周函鈺 余平 吳國(guó)清

浙江省立同德醫(yī)院 浙江 杭州 310012

酒萸肉與熟地黃是臨床常用的中藥，本文從煎液層面觀察酒萸肉-熟地黃（簡(jiǎn)稱“酒萸肉-地黃”）中馬錢苷、莫諾苷含量變化，研究其配伍的優(yōu)勢(shì)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品：酒萸肉（河南省宛西制藥股份有限公司，批號(hào)：1200051）；熟地黃（衡州南孔中藥有限公司飲片廠，批號(hào)：130515）；馬錢苷（批號(hào)111640-200604）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所；莫諾苷購(gòu)于鼎瑞化工（上海）有限公司（批號(hào)為25406-64-8，HPLC歸一化測(cè)定純度≥98%）；乙腈（色譜純）與甲醇（分析純）均購(gòu)自江蘇漢邦科技有限公司；所有實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材：梅特勒XS-105電子分析天平(METTLER，TOLEDO)；梅特勒AL-204電子天平(METTLER，TOLEDO)；DZF-6050真空干燥箱(上海一恒有限公司)；DHG-9240A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒有限公司)，YBIA真空恒溫干燥箱（天津光學(xué)儀器廠）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海梅悉儀器有限公司）；98-I-B電子控溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）；島津LC-20AT高效液相色譜儀；LC solution色譜工作站。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：Inertsil ODS-SP C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為：乙腈：水=15：85，流速：1ml/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10μl。

2.2 配伍水煎液與單煎酒萸肉中馬錢苷與莫諾苷的比較：分述如下。

2.2.1 酒萸肉單煎液供試品制備：取酒萸肉50g，加10倍量水浸泡1h，置500ml雙頸圓底燒瓶中回流提取，沸騰計(jì)時(shí)，每隔15min從其中取10ml提取液，稱定重量，用熱水迅速補(bǔ)足損失的重量，至180min為止。精密吸取水煎液各1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即作為測(cè)定馬錢苷、莫諾苷供試品。

2.2.2 酒萸肉-地黃供試品制備：分別取地黃100g、酒萸肉50g，加10倍量水浸泡1h，置1500ml雙頸圓底燒瓶中進(jìn)行回流提取，至沸騰開始計(jì)時(shí)，每隔15min從其中取10ml提取液，稱定重量，用熱水迅速補(bǔ)足損失的重量，至180min為止。煎煮各時(shí)間點(diǎn)得到的水煎液，精密吸取1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即作為測(cè)定馬錢苷、莫諾苷供試品。

2.2.3 酒萸肉、地黃單煎、混煎液制備：取酒萸肉50g、地黃100g，加10倍量水浸泡1h，圓底燒瓶中進(jìn)行回流提取，至沸騰開始計(jì)時(shí)，煎煮1h。取酒萸肉水煎液100ml，地黃水煎液200ml，煎煮1h。取酒萸肉水煎液10ml，地黃水煎液20ml，物理混合（2份），取1份物理混合液再煎煮1h。精密吸取酒萸肉水煎液，酒萸肉-地黃配伍煎液，酒萸肉-地黃物理混合煎液、酒萸肉-地黃物理混合再煎煮煎液1ml，置水浴上蒸干，加入適量甲醇溶解，離心，定量轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶，少量多次轉(zhuǎn)移，定容，即為供試品。

2.3 固形物的比較：將2.2項(xiàng)下得到提取液3000r/min離心，從中精密量取5ml，精密稱定，置恒重的蒸發(fā)皿中，濃縮、干燥至恒重，稱量，得固形物重量。

2.4 結(jié)果：按照中國(guó)藥典方法，測(cè)定酒萸肉-地黃配伍水煎液中活性成分的含量，見(jiàn)圖1～6，表1～2。

圖1 莫諾苷、馬錢苷對(duì)照品的HPLC圖譜

圖2 酒萸肉單煎液不同時(shí)間HPLC圖譜

圖3 酒萸肉-地黃配伍不同時(shí)間點(diǎn)HPLC圖譜

圖4 酒萸肉單煎液、酒萸肉-地黃配伍對(duì)比HPLC圖譜

表1 酒萸肉、酒萸肉-地黃煎液中馬錢苷、莫諾苷含量

圖5 酒萸肉、藥對(duì)水煎液中馬錢苷和莫諾苷的煎出曲線

圖6 各樣品中馬錢苷和莫諾苷的溶出率HPLC圖譜

表2 各樣品中馬錢苷和莫諾苷的含量

2.5 酒萸肉-地黃配伍水煎液中固形物的比較：將2.2項(xiàng)下得到提取液3000r/min離心，從中精密量取5ml，精密稱定，置恒重的蒸發(fā)皿中，濃縮、干燥至恒重，稱量，計(jì)算煎出率，見(jiàn)圖7。

圖7 酒萸肉、酒萸肉-地黃配伍不同時(shí)間點(diǎn)的固形物

3 討論

本文從水煎液來(lái)觀察酒萸肉-地黃配伍后活性成分變化，研究了酒萸肉與地黃配伍時(shí)馬錢苷、莫諾苷的變化規(guī)律。采用先對(duì)單味藥材進(jìn)行煎煮，然后對(duì)單煎液進(jìn)行配伍的思路可以消除藥材共煎過(guò)程中酒萸肉組分和熟地組分之間的相互作用。按照經(jīng)典配伍（酒萸肉：地黃=1：2），酒萸肉單煎液中馬錢苷含量為0.2945mg/ml，莫諾苷含量為0.7015mg/ml；與地黃配伍后，馬錢苷含量為0.3615mg/ml，莫諾苷含量為1.0380mg/ml。提示酒萸肉-地黃配伍具有協(xié)同煎出的作用，有利于酒萸肉中有效組分的溶出。中藥臨床用藥的特點(diǎn)之一就是復(fù)方配伍，探討中藥配伍過(guò)程中成分的變化，為深入研究中藥作用機(jī)理，加速中藥現(xiàn)代化提供了一條新的思路。