李 紅，林 琎,，許樂(lè)園，慕 衛(wèi),*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，山東泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東泰安 271000)

水稻紋枯病和稻瘟病嚴(yán)重影響稻米產(chǎn)量和品質(zhì)，其防治需要大量依賴化學(xué)農(nóng)藥。孫雪等[1]和宋益民等[2]田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將吡唑醚菌酯與稻瘟靈混用可有效解決單劑的大量使用造成的農(nóng)藥殘留及藥害問(wèn)題，同時(shí)防治水稻紋枯病和稻曲病等病害。然而，施用稻瘟靈和吡唑醚菌酯后，部分藥劑因直接脫靶或其他形式損失，如經(jīng)雨水沖刷、地面徑流或滲透等多種途徑造成水環(huán)境污染，因此，亟需一種高效靈敏、可同時(shí)檢測(cè)兩者的技術(shù)。目前已報(bào)道稻瘟靈和吡唑醚菌酯的檢測(cè)方法主要為氣相色譜法[3]和高效液相色譜法[4,5]，但是上述2種方法檢出限高，靈敏度低。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有檢測(cè)快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，常用于農(nóng)藥多殘留檢測(cè)，但目前尚未見(jiàn)對(duì)該2種有效成分采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的報(bào)道。本研究通過(guò)條件優(yōu)化，建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水體中稻瘟靈和吡唑醚菌酯的分析方法，該方法快速、準(zhǔn)確、高效、靈敏度高，可用于上述2種有效成分的殘留檢測(cè)以指導(dǎo)安全用藥。

1 材料與方法

1.1 藥劑與儀器

稻瘟靈標(biāo)準(zhǔn)樣品(純度98.0%)、吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品(純度99.0%)，由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心提供；甲醇、甲酸為色譜純，購(gòu)自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；試驗(yàn)用水為去離子水。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀；色譜柱：安捷倫Eclipse plus C18柱(10 mm×5.5 mm，1.8 μm)；電子天平；EPED-40TF 超純水儀；數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 溶液配制

準(zhǔn)確稱取稻瘟靈標(biāo)準(zhǔn)樣品和吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，分別用甲醇溶解并定容，得到稻瘟靈和吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液母液；分別移取2種標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，用甲醇稀釋成有效成分系列濃度相同的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。

1.3 分析條件

1.3.1 液相分析條件

流動(dòng)相：0.2%甲酸水溶液-甲醇，梯度洗脫程序見(jiàn)表1，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣體積：5 μL。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 質(zhì)譜分析條件

稻瘟靈和吡唑醚菌酯均采用電噴霧(ESI+)模式測(cè)定，多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式掃描，外標(biāo)法定量。質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正離子模式下稻瘟靈和吡唑醚菌酯質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)條件優(yōu)化

以0.1%甲酸水溶液-甲醇、0.2%甲酸水溶液-甲醇、0.2%甲酸水溶液-乙腈優(yōu)化液相條件，結(jié)果表明，以0.2%甲酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相時(shí)，稻瘟靈和吡唑醚菌酯響應(yīng)值較高，本研究選用0.2%甲酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(1.3.1節(jié))。

參考《農(nóng)藥分析手冊(cè)》[6]，在m/z 0～400進(jìn)行全掃描，在50～75 V優(yōu)化錐孔電壓，使2種有效成分母離子響應(yīng)值達(dá)到最大；逐級(jí)優(yōu)化碰撞電壓，找到各成分的定量離子對(duì)和定性離子對(duì)，得到1.3.2節(jié)的質(zhì)譜參數(shù)。稻瘟靈和吡唑醚菌酯的母離子和子離子圖見(jiàn)圖1和2。

圖1 稻瘟靈母離子和子離子圖

2.2 方法線性關(guān)系

對(duì)系列濃度的稻瘟靈和吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述條件進(jìn)樣分析，以濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。稻瘟靈和吡唑醚菌酯在0.000 1～0.05 mg/L范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，線性方程分別為：y=2 815 619.8x+181.7，R2=1.000 0；y=4 126 371.5x+533.7，R2=0.999 9。以10倍信噪比定義其最低檢測(cè)濃度，2種有效成分分別為0.159 μg/L和0.108 μg/L。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定

分別對(duì)稻瘟靈和吡唑醚菌酯2種有效成分在空白水體中進(jìn)行0.000 2、0.002、0.2 mg/L 3檔水平的添加回收試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)5次。結(jié)果表明(表3)，稻瘟靈平均回收率為85.14%～96.84%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.14%～6.33%；吡唑醚菌酯平均回收率為82.86%～90.65%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.38%～6.13%。

圖2 吡唑醚菌酯母離子和子離子圖

表3 稻瘟靈和吡唑醚菌酯在水體中的添加回收結(jié)果(n=5)

3 結(jié) 論

本研究以水為基質(zhì)，建立了稻瘟靈和吡唑醚菌酯的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測(cè)分析方法，該方法簡(jiǎn)單、高效、靈敏、準(zhǔn)確，可用于檢測(cè)水樣中2種有效成分，也可用于相關(guān)藥劑殘留分析。

[1] 孫雪, 侯志廣, 趙曉峰, 等. 多種藥劑對(duì)水稻紋枯病菌的毒力測(cè)定及田間藥效[J]. 農(nóng)藥, 2015, (2): 139－142.

[2] 宋益民, 陳惠, 叢國(guó)林. 9種殺菌劑防治水稻紋枯病的田間藥效評(píng)價(jià)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, (10): 104－105.

[3] 劉慧琳, 郭正元, 譚智勇, 等. 稻瘟靈在稻田環(huán)境中的消解動(dòng)態(tài)[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, (11): 97－99.

[4] 閆曉陽(yáng), 徐金麗, 徐光軍, 等. 高效液相色譜法檢測(cè)吡唑醚菌酯在煙葉和土壤中的殘留及消解動(dòng)態(tài)[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2013,15(5): 528－533.

[5] 夏雨, 李國(guó)全, 王英. 混劑中稻瘟靈和異稻瘟凈的液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2008, 29(10): 11－13.

[6] 陳鐵春, 李國(guó)平, 趙永輝,等. 農(nóng)藥分析手冊(cè)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2012.