賈士杰

（黑龍江省家畜遺傳資源保護(hù)中心，黑龍江 哈爾濱 150069）

胚胎移植是利用價值高的供體母牛獲得多枚胚胎，然后移植給價值低的受體母牛的過程。足月妊娠所產(chǎn)的全同胞（兄弟和姊妹）具有供體母牛和與配種公牛的遺傳水平，受體母牛不影響其所懷犢牛的遺傳水平，而是僅僅作為一個孵化器。應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)，可以在推薦配種日期前對產(chǎn)后母牛沖胚胎，這樣就可以利用正常的等待期而不會耽誤配種計(jì)劃。奶農(nóng)還可以利用有發(fā)情表現(xiàn)并可正常排卵但不能受孕的老齡高產(chǎn)母牛來沖胚，提高其后代產(chǎn)量的價值肯定超過胚胎移植的費(fèi)用。

1 概況

胚胎移植（MOET）已經(jīng)不再是新技術(shù)了，1943年，在美國威斯康辛州首次報道了該技術(shù)；1951年，第一例手術(shù)法胚胎移植犢牛誕生；1964年，第一例非手術(shù)法胚胎移植犢牛出生；1971年，康奈爾大學(xué)移植了一枚取自5月齡青年母牛的胚胎。

超數(shù)排卵和胚胎移植計(jì)劃的執(zhí)行可以充分地加速畜群的遺傳進(jìn)展。對所有技術(shù)都得問這個問題：該技術(shù)可獲得的利潤是否超過其成本？目前估計(jì)，如果有若干供體牛在同一時間沖胚，這樣每頭牛的沖胚程序的預(yù)期成本是750～1000$，但若是只沖1頭供體，成本則要超過2倍。為了使MOET計(jì)劃有利可圖，供體母牛必須是遺傳水平高的個體并且不只是本群中的最好個體就行。使用MOET計(jì)劃來改良畜群的遺傳性狀在短時間內(nèi)盈利是不可能的，但如果其優(yōu)秀后代可以高價出售則可以彌補(bǔ)高額成本而獲利。

2 原理

超數(shù)排卵是給母畜注射激素（主要是促卵泡素-FSH），可以使卵巢變大（每個卵泡包含1個卵母細(xì)胞）、成熟、破裂并釋放卵子。公牛每天可以產(chǎn)生成千上萬個精子，然而母牛每17～21d才能產(chǎn)生1個卵子（有時2個卵子）。通過注射激素，1頭牛在1個發(fā)情周期中可獲得幾個卵子（5～50個）。通過注射激素同樣也可以從幼年母牛獲得大量的卵子。

卵巢中的卵子都存在于大卵泡中。超排的基本原理就是通過肌肉或皮下注射激素，刺激大量的卵泡發(fā)育，常用促卵泡素（FSH）來激活卵泡。在確定發(fā)情的6～12d后，連續(xù)4～5d內(nèi)每天2次注射FSH并在注射FSH的倒數(shù)第2天注射前列腺素。FSH的總劑量應(yīng)該是33～37mg，遞減注射量以避免發(fā)情強(qiáng)度降低。盡管使用前列腺素后，經(jīng)FSH處理的個體和未經(jīng)FSH處理的個體有相似的發(fā)情強(qiáng)度和持續(xù)時間，但從前列腺素處理到發(fā)情的時間間隔來看，F(xiàn)SH處理個體所用時間更短而且變化范圍更大超排牛（38±12）h，而對照組牛（56±3）h。

有較多卵泡的母牛在排卵后釋放更多的孕酮，其結(jié)果是加速了卵子的遷移。由于排卵發(fā)生的時期長，需要對供體進(jìn)行重復(fù)人工授精，以保證更多卵子可以受精。母牛通常在站立發(fā)情后的12h和24h時進(jìn)行人工授精，而有些程序在2d中進(jìn)行4次人工授精。胚胎將要在子宮中停留4～5d，但是通常是在第6～7d沖卵（桑葚胚期），每個供體可望沖出5～12個優(yōu)質(zhì)受精卵。通常沖出的卵越多，可用率越低（然而，總可用卵數(shù)隨著沖出的總數(shù)增長而增長）。沖卵總數(shù)可能是0,也可能超過50個，但平均是6～8個。胚胎移植妊娠率一般是75%，因此每次沖胚平均妊娠4頭就是非常成功的。

3 操作

最常用的回收和移植胚胎的方法是非手術(shù)法。在收集過程中，使用福氏三通管及少于1pt（550mL）的沖卵液，從供體的子宮中逐個沖出胚胎。把胚胎移植給受體所使用的技術(shù)與人工授精相似。將胚胎連同少量沖卵液吸入精液細(xì)管中，輸精槍要充分插入到卵巢有黃體的一側(cè)子宮角中。

受體母牛和供體母牛之間的同步發(fā)情是成功的關(guān)鍵。受體和供體排卵時間相差12h以上，就有可能降低胚胎在受體子宮妊娠的成功率。子宮內(nèi)壁可以分泌出許多胚胎營養(yǎng)物質(zhì)，而這些營養(yǎng)物質(zhì)在這個關(guān)鍵時期不斷變化。如果不能立即移植，胚胎可以冷凍保存。常用的冷凍保護(hù)劑是乙烯乙二醇或丙三醇。待有了合適的受體時可解凍胚胎后再移植，然而經(jīng)過冷凍和解凍的胚胎，其移植妊娠率不如鮮胚高。

4 體外成熟（IVM）和體外受精（IVF）的相關(guān)技術(shù)

卵子在培養(yǎng)皿中（體外）可以成熟和/或受精的新技術(shù)賦予人類更大的力量，對奶牛的繁殖過程加以控制。利用這一技術(shù)，不孕或青春期前的個體都可以繁殖。在陰道超聲波圖像的指導(dǎo)下，從超排個體的卵泡中抽吸出未成熟卵母細(xì)胞，然后培養(yǎng)約24h，卵子成熟后在培養(yǎng)基中添加獲能的精液使卵母細(xì)胞受精。這些受精的卵母細(xì)胞需要進(jìn)一步培養(yǎng)直到早期囊胚階段。在該階段，這些囊胚可以移植給受體或者冷凍保存。由IVM和IVF孕育的個體與常規(guī)人工授精產(chǎn)生的個體相比，異常率高、妊娠期變化大、出生重變化大，并且難產(chǎn)和死胎的發(fā)病率也高。