楊建勝,孫萬(wàn)倉(cāng),2,劉自剛,2,劉海卿,楊 剛,張樹(shù)娟,張 晶,方 彥,2,武軍艷,2,李學(xué)才,2
(1.甘肅省干旱生境作物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅省作物遺傳改良與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 甘肅 蘭州 730070;2.甘肅省油菜工程技術(shù)研究中心,甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 甘肅 蘭州 730070)
化學(xué)誘變具有操作簡(jiǎn)單、突變性狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),是創(chuàng)制植物新種質(zhì)的有效途徑,化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯(ethyl methane sulphonate,EMS)具有點(diǎn)突變頻率高且多為顯性突變體以及突變體易于篩選等優(yōu)點(diǎn)[1]。關(guān)于EMS誘變產(chǎn)生突變體的研究已有大量報(bào)道,王英培等[2]用EMS處理大豆,篩選出一批高蛋白(45%~50%)、高亞油酸(60%以上)、低亞麻酸的優(yōu)良突變系;曲高平等[3]用EMS處理甘藍(lán)型油菜中雙9號(hào)干種子,從M2突變體庫(kù)中篩選到3株苯磺隆抗性突變體,創(chuàng)建了包括子葉、葉片、花器、株型、角果等多器官變異類型的突變體庫(kù);廖曉英等[4]利用EMS處理甘藍(lán)型油菜玻里馬胞質(zhì)雄性不育系(polcms)的保持系2B種子,從田間M2誘變?nèi)后w中篩選獲得多分枝和長(zhǎng)角果等占M2誘變?nèi)后w7.4%的1 495個(gè)變異株;薛遠(yuǎn)超等[5]分別從GH18和中雙9號(hào)的EMS誘變后代中篩選得到14個(gè)和2個(gè)強(qiáng)耐濕性材料;陳潔等[6]也通過(guò)EMS誘變甘藍(lán)型油菜獲得了耐濕種質(zhì)資源。此外,EMS處理對(duì)油料作物脂肪酸品質(zhì)改良具有重要作用,是一種安全有效的育種方法。黃永娟等[7]用0.4% EMS誘變甘藍(lán)型油菜NJ7982種子,從M2篩選得到1個(gè)油酸含量為76.15%的突變株;張宏軍等[8]采用濃度1.5%EMS處理甘藍(lán)型油菜后發(fā)現(xiàn)其對(duì)油酸含量有一定的影響,同時(shí)發(fā)現(xiàn)高油酸材料FAD2A中第205位殘基天冬氨酸變成甘氨酸,F(xiàn)AD2B中第241位殘基酪氨酸變成苯丙氨酸,并且二者都發(fā)生在油酸減飽和酶催化中心,從而影響蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),導(dǎo)致油酸含量提高;德國(guó)學(xué)者Hans-Joachim Harloff等[9]發(fā)現(xiàn)EMS能使甘藍(lán)型油菜品質(zhì)性狀發(fā)生改變,通過(guò)誘變得到了低芥酸的突變體。北方地區(qū)冬季嚴(yán)寒、干旱,自然條件嚴(yán)酷,強(qiáng)冬性白菜型冬油菜抗寒性優(yōu)異,是我國(guó)北方旱寒區(qū)唯一能夠越冬的冬油菜,近年來(lái)生產(chǎn)發(fā)展十分迅速,正在成為該區(qū)重要油料作物和生態(tài)作物,但北方強(qiáng)冬性白菜型冬油菜品種品質(zhì)不好,芥酸與硫苷含量高,缺乏優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源,同時(shí)株型不適應(yīng)現(xiàn)代種植業(yè)發(fā)展要求,農(nóng)藝性狀等也不盡理想。因此,創(chuàng)制白菜型冬油菜優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源、改良北方白菜型冬油菜的品質(zhì)和農(nóng)藝性狀是北方強(qiáng)冬性白菜型冬油菜育種研究的重要內(nèi)容,本試驗(yàn)以白菜型冬油菜隴油7號(hào)為材料,用不同濃度EMS溶液進(jìn)行誘變處理,以期明確EMS誘變對(duì)北方強(qiáng)冬性白菜型冬油菜的品質(zhì)和農(nóng)藝性狀的影響,為白菜型油菜的品質(zhì)改良提供依據(jù)。
白菜型冬油菜超強(qiáng)抗寒品種隴油7號(hào)種子,由甘肅省作物遺傳改良與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供,化學(xué)誘變劑為甲基磺酸乙酯(EMS),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,原液濃度為10 mol·L-1。
2013年9月在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)農(nóng)田進(jìn)行大田試驗(yàn),試驗(yàn)地肥力中等,播前翻耕整地,清除雜草,將用5種不同濃度EMS溶液處理后的種子于2013年9月8日播種,試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),開(kāi)溝條播,播深4 cm左右,深淺一致,行距20 cm,株距7 cm左右,播后及時(shí)沿播種溝鎮(zhèn)壓保墑,此后常規(guī)管理。室內(nèi)試驗(yàn)在甘肅省作物遺傳改良與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
1.3.1 EMS處理方法 用0.1 mol·L-1、pH值7.0的磷酸緩沖液配制不同濃度(0、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%)的EMS溶液,分別標(biāo)記為CK、T1、T2、T3、T4。選取大小均勻,形狀飽滿的隴油7號(hào)種子4 500 粒,置于15個(gè)10 mL的離心管中(每300粒裝1個(gè)離心管),先用蒸餾水浸泡種子10 h,隨后倒掉蒸餾水,倒置離心管于濾紙上吸干種子表面水分,再向離心管中加入不同濃度的EMS溶液,在恒溫(22℃)下處理6 h,處理完后用無(wú)菌水沖洗種子10次,流水沖洗過(guò)夜。種子晾干后于大田播種,每處理重復(fù)3次,按常規(guī)方法管理。
1.3.2 M1的田間觀察方法 播種1周后調(diào)查統(tǒng)計(jì)成苗率,于苗期觀測(cè)植株的形態(tài)特征(子葉形狀、心葉色、基葉葉型等),蕾薹期觀察植株的株型、葉形、葉色、現(xiàn)蕾情況等,花期調(diào)查花器顏色、形態(tài)和育性等,成熟期各處理每重復(fù)隨機(jī)選取15株對(duì)株高、分枝部位、有效分枝數(shù)、主花序有效長(zhǎng)度、主花序有效角果數(shù)、全株有效角果數(shù)、角果長(zhǎng)度、角粒數(shù)、千粒重等性狀進(jìn)行考種以及生育期的調(diào)查,單株編號(hào)收獲進(jìn)行品質(zhì)測(cè)定。
1.3.3 M2種子的品質(zhì)分析方法 2015年6月收獲M2種子,單株編號(hào)收獲,種子脫粒晾干后用近紅外分析光譜儀器(上海費(fèi)爾伯恩精密儀器有限公司,BOEN-SUP-2700)[10]測(cè)定軟酯酸、硬酯酸、芥酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳烯酸、含油量(CE)、硫苷(GSL)、水分及粗蛋白(GP),重復(fù)3次。
數(shù)據(jù)處理和分析均采用Excel和SPSS 16.0軟件。
用EMS處理的種子播種1周后田間成苗率的調(diào)查結(jié)果表明,EMS對(duì)成苗率有抑制作用,且隨著濃度的增加抑制作用增強(qiáng),苗致死率增高。經(jīng)0.6%濃度處理后種子的成苗率為52%,說(shuō)明此濃度下苗致死率接近50%,從發(fā)芽時(shí)間來(lái)看,與CK相比,所有EMS處理后種子出苗較慢且不均勻,經(jīng)高濃度EMS(T4)處理后,種子發(fā)芽后子葉黃化而迅速死亡,導(dǎo)致成苗率只有37%(表1)。
表1 不同濃度EMS處理后種子成苗率/% Table 1 Seeding rate after treatment with different concentrations of EMS
注:成苗率指觀察當(dāng)天田間的植株數(shù)占種子總數(shù)的百分比;不同字母表示在0.01水平有顯著差異(P<0.01)。
Note: seeding rate refers to the percentage of the number of plants observed in the field to the total number of seeds; different letter indicated significant difference at the 0.01 level(P<0.01).
2.2.1 對(duì)苗期植株的影響 EMS對(duì)苗期植株的影響主要反映在植株的生長(zhǎng)量上,即植株的形態(tài)大小。由圖1和表2可知,經(jīng)EMS處理的油菜生長(zhǎng)普遍較CK弱,表現(xiàn)為CK>T1>T2>T3>T4,同一濃度下植株的長(zhǎng)勢(shì)差異不明顯,說(shuō)明EMS對(duì)油菜的生長(zhǎng)發(fā)育有一定的抑制作用,且抑制作用與濃度呈正相關(guān),且在高濃度EMS處理下,出現(xiàn)葉片黃化的現(xiàn)象(圖1-D、E),這將影響植株后期的生長(zhǎng)發(fā)育。
表2 冬油菜五葉期植株的干鮮重/g Table 2 Fresh and dry weight of plants at five-leaf stage
2.2.2 植株葉片產(chǎn)生的變異性狀 不同濃度EMS處理隴油7號(hào)種子,各濃度下,蕾薹期植株田間表現(xiàn)有葉片卷曲、皺縮、畸形、黃化等變異性狀。CK的葉片厚而葉色深(圖2-A),而在M1植株中出現(xiàn)了葉片邊緣下卷,葉片變小(圖2-B)、葉片皺縮(圖2-C)、葉尖畸形(圖2-D)、整個(gè)葉片畸形(圖2-E)、一半白葉一半綠葉(圖2-F、G)、黃斑葉(圖2-H、I)、葉邊緣黃化以及黃化葉(圖2-J、K、L)等變異植株。在這些變異性狀上,后期一些植株慢慢死亡或死蕾而不能收獲種子。
圖1 不同濃度EMS處理后油菜的田間表現(xiàn)
Fig.1 Rapeseed field performance of different EMS treatments
2.2.3 植株花器官產(chǎn)生的變異性狀 白菜型油菜隴油7號(hào)的花序?yàn)榭偁顭o(wú)限花序,正?;ㄓ?個(gè)花瓣,呈十字對(duì)稱分布,顏色為黃色(圖3-A),但在誘變后代中出現(xiàn)了不正常花,在花瓣數(shù)目上出現(xiàn)了2個(gè)花瓣的植株,另外2個(gè)花瓣萎縮而不發(fā)育(圖3-B、C);3個(gè)花瓣的植株,1個(gè)花瓣萎縮(圖3-D);5個(gè)花瓣的植株,在正常花瓣的下面又疊生出1個(gè)花瓣來(lái)(圖3-E);6個(gè)花瓣的植株,也是在正?;ò甑南旅姣B生出1個(gè)花瓣,且有3個(gè)花瓣連生在一起(圖3-F)。在花瓣形態(tài)上出現(xiàn)了花瓣卷曲、花瓣皺縮變小的變異株(圖3-G、H),也有花瓣大小不一且不對(duì)稱的不正?;?圖3-I、J)。在花瓣顏色方面出現(xiàn)了黃白相間花的植株(圖3-I、J)及白花植株(圖3-K),白花植株的花瓣較小而整個(gè)花瓣全是白色。此外,還出現(xiàn)了多柱頭而無(wú)雄蕊和花瓣的畸形變異花(圖3-L)。
2.2.4 對(duì)成熟期植株的影響 在成熟期各處理隨機(jī)選取15株進(jìn)行考種,由表3可知,EMS對(duì)株高的影響是隨著EMS濃度的增加,株高逐漸降低,各濃度下株高與CK的差異達(dá)到顯著或極顯著水平。隨EMS濃度的增加有效分枝數(shù)增多,這主要表現(xiàn)為植株的叢生現(xiàn)象,與CK相比,分枝數(shù)多但株型矮小、葉片較小、莖桿纖細(xì)、長(zhǎng)勢(shì)較弱,矮化叢生是這一時(shí)期典型的變異特征。EMS對(duì)其它性狀的影響都是隨著EMS濃度的增加各性狀發(fā)育受到抑制,T4中,除有效分枝數(shù)和角果長(zhǎng)度外,其它性狀與CK的差異均達(dá)到顯著或極顯著水平,說(shuō)明EMS濃度越高,其對(duì)各性狀的發(fā)育抑制程度越高。此外,EMS對(duì)株高、主花序有效角果數(shù)和全株有效角果數(shù)的影響最大,株高變小,有效角果數(shù)變少,這也是其影響單株產(chǎn)量的主要原因。
圖2 冬油菜EMS誘變后代在葉片性狀上的變異表現(xiàn) Fig.2 Leaf morphological traits of the mutants induced by EMS
圖3 冬油菜EMS誘變后代在花器上的變異表現(xiàn) Fig.3 Morphological traits of floral organ of the mutants induced by EMS表3 不同濃度EMS處理后油菜成熟期植株的田間表現(xiàn) Table 3 Agronomic traits of plants at maturity after treatment with different concentration EMS
注:*和**分別表示與CK相比在0.05和0.01水平上差異顯著。Note: *, ** significant difference atP<0.05 and 0.01 levels, respectively.
經(jīng)調(diào)查,各濃度處理下植株的生育期隨著EMS濃度的增加而延長(zhǎng),CK的生育期為288 d左右,T2的生育期為295 d,較CK延長(zhǎng)1周左右,而T4的生育期較CK推遲2周左右,這可能是EMS對(duì)其植株在各個(gè)生育期的生長(zhǎng)發(fā)育都有一定的抑制作用所致,從M1植株的各個(gè)生育期來(lái)看,苗期植株的變異不大,變異主要反映在抽薹期和花期。
由表4可知,軟酯酸與油酸,亞油酸與亞麻酸,芥酸與硬脂酸、亞麻酸在P=0.05水平上相關(guān)性不顯著,其它脂肪酸間均存在顯著或極顯著相關(guān)關(guān)系,油酸除與亞油酸呈極顯著正相關(guān)(r=0.374)外,與硬脂酸、亞麻酸、二十碳烯酸、芥酸間均呈極顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r依次為-0.706、-0.744、-0.962、-0.615。在白菜型油菜品質(zhì)改良育種中,獲得雙低(低硫苷、低芥酸)油菜新品種以及油酸含量高芥酸含量低的突變體材料是育種工作者的理想目標(biāo),油酸與芥酸間的負(fù)相關(guān)性,體現(xiàn)出獲得理想突變體材料的可能性,為白菜型油菜品質(zhì)改良育種提供理論依據(jù),且油酸和芥酸的回歸系數(shù)為-0.4798,即芥酸含量每下降1%,油酸含量可增加0.48%。芥酸與油酸、亞油酸間均呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r依次為-0.717、-0.615、-0.866,而二十碳烯酸與油酸和亞油酸間也呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r為-0.962、-0.324),且芥酸與二十碳烯酸間呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.501)。
表4 油菜誘變后代種子各主要脂肪酸的相關(guān)性及其對(duì)應(yīng)的線性回歸方程 Table 4 The correlation and linear regression equation of the main fatty acids in the seeds of mutagenesis progeny
注:表中數(shù)據(jù)為相關(guān)系數(shù),括號(hào)中為對(duì)應(yīng)的回歸方程; *和**分別表示在0.05和0.01水平下相關(guān)性顯著。
Note: the table date is correlation coefficients, and that within brackets is regression equation; * and ** mean significant correlation at level of 0.05 and 0.01, respectively.
含油量與軟脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸間均呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r依次為-0.776、-0.301、-0.875、-0.269,與硬脂酸、芥酸間呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系(r為0.374、0.836),而與二十碳烯酸間呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.216)。
通過(guò)對(duì)各處理M1主要脂肪酸含量分析發(fā)現(xiàn),在各濃度處理后,油酸含量高于CK(33.24%)的植株占總植株數(shù)的41.9%,油酸含量大于40.0%的植株占總植株數(shù)的13.97%,在T1中出現(xiàn)了1株油酸含量為44.02%的植株,在T2中出現(xiàn)了2株油酸含量較高的植株,油酸含量分別為44.04%、44.18%,比CK高11個(gè)百分點(diǎn)左右。芥酸含量低于CK(24.70%)的植株占總植株數(shù)的50.7%,芥酸含量較低(低于15.0%)的植株占總植株數(shù)的11.0%,在T1、T2中分別出現(xiàn)了2株芥酸含量較低的植株,芥酸含量分別為7.49%、8.93%、9.51%和8.50%,比CK低17個(gè)百分點(diǎn)左右。硫苷含量低于CK(93.10%)的植株占總植株數(shù)的63.97%,硫苷含量較低(低于40.0%)的植株占總植株數(shù)的9.56%,在T1、T2中分別出現(xiàn)了1株硫苷含量較低的植株,硫苷含量分別為5.44 μmol·g-1和15.32 μmol·g-1。在這些突變株中出現(xiàn)了4株芥酸和硫苷含量均較低的突變株,其芥酸和硫苷含量分別為7.49%和26.21 μmol·g-1、10.94%和5.44 μmol·g-1、8.93%和28.94 μmol·g-1、9.51%和34.22 μmol·g-1(表5)。
表5 EMS處理對(duì)油菜主要脂肪酸含量的影響/% Table 5 Effects of EMS treatment on major fatty acid contents of mutants
在M2中檢測(cè)到4株有利突變體,分別為3株油酸含量較高(比CK高15個(gè)百分點(diǎn)左右)且芥酸含量較低(比CK低10個(gè)百分點(diǎn)左右)的突變株,1株低硫苷含量突變體(表6),這些突變株的出現(xiàn)進(jìn)一步說(shuō)明了EMS誘導(dǎo)北方白菜型冬油菜產(chǎn)生優(yōu)質(zhì)突變體的有效性。
誘變可以產(chǎn)生豐富的突變體,已廣泛應(yīng)用于植物遺傳育種和生物學(xué)研究[1]。EMS作為一種有效的誘導(dǎo)植物基因發(fā)生點(diǎn)突變的手段,在小麥[11]、大豆[12]、玉米[13]、水稻[14]等作物上取得了較好效果,中國(guó)科學(xué)院石家莊現(xiàn)代化研究所利用EMS處理冬小麥,獲得了比原品種蛋白質(zhì)含量高3%~40%的突變體,其中M2變異率達(dá)到15.7%以上, 獲得9個(gè)早熟、矮稈突變系,比原品種增產(chǎn)2.8%~20.5%[15];將濃度為0.1%~0.5%的化學(xué)誘變劑EMS注入花生品種花育16號(hào)和魯花11號(hào)的花器,獲得了單株結(jié)果數(shù)、單株仁重、飽果率比野生型明顯提高的突變體,同時(shí)對(duì)花生的品質(zhì)和農(nóng)藝性狀也產(chǎn)生了明顯影響[16-18]。本研究結(jié)果表明,EMS對(duì)白菜型冬油菜M1植株蕾薹期和花期形態(tài)特征和農(nóng)藝性狀影響較大,在蕾薹期出現(xiàn)了葉片白化、卷曲、皺縮、畸形、黃化、花器畸形植株,尤其在花期出現(xiàn)了2花瓣花、3花瓣花、5花瓣花、花瓣皺縮卷曲、黃白相間花、白花以及多柱頭花等變異性狀,這與前人在甘藍(lán)型油菜上的研究結(jié)果類似[19-20]。
表6 突變體的主要品質(zhì)性狀 Table 6 Quality traits of the resulting mutant
研究表明,EMS誘變無(wú)論產(chǎn)生有利或有害變異,均與誘變劑的濃度和處理時(shí)間有關(guān),且不同的植物材料誘變效果也不同[21-25]。李偉等[26]發(fā)現(xiàn)谷子豫谷1號(hào)的適宜誘變條件為清水浸種過(guò)夜、1%EMS處理8 h;水稻上發(fā)現(xiàn)用0.5%EMS溶液處理的水稻種子,再經(jīng)0.5%和0.7% EMS溶液復(fù)合處理,發(fā)生突變的頻率為12.4%,復(fù)合處理的誘變效果優(yōu)于一次性處理,在M3篩選到一個(gè)生產(chǎn)上能推廣使用的水稻突變新品系[27]。本研究結(jié)果表明,適宜的EMS濃度是提高誘變效率的關(guān)鍵,成苗率隨EMS濃度的增加而減小,EMS濃度為0.6%時(shí),田間種子的成苗率為52%,接近半致死濃度,而0.3%處理后籽粒品質(zhì)產(chǎn)生的變異幅度也較大,綜合這2個(gè)指標(biāo),確定其誘變最適濃度為0.3%~0.6%,此濃度范圍可作為白菜型油菜EMS誘變的參考濃度。本研究中變異性狀的出現(xiàn),證明EMS在白菜型油菜上的應(yīng)用是有效的,成熟期的考種結(jié)果表明,EMS對(duì)株高、分枝部位、主花序有效長(zhǎng)度等性狀的發(fā)育有一定的抑制作用,且抑制作用與濃度成正相關(guān)。
近年來(lái)人們?cè)絹?lái)越關(guān)注油菜的品質(zhì),通過(guò)理化因素誘變已成為創(chuàng)建新型優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源的一種有效手段[1]。本試驗(yàn)在M2中篩選到了3株油酸含量較高且芥酸含量較低的植株(編號(hào)分別為M2-646-07、M2-646-11、M2-710-03),油酸含量分別為48.56%、47.57%、45.08%,比對(duì)照高15個(gè)百分點(diǎn);芥酸含量分別為17.89%、19.03%、19.37%,比對(duì)照低10個(gè)百分點(diǎn),同時(shí)還得到了1株硫苷含量較低(21.97 μmol·g-1)的突變株(編號(hào)為M2-812-79),前人研究表明,EMS處理甘藍(lán)型油菜種子產(chǎn)生高油酸突變體,其原因可能是:高油酸突變體中,BnFAD2I基因有63個(gè)堿基發(fā)生變異,進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯出現(xiàn)終止;BnFAD2II-1基因有41處堿基發(fā)生突變,導(dǎo)致15個(gè)氨基酸變異,其中處于跨膜區(qū)域的+82氨基酸由絲氨酸突變成脯氨酸,+157的苯丙氨酸變成亮氨酸,位于疏水區(qū)中,還有9處發(fā)生突變的氨基酸殘基位于α-螺旋區(qū),這些突變位點(diǎn)都發(fā)生在油酸脫飽和酶催化中心,進(jìn)而影響該酶的活性,導(dǎo)致突變體的油酸含量升高[7],而對(duì)于EMS處理對(duì)油菜芥酸和硫苷含量的影響還有待進(jìn)一步研究。
本研究表明,甲基磺酸乙酯(EMS)處理可誘導(dǎo)北方白菜型冬油菜產(chǎn)生豐富的變異,在M1代中出現(xiàn)葉片、花器官、農(nóng)藝性狀及品質(zhì)性狀的變異;在M2中篩選到了3株油酸含量較高且芥酸含量較低的突變體(油酸含量45.08%~48.56%、芥酸含量17.89%~19.37%)和1株低硫苷突變體(硫苷含量21.97 μmol·g-1);能使白菜型冬油菜產(chǎn)生有利變異的EMS處理濃度為0.3%~0.6%,處理時(shí)間為6 h。
[1] 柳學(xué)余.農(nóng)作物化學(xué)誘變育種[M].南京:東南大學(xué)出版社,1992.
[2] 王培英,許德春,郭玉虹,等.人工誘變改良大豆品質(zhì)的研究[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2000,14(1):21-23.
[3] 曲高平,孫妍妍,龐紅喜,等.甘藍(lán)型油菜EMS突變體庫(kù)構(gòu)建及抗除草劑突變體篩選[J].中國(guó)油料作物學(xué)報(bào),2014,36(1):025-031.
[4] 廖曉英,閻晉東,鐘 鳴,等.甘藍(lán)型油菜EMS誘變及多分枝和長(zhǎng)角突變體分析[J].生命科學(xué)研究,2016,20(5):435-441.
[5] 薛遠(yuǎn)超,李加納,劉列釗,等.甘藍(lán)型油菜EMS誘變材料的耐濕性鑒定與篩選[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,37(4):76-80.
[6] 陳 潔,張學(xué)昆,諶 利,等.甘藍(lán)型油菜耐濕種質(zhì)資源的快速篩選[J].中國(guó)油料作物學(xué)報(bào),2006,28(2):138-143.
[7] 黃永娟,張鳳啟,楊甜甜,等.EMS誘變甘藍(lán)型油菜獲得高油酸突變體[J].分子植物育種,2011,9(5):611-616.
[8] 張宏軍,肖 鋼,譚太龍,等.EMS處理甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus)獲得高油酸材料[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,41(12):4016-4022.
[9] Hans-Joachim Harloff, Susanne Lemcke, Juliane Mittasch, et al. A mutation screening platform for rapeseed (BrassicanapusL.) and the detection of sinapine biosynthesis mutants[J] .Theoretical and Applied Genetics, 2012,124(5):957-969.
[10] 吳建國(guó),石春海,張海珍,等.應(yīng)用近紅外反射光譜法整粒測(cè)定小樣品油菜籽含量的研究[J].作物學(xué)報(bào),2002,28(3):421-425.
[11] 倪永靜,朱培培,劉紅杰,等.EMS誘導(dǎo)國(guó)麥301小麥突變體庫(kù)的建立與鑒定[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,44(4):42-45.
[12] 吳秀紅.EMS對(duì)不同大豆品種M2代農(nóng)藝性狀的影響[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào),2012,2(5):29-31.
[13] 李海軍,池書(shū)敏,劉志增,等.利用EMS化學(xué)誘變改造玉米自交系的研究[J].玉米科學(xué),2002,10(3):36-37.
[14] 王 峰,徐 飚,楊正林,等.EMS誘變水稻矮生資源的鑒定評(píng)價(jià)[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2011,25(2):0197-0201.
[15] 杜連恩,于秀普,魏玉昌.EMS處理小麥合子誘變篩選高蛋白突變體[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1990,13(4):94-96.
[16] 殷冬梅,楊秋云,楊海棠,等.花生突變體的EMS誘變及分子檢測(cè)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2009,25(5):53-56.
[17] 王傳堂,王秀貞,唐月異,等.EMS直接注入花生花器創(chuàng)制高產(chǎn)突變體[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2010,24(2):239-242.
[18] 唐月異,王秀貞,吳 琪,等.EMS誘變選育花生新品種-花育40號(hào)[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2014,28(6):0967-0969.
[19] 和江明,王敬喬,陳 薇,等.用EMS誘變和小孢子快速獲得甘藍(lán)型油菜高油酸種質(zhì)材料的研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2003,16(2):34-36.
[20] 李浩杰,蒲曉斌,張錦芳,等.甘藍(lán)型油菜EMS誘變后代農(nóng)藝性狀觀察及分子檢測(cè)[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2012,26(2):0245-0249.
[21] 杜園園,劉永忠,李萬(wàn)星,等.大豆EMS化學(xué)誘變處理?xiàng)l件分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(35):16995-16996.
[22] 祝麗英,池書(shū)敏,劉志增,等.甲基磺酸乙酯(EMS)在創(chuàng)造玉米新種質(zhì)中的應(yīng)用[J].玉米科學(xué),2001,9(3):14-17.
[23] 陳邵江,宋同明.EMS花粉誘變獲得高油玉米突變體[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,7(3):12-13.
[24] 王 軍,楊慧卿,袁 峰,等.EMS誘變谷子“長(zhǎng)農(nóng)35號(hào)”M1代成熟期株型突變體的鑒定與分析[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2011,27(18):84-89.
[25] 張紀(jì)元,張平平,姚金保,等.以EMS誘變創(chuàng)制軟質(zhì)小麥寧麥9號(hào)高分子量谷蛋白亞基突變體[J].作物學(xué)報(bào),2014,40(9):1579-1584.
[26] 李 偉,智 慧,王永芳,等.谷子EMS誘變的處理?xiàng)l件分析[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,14(11):77-79.
[27] 顧佳清,張智奇,周 音,等.EMS誘導(dǎo)水稻“中花11”突變體的篩選和鑒定[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2005,21(1):7-11.