受體牛的生理狀態(tài)保持相同。在同期化處理時，發(fā)情時間與供體牛最好提前1d，并且受體牛的處理頭數(shù)一般為供體牛的5倍。常用的同期發(fā)情技術(shù)為前列腺法，可分為一次前列腺法和二次前列腺法，一次法是對處于發(fā)情周期第10d的受體牛一次肌注前列腺素2～4mL，誘導(dǎo)其發(fā)情，發(fā)情后第7天再進(jìn)行移植。二次法是對在第一次肌注前列腺素后的11d再次肌注前列腺素2～4mL，在發(fā)情后第7天移植。實(shí)際表明，注射二次法的效果要優(yōu)于注射一次法。

4 胚胎的采集與貯存

胚胎的采集在母牛發(fā)情配種后的第7天進(jìn)行，將發(fā)情當(dāng)天視為0d，實(shí)施沖胚，在沖胚前需要通過直腸法檢查卵巢黃體的個數(shù)，以判斷可沖出胚胎的個數(shù)，在沖胚前需要準(zhǔn)備好器械和沖胚液，所有的器械都要嚴(yán)格的消毒，沖胚液則要提前在35～37℃的水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。在操作時采用直腸把握法將沖卵管插入一側(cè)的子宮角的深部，注入沖卵液后將子宮角抬高，使沖卵液回流，并將其回收。一般一側(cè)的子宮角需要反復(fù)沖7次左右。沖胚結(jié)束后需要直接從沖管向子宮角內(nèi)灌注抗生素和氯前列烯醇。

采集的的胚胎需要進(jìn)行檢查，并對胚胎進(jìn)行鑒定和分級。首先要將胚胎回收，一般使用沉淀法，將回收液靜置20min后將上清去除，吸到液面還有2～2.5cm深時即可。胚胎的鑒定要在顯微鏡下觀察胚胎分裂與否、形態(tài)色調(diào)、均勻度、細(xì)胞的密度等情況，并將胚胎分分A、B、C、D4級。其中A、B、C級胚胎為可用胚胎，并且A、B級為可冷凍胚胎，C級胚胎只能用于鮮胚移植，D級胚胎為不可用胚胎。

一般采集的鮮胚需要進(jìn)行冷凍保存，以保持活力，可選擇常規(guī)冷凍法，將胚胎置于防凍液中平衡一段時間，然后裝管后以每分鐘降低0.3～0.5℃的速度降低至-7℃，植凍后溫度緩慢的降低至-35℃，平衡10min后迅速置于液氮中保存。

5 胚胎的解凍與移植

胚胎移植可分為鮮胚移植和凍胚移植。凍胚在解凍后可直接移植，先從液氮中取出細(xì)管，置于空氣中10s，然后再將其置于35℃溫水中10s，將封口端剪去，裝入移植槍。輸胚采用直腸把握法，在輸胚前要考慮胚胎的發(fā)育情況和采體牛的發(fā)情時間，一般輸胚前需要確定受體牛處于發(fā)情周期的6～8d，并還要確定卵巢上有明顯的黃體存在，并且輸胚還要在有黃體一側(cè)的子宮角深處，操作的方法與人工授精相同。

胚胎移植后要注意觀察受、供體牛的健康情況以及發(fā)情情況，對供體牛在下次發(fā)情時可正常配種，如果受體牛在胚胎移植后仍發(fā)情，則說明移植失敗，如果未表現(xiàn)出發(fā)情，則要觀察3～5個情期，并做好妊娠的診斷工作。