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山西管涔山林區(qū)傳統(tǒng)食用菌紅水皮的DNA分子鑒定

2018-03-19 07:58董淑英李素玲
山西農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年3期
關(guān)鍵詞:擔(dān)子林區(qū)蘑菇

劉 虹 ,董淑英 ,許 晶 ,李素玲

(1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,山西太原 030031;2.忻州市科技局,山西忻州 034000)

紅水皮是山西管涔山林區(qū)出產(chǎn)的一種肉紅色、個體比較小的特產(chǎn)蘑菇。管涔山當(dāng)?shù)厝送ǔ0压襟w肥大、香味濃郁的森林里的野生食用蘑菇叫銀盤,而將菌肉較薄的種類叫水皮。紅水皮是當(dāng)?shù)刈顬槌R姷乃つ⒐剑磕晗?、秋兩季在華北云杉Picea wilsonii Mast和華北落葉松(紅杄)Larix principis-rupprechtii Mayr林內(nèi)草地上生長,散生或者群生,有時形成蘑菇圈。當(dāng)?shù)厝送ǔ⑵溆瞄_水煮熟調(diào)涼菜或者做湯,味道雖然不濃,但是也別有滋味。查閱此前的山西野生食用菌類相關(guān)專業(yè)文獻[1-10],山西管涔山紅水皮蘑菇并沒有發(fā)現(xiàn)對應(yīng)的拉丁學(xué)名。

山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所育種室課題組首次采用nr DNA-ITS分子方法,對2017年采自山西管涔山林區(qū)的紅水皮蘑菇進行了鑒定分析,并結(jié)合子實體形態(tài)特征,確認其科學(xué)名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba(Pers.)Kumm.。

1 材料和方法

1.1 標本采集

擔(dān)子果樣本于2017年7—9月采自山西省中北部寧武縣管涔山一帶的華北落葉松Larix principis-rupprechtii Mayr和華北云杉Picea wilsonii Mast林中草地上,共3份,分別編號為FANM99,LH170750,LH170925。新鮮的擔(dān)子果標本經(jīng)45℃烘干后保存于山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所和首都師范大學(xué)標本館(BJTC)。

1.2 形態(tài)學(xué)方法

將擔(dān)子果的宏觀特征放在手持放大鏡和體視顯微鏡下進行觀察和描述,主要包括擔(dān)子果的形狀、大小、顏色、菌褶及菌柄特征等。

將擔(dān)子果的顯微結(jié)構(gòu)特征在北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室光學(xué)顯微鏡下進行觀察。首先采用手術(shù)刀進行徒手切片,以蒸餾水、3%KOH作為浮載劑制作水封片。用棉蘭(cotton blue)和梅氏試劑(Melzer)來檢驗擔(dān)孢子壁有無喜蘭和淀粉質(zhì)反應(yīng)。

1.3 分子方法

本研究在北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室進行,研究樣本的DNA提取、PCR以及測序方法等完全采用了FAN等[11-12]研究塊菌屬物種所使用的方法。本研究比對的DNA序列下載自NCBI數(shù)據(jù)庫,提取和測序的nr DNA-ITS序列采用BLAST軟件在NCBI上進行比對,比對結(jié)果中相似性高于97%的序列用于本研究分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 nr DNA-ITS比對結(jié)果

3份樣本之間nr DNA-ITS片段相似性高于99%,證實為同一物種。其中,樣本FANM99在NCBI數(shù)據(jù)庫比對,結(jié)果顯示,本樣本與NCBI數(shù)據(jù)庫中8條Infundibulicybe gibba名下序列相似值高于97%(表1),結(jié)果證實這些序列與山西省管涔山林區(qū)出產(chǎn)的紅水皮蘑菇為同一個物種。

表1 紅水皮樣本FANM99的ITS片段的BLAST結(jié)果

2.2 形態(tài)學(xué)結(jié)果

對采自山西管涔山林區(qū)樣本進行觀察,紅水皮蘑菇形態(tài)學(xué)特征如圖1所示。

擔(dān)子果小到中型,菌蓋初期扁半球形,光滑,無毛,后漸平展、稍下凹到最后強力下凹呈漏斗狀,邊緣整齊,無條紋,中部有時有一小凸起,淺黃褐色、黃褐色、肉褐色或有點淺紅褐色,直徑1.5~6 cm;菌肉白色,較薄;菌褶白色,不等長,較密,延生;菌柄較細,圓柱狀或向下漸漸變細,2~8 cm長,0.5~0.9 cm粗,白色或淺肉褐色,表面近平滑,初期中實,后近中空;擔(dān)孢子橢圓形或杏仁狀,有一小尖,(6~9)μm×(4~5)μm,無色,表面光滑,非淀粉質(zhì)。

3 結(jié)論

從產(chǎn)于山西管涔山林區(qū)的紅水皮蘑菇提取的ITS-DNA片段在NCBI上用BLAST比對,結(jié)果顯示,與樣本相似度高于97%(同時滿足QC大于88%)的8條來自北美洲美國、墨西哥,歐洲的意大利,亞洲的朝鮮、日本以及中國的序列名稱均為深凹漏斗傘Infundibulicybe gibba;從宏觀形態(tài)的擔(dān)子果和微觀特征的擔(dān)孢子分析,紅水皮蘑菇也完全符合深凹漏斗傘。因此,綜合DNA分子和形態(tài)學(xué)特征分析,確認山西管涔山的紅水皮蘑菇的科學(xué)名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba(Pers.)Kumm.,主要異名為 Clitocybe gibba(Pers.)Kummer,在我國文獻中也叫深凹杯傘[2]或杯傘[3],是一種可以食用的野生蘑菇。四川九寨溝地區(qū)新近發(fā)現(xiàn)的紅漏斗傘Infundibulicybe rufa[13]與本種相似,區(qū)別在于紅漏斗傘菌蓋和菌柄顏色為紅褐色,而深凹漏斗傘顏色為肉褐色或黃褐色。深凹漏斗傘在我國北部各地和南部高海拔地區(qū)均有分布[2-3,7-10,14-17],是一個北溫帶物種[18-20]。深凹漏斗傘在管涔山林區(qū)有一個類似的種類,即當(dāng)?shù)刂囊吧秤镁贩N紅銀盤,這2個物種形狀和顏色很像,區(qū)別在于紅銀盤個體明顯較大,柄粗壯,肉厚,就像大一號的紅水皮。此外,紅水皮產(chǎn)季較長,每年從初夏到深秋在山西管涔山都極為常見,而紅銀盤通常只在秋季發(fā)生。

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