宋麗杰,王 麗,王 捷

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)科,中國(guó)廣東廣州510010)

腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程：腫瘤細(xì)胞惡性增殖,失去對(duì)基底膜的黏附作用,突破基底膜進(jìn)入到血管或淋巴管中,其中絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞在循環(huán)系統(tǒng)中被清除,只有約0.01%的循環(huán)腫瘤細(xì)胞到達(dá)待轉(zhuǎn)移的位點(diǎn),并開(kāi)始增殖形成新的腫瘤灶。以往有關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)移的研究多集中于腫瘤細(xì)胞本身,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境以及遠(yuǎn)端細(xì)胞之間的信息交流也發(fā)揮著重要作用。外泌體(exosome)是一種納米級(jí)的囊泡,幾乎所有物質(zhì)包括蛋白質(zhì)、RNA、DNA以及細(xì)胞代謝產(chǎn)物都可以通過(guò)外泌體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外,并且外泌體在細(xì)胞與遠(yuǎn)端細(xì)胞之間,以及細(xì)胞與微環(huán)境之間的信息交流方面也發(fā)揮了重要作用。研究者們發(fā)現(xiàn)不同細(xì)胞來(lái)源的外泌體通過(guò)攜帶各種功能性分子參與了許多重要的生理及病理過(guò)程,尤其是在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮了重要作用。本文將重點(diǎn)闡述外泌體在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮的作用。

1 外泌體簡(jiǎn)介

1.1 外泌體的來(lái)源

外泌體最早發(fā)現(xiàn)于成熟哺乳動(dòng)物的網(wǎng)織紅細(xì)胞當(dāng)中,是40～100 nm的圓形或橢圓形囊泡[1]。1981年,Trams等[2]首次將此納米級(jí)的囊泡命名為外泌體。外泌體可由細(xì)胞內(nèi)多泡內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合之后分泌,其形成過(guò)程涉及到許多信號(hào)分子的緊密調(diào)控,目前有關(guān)外泌體分泌的具體分子機(jī)制還不太清楚,但Ostrowski等[3]發(fā)現(xiàn)Rab蛋白家族成員如Rab27a和Rab27b在外泌體的分泌過(guò)程起著重要的調(diào)控作用,并且不同類型的細(xì)胞其激活外泌體分泌的方式不同。

外泌體可由多種類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌,并且體外培養(yǎng)的細(xì)胞也可分泌外泌體。外泌體能夠穩(wěn)定地存在于尿液、唾液、乳汁、血液、腦脊液、羊水和腫瘤積液等多種體液當(dāng)中,而且在腫瘤微環(huán)境中特別豐富[4]。起初,研究者們認(rèn)為外泌體是細(xì)胞排出的“廢物”,并不參與機(jī)體的生理過(guò)程。隨著高分辨率成像和分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展,研究者們發(fā)現(xiàn)外泌體攜帶的生物活性分子在細(xì)胞間物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程發(fā)揮了重要作用[5]。

1.2 外泌體的結(jié)構(gòu)

外泌體由脂質(zhì)雙分子層包裹,不含細(xì)胞器,包含有多種蛋白質(zhì)、DNA、RNA等物質(zhì)。外泌體的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)不但賦予外泌體一定的形狀,并且能夠保護(hù)其內(nèi)在的物質(zhì)免遭外界環(huán)境的破壞。外泌體包含的蛋白質(zhì)分為兩類：一是保守蛋白質(zhì),即所有外泌體都含有,與外泌體的分泌調(diào)控相關(guān),如CD81、CD9、CD63,常被作為外泌體表面標(biāo)志物;二是因分泌細(xì)胞不同而特有的蛋白質(zhì),例如網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的外泌體中富含轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,這類蛋白質(zhì)常常通過(guò)外泌體為載體參與細(xì)胞間的通訊活動(dòng)。外泌體還包含一些核酸類物質(zhì)：DNA和RNA,其中研究最多的為miRNA。Valadi等[6]于2007年首次證明miRNA和mRNA可通過(guò)外泌體在細(xì)胞間進(jìn)行傳遞,并且從人體唾液中檢查出來(lái)的miRNA大部分集中在外泌體中。外泌體中的mRNA和miRNA可以改變受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá),從而可能影響到受體細(xì)胞在體內(nèi)的生物活性。

2 外泌體與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的啟動(dòng)

2.1 外泌體與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是腫瘤轉(zhuǎn)移的啟動(dòng)信號(hào)。EMT是指腫瘤上皮細(xì)胞獲得間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。通過(guò)EMT,腫瘤細(xì)胞失去細(xì)胞極性以及細(xì)胞間的黏附能力,增殖能力下降,而細(xì)胞的侵襲和遷移能力增強(qiáng)[7]。經(jīng)EMT轉(zhuǎn)化的細(xì)胞,E-cadherin蛋白表達(dá)下降,而vimentin蛋白表達(dá)升高,并且細(xì)胞形態(tài)變?yōu)殄F形。這些變化與Snail、Zeb以及Twist信號(hào)途徑的激活有關(guān)。研究表明外泌體在EMT中發(fā)揮了重要作用。EBV(Epstein-Barr virus)感染的鼻咽癌細(xì)胞外泌體含有大量的LMP1(latent membrane protein 1)和 HIF1α (hypoxia-inducible factor 1α)。HIF1α 作用于Snail信號(hào)通路,提高Twist的表達(dá),從而誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生EMT。鼻咽癌外泌體的受體細(xì)胞將會(huì)因EMT而具有更強(qiáng)的侵襲能力,同時(shí)LMP1可以降低HIF1α溶酶體途徑的降解,從而引起EMT途徑的激活[8]。膀胱癌細(xì)胞分泌的外泌體可引起尿道上皮細(xì)胞發(fā)生EMT,提高細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[9]。這些外泌體通過(guò)TGF-β1途徑誘導(dǎo)尿道上皮細(xì)胞vimentin、Snail和Twist的表達(dá),并且抑制E-cadherin和β-cadherin蛋白的表達(dá)。外泌體miR-23a在肺癌細(xì)胞中通過(guò)抑制E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)EMT發(fā)生[10]。研究發(fā)現(xiàn)胃癌、肺癌以及結(jié)直腸癌細(xì)胞來(lái)源的外泌體也具有誘導(dǎo)EMT的作用[11～13]。經(jīng)歷EMT的腫瘤細(xì)胞通過(guò)外泌體可以同時(shí)促進(jìn)鄰近細(xì)胞發(fā)生EMT,從而增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲能力,促進(jìn)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

2.2 外泌體與低氧微環(huán)境

當(dāng)實(shí)體瘤的大小超過(guò)1 cm3,在腫瘤組織的局部區(qū)域會(huì)出現(xiàn)缺氧現(xiàn)象。低氧環(huán)境對(duì)于促進(jìn)腫瘤的生存和轉(zhuǎn)移非常重要。在低氧狀態(tài)下,多發(fā)性骨髓瘤會(huì)分泌更多的外泌體,其中包含的miR-135b通過(guò)直接抑制內(nèi)皮細(xì)胞中FIH-1(factor-inhibiting hypoxia-inducible factor 1)的生成而促進(jìn)HIF1α的表達(dá),進(jìn)而通過(guò)HIF-FIH信號(hào)通路促進(jìn)血管的生成[14]。在乳腺癌模型中,研究發(fā)現(xiàn)低氧可以介導(dǎo)HIF-1因子的活化,從而促進(jìn)外泌體的分泌,使細(xì)胞具有侵襲性[15]。Park等[16]發(fā)現(xiàn)A431腫瘤細(xì)胞在低氧的微環(huán)境中,能夠通過(guò)外泌體分泌特定的四分子交聯(lián)體家族蛋白和Alix,從而促進(jìn)血管生成和提高細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能。處于低氧狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞分泌更多的外泌體,能夠提高細(xì)胞的血管生成能力和轉(zhuǎn)移潛能,提示腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌外泌體刺激血管生成或促使細(xì)胞轉(zhuǎn)移至更適宜的環(huán)境。

3 外泌體與血管生成和血管通透性

腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與血管的生成及通透性相關(guān)。新生血管對(duì)于腫瘤細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧份的供應(yīng)十分重要,并且是轉(zhuǎn)移細(xì)胞進(jìn)入系統(tǒng)循環(huán)的重要關(guān)口。研究表明,外泌體通過(guò)釋放不同的功能性分子,改變血管的通透性和促進(jìn)血管生成。比如：乳腺癌細(xì)胞外泌體含有miR-105,可以下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接蛋白ZO-1的表達(dá),從而破壞細(xì)胞間的緊密連接,增加內(nèi)皮的通透性,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞透過(guò)血管壁發(fā)生肺及骨的轉(zhuǎn)移[17]。最近有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-939,其直接靶向內(nèi)皮細(xì)胞的VE-cadherin,從而增加血管的通透性[18]。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞通過(guò)分泌含有SDF-1(stromal cell-derived factor-1)的外泌體刺激血管的生成[19]。其中,SDF-1主要通過(guò)趨化聚集內(nèi)皮祖細(xì)胞來(lái)促進(jìn)血管的生成。此外,外泌體也可以直接將血管生成相關(guān)蛋白質(zhì)mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)到基質(zhì)中,影響基質(zhì)蛋白質(zhì)的表達(dá),其中包括表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA和內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞周期相關(guān)蛋白質(zhì)mRNA[20,21]。

4 外泌體與腫瘤微環(huán)境的形成

4.1 外泌體與腫瘤細(xì)胞的靶向轉(zhuǎn)移

腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移部位不是隨機(jī)的,而是腫瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)移器官?gòu)?fù)雜的相互作用的結(jié)果。有關(guān)腫瘤靶向轉(zhuǎn)移的假說(shuō)最早是由Paget于1889年提出的“種子與土壤”學(xué)說(shuō),該學(xué)說(shuō)認(rèn)為循環(huán)的腫瘤細(xì)胞(種子)只有與宿主環(huán)境(土壤)相適應(yīng)時(shí)才會(huì)形成轉(zhuǎn)移灶[22]。Fidler[23]在1973年支持了該假說(shuō),并指出來(lái)源于特定腫瘤部位的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出轉(zhuǎn)移到特定部位的能力。在腫瘤細(xì)胞到達(dá)轉(zhuǎn)移部位之前,預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境已經(jīng)形成。研究發(fā)現(xiàn)來(lái)源于胃癌細(xì)胞的外泌體含有EGFR,可以促進(jìn)肝臟組織轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成,EGFR能夠整合進(jìn)入肝臟基質(zhì)細(xì)胞的質(zhì)膜上,通過(guò)抑制miR-26a/b的表達(dá)來(lái)激活肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表達(dá),而HGF通過(guò)與轉(zhuǎn)移細(xì)胞C-MET受體的結(jié)合促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移[24]。更有研究提示外泌體表面的整合素類型決定著腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移部位,即 αvβ4 和 α6β1 與肺轉(zhuǎn)移相關(guān),αvβ5與肝轉(zhuǎn)移相關(guān)[25]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明人或鼠源親腦、親肺及親肝轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體優(yōu)先與預(yù)轉(zhuǎn)移靶器官的宿主細(xì)胞結(jié)合,激活S100基因表達(dá)及Scr信號(hào)通路,從而對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移前的微環(huán)境進(jìn)行預(yù)處理。

4.2 外泌體與炎癥反應(yīng)

炎癥反應(yīng)可以刺激腫瘤的生長(zhǎng),并且提前為腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成做好準(zhǔn)備。研究證明外泌體可以誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),有利于轉(zhuǎn)移灶的形成。在胰腺癌模型中,腫瘤外泌體通過(guò)與Kupffer細(xì)胞相互作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在肝臟中的轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)[26]。Kupffer細(xì)胞攝取外泌體后激活炎癥反應(yīng)以及成纖維途徑,導(dǎo)致轉(zhuǎn)移灶微環(huán)境的形成,該過(guò)程依賴MIF信號(hào)通路。MIF能夠介導(dǎo)TGF-β1的生成,TGF-β1可以促進(jìn)纖連蛋白的表達(dá),從而通過(guò)纖連蛋白聚集BMDCs(bone marrow-derived cells)至小鼠肝臟組織中,最終誘導(dǎo)肝臟轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成,促進(jìn)胰腺癌的肝臟轉(zhuǎn)移。腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞能夠促進(jìn)血管生成、細(xì)胞侵襲和基質(zhì)重建。腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)與巨噬細(xì)胞表面的TLRs(toll-like receptors)結(jié)合,激活 NF-κB,從而引起與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的促炎細(xì)胞因子如IL-6、TNF-α、G-CSF和 CCL2的分泌增多[27]。

4.3 外泌體與細(xì)胞外基質(zhì)的重建

外泌體可以直接作用于間充質(zhì)干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞,從而改變細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM),使其適宜腫瘤細(xì)胞生存。體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)人慢性淋巴細(xì)胞白血病分泌的外泌體作用后,其細(xì)胞增殖及遷移能力增強(qiáng),并且細(xì)胞炎性因子的釋放增加,從而有助于腫瘤適宜微環(huán)境的形成[28]。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)能夠與基質(zhì)相互作用促進(jìn)炎癥反應(yīng)和血管生成,引起細(xì)胞外基質(zhì)重塑,有助于腫瘤細(xì)胞的入侵和轉(zhuǎn)移。研究表明多種腫瘤細(xì)胞(間皮瘤細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞和胃癌細(xì)胞)分泌的包含有TGF-β的外泌體能夠誘導(dǎo)纖維母細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞分化為CAFs,并伴隨著α-SMA(α-smooth muscle actin)表達(dá)升高, 刺激FGF2、VEGF、HGF和 MMPs等細(xì)胞因子的分泌,促進(jìn)血管生成和腫瘤生長(zhǎng)[29]。CAFs也可以通過(guò)分泌TGF-β1誘導(dǎo) EMT,并且激活TGF-β1-SMAD信號(hào)通路[19]。膽管癌細(xì)胞來(lái)源的外泌體作用于間充質(zhì)干細(xì)胞,能夠使其向肌成纖維細(xì)胞分化,并且促進(jìn)細(xì)胞表達(dá)α-SMA,分泌CXC-1、CCL2和IL-6等細(xì)胞因子,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[30]。肺癌細(xì)胞分泌的含EMMPRIN的外泌體作用于成纖維細(xì)胞,刺激細(xì)胞分泌MMPs,可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解,從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力[31]。

4.4 外泌體與腫瘤代謝微環(huán)境

腫瘤細(xì)胞抵達(dá)轉(zhuǎn)移位點(diǎn)之后,需要豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)支持細(xì)胞的增殖。Zhang等[32]研究發(fā)現(xiàn)腦部星型膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的外泌體富含miRNA,能夠降低PTEN基因的表達(dá),從而提高細(xì)胞的增殖,促進(jìn)腦轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)。在腫瘤微環(huán)境中,CAFs分泌的外泌體可以為癌細(xì)胞提供代謝所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如氨基酸、脂質(zhì)、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物等,從而在營(yíng)養(yǎng)匱乏的條件下促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)[33]。還有研究證明腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌富含miR-122的外泌體在轉(zhuǎn)移前微環(huán)境中抑制非腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取,為轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)豐富的高葡萄糖環(huán)境,從而維持腫瘤細(xì)胞高水平的糖攝取[34]。

5 外泌體與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸

當(dāng)腫瘤細(xì)胞抵達(dá)轉(zhuǎn)移位點(diǎn)后,需要逃避機(jī)體的免疫監(jiān)督,腫瘤來(lái)源外泌體可建立免疫抑制微環(huán)境來(lái)維持細(xì)胞的增殖。腫瘤微環(huán)境中存在大量的髓源性抑制細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)、調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages,TAM)等免疫抑制性細(xì)胞,這些細(xì)胞及其活性分子構(gòu)成免疫抑制性局部環(huán)境,抑制抗腫瘤的免疫應(yīng)答。外泌體可以通過(guò)抑制效應(yīng)細(xì)胞和激活Treg來(lái)降低細(xì)胞免疫反應(yīng)活性。在體外急性髓細(xì)胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)模型中,外泌體通過(guò)激活Fas/FasL途徑介導(dǎo)凋亡,從而降低CD8+T細(xì)胞的數(shù)量[35]。腫瘤源性外泌體通過(guò)高表達(dá)IL-10、TGF-β1、CTLA-4和 GrB 促進(jìn) CD4+T細(xì)胞的增殖,并使CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Treg,同時(shí)這些調(diào)節(jié)因子可以降低自然殺傷(natural killer,NK)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性[36]。MDSC是能夠抑制T細(xì)胞活性的不成熟骨髓細(xì)胞。外泌體可以分泌HSP71/TLR2,并通過(guò)STAT3途徑和IL-6表達(dá)來(lái)激活MDSC[37]。M2型巨噬細(xì)胞具有促腫瘤作用,是主要的TAM。研究證明MDSC源性的外泌體促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化,從而抑制T細(xì)胞的功能[38]。外泌體也可以通過(guò)介導(dǎo)效應(yīng)物質(zhì)的分泌及聚集,實(shí)現(xiàn)腫瘤的免疫抑制。Clayton等[39]發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體具有ATP和5’AMP的水解活性,能夠顯著提高腫瘤組織中腺苷酸的水平,腺苷酸能夠抑制T細(xì)胞的活性,從而起到免疫抑制的作用。NKG2D是NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化受體,NKG2D的丟失是腫瘤免疫逃逸的主要因素之一。研究表明,腫瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠下調(diào)NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá),起到促腫瘤生長(zhǎng)的作用[40]。此外,非腫瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體也能抑制腫瘤的免疫應(yīng)答。比如：腸黏膜細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠?qū)⑶傲邢偎?(prostaglandin E2,PGE2)運(yùn)輸?shù)礁闻K中,并且誘導(dǎo)自然殺傷T細(xì)胞的免疫功能失活[41]。

外泌體除可以抑制細(xì)胞免疫反應(yīng),還可以中和抗腫瘤抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。在體液免疫中,主要是通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC)作用于腫瘤細(xì)胞。在乳腺癌細(xì)胞中,外泌體表達(dá)HER2和EPCAM抗原,這些抗原能夠與抗體結(jié)合,從而干擾腫瘤細(xì)胞的ADCC[42]。

6 展望

外泌體是具有強(qiáng)大功能的納米級(jí)囊泡,能夠介導(dǎo)細(xì)胞之間、細(xì)胞與微環(huán)境之間的物質(zhì)運(yùn)輸及信號(hào)傳導(dǎo)。多項(xiàng)研究證明外泌體在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用,因此可將外泌體作為腫瘤的診斷標(biāo)志物。研究者通過(guò)對(duì)大量的胰腺癌病人血清樣本進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),與正常人相比,胰腺癌病人血清樣本中GPC1(glypican-1)陽(yáng)性的外泌體占比顯著增高,并且GPC1陽(yáng)性的外泌體在早期胰腺癌病人的血清中豐度就顯著高于正常人,證明外泌體檢測(cè)可以為早期胰腺癌檢測(cè)提供依據(jù)[43]。

由于外泌體廣泛存在于多種體液樣本中,易于獲取,并且外泌體檢測(cè)可成為一種真正的無(wú)創(chuàng)的診斷方法,因此在腫瘤診斷方面具有很大的應(yīng)用潛力。但是有關(guān)外泌體分泌的具體分子機(jī)制還不是很清楚,并且體內(nèi)外泌體的種類繁多,幾乎每種細(xì)胞分泌的外泌體都不同,而且同一細(xì)胞在不同的環(huán)境中分泌的外泌體也有差別。受體細(xì)胞是如何識(shí)別并且接收特定的外泌體也有待進(jìn)一步研究。目前關(guān)于外泌體提取的方法主要有離心法、過(guò)濾離心法、密度梯度離心法、免疫磁珠法、色譜法和新興試劑法,這些方法各有利弊,但若需要滿足臨床檢測(cè)的要求,則需要研究出快速、高效、無(wú)雜質(zhì)的提取方法。外泌體在未來(lái)的腫瘤治療領(lǐng)域既充滿機(jī)遇又充滿挑戰(zhàn)。