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(1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，　海南 萬寧 571533；2.農(nóng)業(yè)部熱帶香料飲料作物種質(zhì)資源圃，　海南 萬寧 571533；3.農(nóng)業(yè)部香辛飲料作物遺傳資源利用重點實驗室，　海南 萬寧 571533)

可可(Theobromacacao)，屬梧桐科(Sterculiaceae)可可屬，種子富含脂肪、蛋白、多酚等成分，是制作巧克力、糕點、糖果等食品的重要原料?？煽芍饕植加谀媳本?0°內(nèi)，全球種植面積超過1 000萬hm2，為世界第二大飲料作物，在世界農(nóng)業(yè)發(fā)展中占有重要地位。我國于20世紀20年代從東南亞引種，20世紀50年代開始目的性試種并獲成功。目前，我國可可主要分布在海南島，種植面積超過300 hm2，遠不能滿足國內(nèi)需求，每年仍需進口可可豆10萬t以上。

可可作為我國新興的熱帶特色經(jīng)濟作物，耐蔭蔽，適宜在林下種植。海南省橡膠、椰子、檳榔等經(jīng)濟作物種植面積近60萬hm2[1-3]，如果15%的經(jīng)濟林下間種可可，年產(chǎn)可可豆10萬t以上，可以滿足目前國內(nèi)需求。可可為典型熱帶植物，老莖開花結(jié)果，觀賞價值高，有助于海南省建設(shè)美麗鄉(xiāng)村、打造“升級版國際旅游島”?？煽芍饕植荚跓釒Оl(fā)展中國家，是其中許多國家的重要經(jīng)濟收入來源，但生產(chǎn)技術(shù)水平較為落后，先進的育苗技術(shù)有助于支撐我國農(nóng)業(yè)“走出去”，服務(wù)國家“一帶一路”戰(zhàn)略。

目前，可可種苗以實生繁殖為主，成林后植株間變異大、易退化，扦插種苗無主根易倒伏，嚴重影響可可生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。嫁接繁殖的種苗可保持母本的優(yōu)良性狀，提升種植園綜合效益[4]。然而，國內(nèi)對可可嫁接育苗技術(shù)的研究仍未見報道。為促進我國可可產(chǎn)業(yè)化的健康發(fā)展，優(yōu)化可可種苗繁育技術(shù)，找到一種操作實用、簡便、易于掌握的嫁接方法，研究了可可嫁接育苗時期、嫁接方式等對成活率的影響。

1　材料與方法

1.1　試驗地概況

試驗地位于海南省萬寧市興隆華僑農(nóng)場可可育苗基地(北緯18°44′，東經(jīng)110°11′)。該區(qū)域?qū)贌釒Ъ撅L氣候，年平均溫度為24.5 ℃，年平均降雨量為2 400 mm，降水較集中，每年5—10月為雨季，11月至次年4月為旱季。

1.2　試驗材料

砧木培養(yǎng)：2014—2015年，選取籽粒飽滿可可種子，沙床催芽后，裝袋育苗，每2～3個月育苗1次，并實行精細的苗圃管理。2015—2016年嫁接時，苗高為50～80 cm，子葉節(jié)處莖粗0.8～1.2 cm。在嫁接前1周將砧木打頂，保留3～5個葉片，對砧木灌足底水，嫁接前砧木枝干表面保持干燥。

接穗采集和運輸：接穗來自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所選育和篩選的品種、優(yōu)良育種材料：熱引4號、TAS 2-13、TAS 4-20、TAS 6-11、TAS 8-2、TAS 9-9、TAS 10-9、TASsr 12。在可可優(yōu)良母樹上，選擇芽體飽滿、無病蟲害、半木質(zhì)化、健壯的當年生枝條作為接穗枝，對接穗枝實行防蟲、疏密等管理。在晴天或多云天，采集優(yōu)良母樹上的接穗枝，邊采集，邊剪去接穗枝上的葉片，保留葉柄并編號掛牌。接穗枝在嫁接當日剪取，用濕毛巾包裹進行長距離運輸，到達目的地后，把裹有濕毛巾的接穗枝放置在陰涼處，以備第2、3天嫁接使用。

1.3　試驗設(shè)計

不同嫁接方法試驗設(shè)芽接、劈接、枝接、腹接4種處理，在2015年4月份進行；不同嫁接時期(以芽接方法)分別在2015年4月上旬、7月中旬、10月上旬、2016年1月中旬進行；不同砧木直徑對嫁接成活率影響，用游標卡尺測量砧木直徑，測量部位為距地10 cm，按直徑大小分6個等級：0.59 cm以下、0.6～0.69 cm、0.7～0.79 cm、0.8～0.89 cm、0.9～0.99 cm、1.0 cm以上。根據(jù)每次采集的接穗狀況每處理嫁接30～100株。嫁接90 d后調(diào)查成活率和新稍長度。

1.4　嫁接方法

1.4.1芽接

選擇枝條上較平部位取芽(即芽點，位于葉柄上方)，先在芽點上下部位橫向各環(huán)割一刀，再在休眠芽左右縱向各切一刀，接穗長0.8～1.5 cm、寬0.5～1 cm，深度剛到木質(zhì)部；輕拉接穗上的葉柄使其從木質(zhì)部上剝離。在砧木基部開一剛達木質(zhì)部的切口，開切口時使切開的砧木片僅與切口底端相連。將接穗嵌入切口，使接穗形成層與砧木形成層對齊，然后將切開的砧木片緊壓接穗，露出接穗上的芽點，自下往上將接穗和切開的砧木片以及接穗和砧木結(jié)合處進行綁扎。接穗萌芽長至2～3 cm以后，解除綁扎，接穗愈合后剪去切口上5 cm以上的砧木。

1.4.2劈接

選擇長5～8 cm、帶2～3個飽滿腋芽的良種枝條為接穗；接穗底端削成角度為30°的楔形，頂端橫向削平。在砧木子葉節(jié)處，將頂部橫向剪下，砧木基部縱向劈開。將接穗嵌入切口，使接穗形成層與砧木形成層對齊，然后將劈開的砧木緊壓接穗斜面，自下往上綁扎接穗和砧木切口。接穗成活后，解除綁帶。

1.4.3枝接

選擇長5～8 cm，帶2～3個飽滿腋芽的良種枝條為接穗；接穗底端削成角度為30°的楔形，頂端橫向削平。在砧木子葉節(jié)處，斜向下切一深達木質(zhì)部切口，砧木上形成長3～4 cm舌頭。將接穗嵌入切口，使接穗形成層與砧木形成層對齊，然后將切開的砧木舌頭緊壓接穗斜面，自下往上綁扎接穗和砧木切口。接穗萌芽長至2～3 cm以后，解除綁扎，接穗愈合后剪去切口上5 cm處以上的砧木。

1.4.4腹接

將良種枝條截成長4～6 cm、帶2～3個飽滿腋芽的枝條，將接穗兩端均削成斜面；接穗的無腋芽一側(cè)縱向削去韌皮部，露出縱削面，縱削面與斜面形成約45°夾角。在砧木上開一深度剛達木質(zhì)部的豎長切口，切除中段砧木片，剝離切口兩端的砧木片的韌皮部，切口兩端的砧木片的一端與砧木相連。將接穗嵌入切口，使縱削面與砧木的形成層契合，切口兩端的砧木片覆壓在接穗兩端，固定砧木片和接穗，自下往上進行綁扎。接穗成活后，解除綁帶，剪去切口上5 cm處以上的砧木。

2　結(jié)果與分析

2.1　不同嫁接方法對嫁接成活率的影響

由表1可知，不同嫁接方法的嫁接成活率差異顯著。腹接的嫁接成活率最高，達95.5%；劈接和芽接次之，分別為77.1%和74.2%；枝接最低，為44.1%。劈接和芽接之間差異不顯著，與腹接、枝接差異極顯著；腹接與枝接之間差異極顯著。

表1不同嫁接方法對成活率的影響

嫁接方法嫁接株數(shù)成活株數(shù)成活率(%)LSD0．01枝接773444．1A芽接977274．2B劈接352777．1B腹接888495．5C

注：LSD0.01列沒有相同字母表示成活率在p<0.01水平差異顯著，有相同字母表示成活率差異不顯著。下同。

2.2　嫁接時期對嫁接成活率的影響

采用熱引4號可可為接穗，以芽接方法比較不同嫁接時間對成活率的影響。由表1可知，嫁接時期的不同導(dǎo)致嫁接成活率不同，4月上旬、10月上旬的嫁接成活率最高，成活率分別達79.5%和74.4%，12月中旬成活率最低，僅33.8%。因此，4月和10月前后是可可嫁接的最適時期。

表2不同嫁接時期對成活率的影響

嫁接時期嫁接株數(shù)成活株數(shù)成活率(%)LSD0．011月中旬682333．8A4月上旬786279．5C7月中旬1277155．9B10月上旬15611674．4C

2.3　砧木直徑對嫁接成活率的影響

在4月上旬，以芽接方法比較不同砧木直徑對嫁接成活率的影響。方差分析及多重比較表明，不同砧木直徑等級對嫁接成活率和新芽生長量沒有顯著影響。相關(guān)性分析表明，嫁接成活率與砧木直徑在一定程度上呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R2=0.923 5，回歸函數(shù)式為y=36.51x+43.32。嫁接成活后，新生萌芽生長速度與砧木直徑呈正相關(guān)。

表3砧木直徑對嫁接成活率和新芽生長的影響

砧木直徑(cm)成活率(%)萌芽長(cm)<0．5961．66．6±1．30．6～0．6969．48．5±1．50．7～0．7968．58．9±1．10．8～0．8976．49．7±0．90．9～0．9979．311．2±1．2>1．081．811．8±1．7

2.4　不同種質(zhì)接穗對嫁接成活率的影響

在4月上旬，以芽接方法比較不同種質(zhì)接穗對成活率的影響。單因子方差分析及多重比較表明，7份可可種質(zhì)接穗嫁接成活率存在極顯著差異。嫁接成活率最高的為TAS 10-9、TAS 9-9，成活率達90%以上。成活率最低的為TAS 2-13，僅為45.5%。不同種質(zhì)嫁接的平均成活率為72.3%，親和性較好的砧穗組合嫁接成活率比平均成活率高近20%。

表4不同種質(zhì)接穗嫁接成活率差異

種質(zhì)編號嫁接株數(shù)成活株數(shù)成活率(%)LSD0．01葉片數(shù)莖粗(cm)莖長(cm)TAS6?11393589．7E4．5±0．22．6±0．310．8±0．8TAS8?2422661．9AC4．1±0．33．1±0．211．4±1．1TAS10?9363391．6E3．3±0．22．5±0．212．5±1．0TAS2?13442045．5A3．7±0．32．8±0．112．4±1．0TAS9?9534890．6E3．2±0．32．5±0．18．8±0．6TASsr12362466．7AD3．7±0．32．9±0．214．5±1．8TAS4?20321856．3AB4．1±0．42．8±0．211．0±0．6

3　結(jié)論與討論

本試驗所選用接穗來自香料飲料研究所鑒定出的優(yōu)良單株，來源于東南亞、拉丁美洲、大洋洲等可可主產(chǎn)區(qū)，具有豐富的遺傳差異。傳統(tǒng)上，人們依據(jù)地理起源和形態(tài)特征將可可分成Criollo、Forastero和Trinitario (Criollo×Forastero)3大遺傳類群；最近，利用SSR標記和基因組序列分析可可種質(zhì)遺傳多樣性，將可可劃分成10大遺傳類群：Amelonado、Contamana、Curaray、Guiana、Iquitos、Maraňón、Nanay、Purús、Criollo 和Nacional[5-6]。可可遺傳多樣性分析表明，可可不同類群間表型具有明顯差異，果重、果長等變異大。不同種質(zhì)間嫁接成活率的差異在一定程度上受遺傳差異的影響，如TAS 6-11、TAS 9-9、TAS 10-9種質(zhì)均歸屬H類[7]，成活率均在90%左右，生產(chǎn)實踐中可優(yōu)先從H類中選育優(yōu)良母株作為接穗，有利于提高嫁接成活率。

不同嫁接方法接穗與砧木的貼合方式和綁扎方式不同，對嫁接成活率有顯著影響[8]?？煽筛菇臃ń铀肱c砧木間平行排布，接穗與砧木上所有切口均緊密貼合，綁扎后固定緊密并與暴露環(huán)境完全隔絕，利于接穗與砧木結(jié)合部位愈合，因此嫁接成活率較高。然而，腹接法對接穗和砧木的要求較高，接穗枝和砧木都要圓直以便于削出平直切面；砧木直徑最好大于1.2 cm，如果砧木過細，難以切出平直的切口，與砧木匹配的接穗也較少，不利于大量嫁接育苗。本研究中，可可枝接法嫁接成活率最低，原因是接穗與砧木貼合后有20～40°的夾角，綁扎后貼合部位易松動，接穗與砧木間空間較大，雨水易進入，對嫁接成活率有一定影響。

本研究結(jié)果表明，海南地區(qū)最適宜可可嫁接育苗時期為4月上旬和10月上旬。4月上旬前后氣溫穩(wěn)定，芽條萌動，嫁接成活率最高。10月上旬前后降水逐漸減少，嫁接部位易于愈合，成活率也較高，更利于嫁接種苗的規(guī)模化繁育?？煽蓸涞闹l在3—5月份萌動最為旺盛，新萌生的枝條需4—5個月長成半木質(zhì)化狀態(tài)，9—10月份時母樹上接穗量大且質(zhì)量適于嫁接?？煽煞N子屬于頑拗性種子，收獲后長時間貯藏種子活力急劇下降[9]；1—3月份成熟的可可果實占到全年的80%左右，收獲后直接用于繁苗，當年9—10月份幼苗直徑可達0.8 cm左右，便可作為砧木生產(chǎn)嫁接種苗。

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