趙源慧，楊喆茗，白 冰，徐 建*，李長惠，王寶成

（1.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司 吉林省中藥標(biāo)準(zhǔn)化關(guān)鍵工程技術(shù)重點實驗室，長春 130103；2.通藥制藥集團(tuán)股份有限公司，吉林 通化 134000）

益腎安神口服液由熟地黃、五味子、巴戟天、枸杞子、遠(yuǎn)志、山茱萸、續(xù)斷等16味中藥精制而成，具有健脾補腎，養(yǎng)心安神的功效，用于腰膝酸軟，夜頻尿多，食欲減退，大便稀薄，精疲乏力，失眠健忘者[1-6]。本文采用HPLC方法建立益腎安神口服液的特征圖譜， 為全面評價益腎安神口服液的質(zhì)量提供依據(jù)及方法。

1 材料

1.1 儀器 Ultimate 3000高效液相色譜儀7.2工作站（美國戴安公司），BT125D天平（賽多利斯）；KH 5200 E型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 五味子醇甲對照品（批號：110857-200608）購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、無水乙醇、磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；益腎安神口服液由吉林修正藥業(yè)、通藥制藥集團(tuán)股份有限公司提供，批號為140701、140702、140703、140801、140802、140803、140901、140902、140903、140101。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱Kromasil 100-5 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈（A）-水（B），洗脫梯度：0～10 min，5%A～40% A；10～35 min，40% A～70% A；35～60 min，70% A～100% A；流速：1 mL/min；檢測波長為210 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品適量，加甲醇制成每1 mL含49.5 μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取益腎安神口服液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗 分別精密吸取同一批供試品溶液各10 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，按2.1項下色譜條件檢測，采用中藥指紋圖譜相似性評價軟件對5次測定結(jié)果進(jìn)行計算，其相似度均為0.99以上，以五味子醇甲為參照峰，各共有峰的相對保留時間RSD值為0%～0.08%，結(jié)果表明儀器精密度好。

2.5 重復(fù)性試驗 取同一批次樣品（批號：140701）共6份，按2.3項下制備，各精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件檢測，6次測定的圖譜其相似度均為0.98以上，以五味子醇甲為參照峰，各共有峰的相對保留時間RSD為0%～0.23%。結(jié)果表明同一批次的6份供試品特征圖譜相似，方法重現(xiàn)性良好，符合特征圖譜的要求。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取2.5項下同一供試品溶液，分別在0、3、6、9、12、24 h進(jìn)行檢測，獲得不同時間進(jìn)樣的供試品色圖譜，其相似度RSD為0%～0.42%。結(jié)果表明，在24 h內(nèi)益腎安神口服液的特征圖譜基本穩(wěn)定，符合特征圖譜的要求。

2.7 標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜的建立 取10批樣品，按2.3項下制備，各精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件檢測，得到10批樣品的高效液相色譜圖。將10批益腎安神口服液的測試數(shù)據(jù)導(dǎo)入國家藥典委員會《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2004A）》軟件進(jìn)行處理，經(jīng)多點校正，將譜峰自動匹配，生成共有模式，以五味子醇甲峰作為參照峰S，生成對照圖譜。

從以上結(jié)果可以看出，10批益腎安神口服液圖譜中共有峰的相對保留時間基本一致，RSD均小于2%；10批益腎安神口服液圖譜與對照圖譜相似度均大于0.85，符合《中國藥典》中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究制定技術(shù)要求，所建立的益腎安神口服液HPLC對照圖譜可作為益腎安神口服液的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。見表1、表2。

表1 益腎安神口服液10個共有峰的相對保留時間

表2 益腎安神口服液相似度評價

2.8 特征圖譜特征峰歸屬 按照益腎安神口服液標(biāo)準(zhǔn)處方及制法，制備缺熟地黃、五味子、遠(yuǎn)志、巴戟天、枸杞子、山茱萸、續(xù)斷等16味藥材的陰性樣品。分別取上述16種陰性樣品，按2.3項下方法制備，按2.1項下色譜條件檢測，將生成的陰性樣品圖譜與益腎安神口服液標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜進(jìn)行比較，確定特征峰的歸屬。經(jīng)圖譜比較，1號峰與8號峰歸屬為五味子藥材；2號峰、3號峰為續(xù)斷藥材；4號峰、6號峰為遠(yuǎn)志藥材；5號峰為小茴香藥材；9號峰、10號峰歸屬為山茱萸藥材。

3 小結(jié)

本產(chǎn)品為口服液劑型，供試品溶液制備方法考察了甲醇直接溶解及超聲處理30 min 2種方式，選擇共有特征峰中最高的色譜峰五味子醇甲峰為指標(biāo)，結(jié)果超聲處理對測定結(jié)果無影響，增加提取時間，測定值也不再增加，為方便操作確定樣品提取方法為甲醇直接溶解[7-11]。

本實驗探索考察了特征圖譜的色譜系統(tǒng)及檢測波長。研究中嘗試了甲醇-水系統(tǒng)的梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)色譜峰保留時間不夠穩(wěn)定，色譜圖變化較大。乙腈-水系統(tǒng)較穩(wěn)定，但不同梯度洗脫結(jié)果存在較大差異，經(jīng)反復(fù)試驗確定本實驗所述的流動相梯度分離效果及色譜峰形最佳。檢測波長比較了210、245、278、320 nm，發(fā)現(xiàn)210 nm 波長處檢測特征色譜峰較多，各特征色譜峰相對保留時間穩(wěn)定，雜質(zhì)干擾較少，故確定210 nm為檢測波長[12-17]。

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[3]廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn): 2冊[M].廣州:廣東科技出版社, 2011:347-353.

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