盧海莎

(安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安順，561000)

失眠癥狀主要因患者入睡或者睡眠時(shí)間短，造成機(jī)體產(chǎn)生了睡眠障礙、睡眠質(zhì)量差而直接影響到第二天正常工作的一種主觀體驗(yàn)[1]，尤其對于老年性失眠癥，在臨床上較為常見[2]。中醫(yī)藥在治療失眠癥方面具有明顯的優(yōu)勢，其中棗仁安神膠囊方劑由酸棗仁、丹參、五味子等中藥組成，由鎮(zhèn)靜催眠、養(yǎng)血安神的作用，可用于失眠、多夢、驚悸等[3]。本次研究據(jù)參考文獻(xiàn)[4-6]以酸棗仁皂苷A、B作為觀察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，以期獲得最佳的提取工藝以及對其質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。現(xiàn)將研究步驟報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 CS-9700型雙波長薄層掃描儀器(由日本生產(chǎn))，微量注射器(北京市玻璃儀器生產(chǎn)廠)，微量定量毛細(xì)管，高速離心機(jī)(美國雅培公司生產(chǎn))，索氏提取器(北京市玻璃儀器廠生產(chǎn))。

1.2 實(shí)驗(yàn)試藥 棗仁安神膠囊(市售，某制藥公司，批號分別為170601、170602、170603)，酸棗仁皂苷A、B對照品(中國藥品生物制品檢定所)，酸棗仁、丹參、五味子(購于藥材公司)，高效硅膠G板(青島海洋化工廠)，其他試劑均為分析純。

2 制備工藝優(yōu)化方法

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用正交試驗(yàn)對棗仁安神膠囊處方組成的中藥材進(jìn)行水提工藝優(yōu)選，以提取次數(shù)(A)、加水量(B)和提取時(shí)間(C)作為試驗(yàn)因素，以出膏率和酸棗仁皂苷A、B含量作為考察指標(biāo)，因素水平見表1。

表1 提取因素水平表

2.2 最佳提取工藝的確定 采用L9(34)對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化，并進(jìn)行極差和方差分析，結(jié)果見表2，表3。

由表2的結(jié)果可知，3個(gè)因素的極差大小為A>B>C，提取次數(shù)的影響最為顯著，其他因素對制備工藝優(yōu)化的影響較小。由表3的結(jié)果可知，因素A對本方的提取具有顯著影響，因素B、C的影響性小，因此確定棗仁安神膠囊的最佳提取工藝為A3B2C2，即采用8倍量的水浸泡后提取3次，每次2.0 h時(shí)得到的出膏率最高，提取工藝最佳。

3 棗仁安神膠囊質(zhì)量控制

3.1 薄層色譜鑒別

3.1.1 供試品即對照品溶液制備 取棗仁安神膠囊內(nèi)容物4.0 g置于索氏提取器中，氯仿適量加熱回流提取至顏色為無色，將藥渣中的氯仿?lián)]發(fā)后加入甲醇溶液提取至無色，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解后，飽和正丁醇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇液，采用氨試液洗滌2次，每次10 mL，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)尤爰状? mL溶解后作為供試品溶液。另取不含酸棗仁皂苷A、B的陰性樣品，按照上述方法提取，制成陰性樣品。分別取酸棗仁皂苷A、B對照品，甲醇溶液定容后制備成2.0 mg/mL的對照品溶液。

3.1.2 鑒別 微量定量毛細(xì)管吸取酸棗仁皂苷A、B對照液2.0 μL，供試品和陰性樣品溶液5.0 μL分別點(diǎn)于同一薄層色譜板上，取正丁醇-冰醋酸-水(15∶5∶20)上層，飽和30 min后，上行展開10 cm，取出薄層板將溶劑揮干后，2.0%香草醛硫酸乙醇溶液噴色后置于100 ℃烘箱中干燥2 min。觀察供試品、對照品色譜對應(yīng)位置出現(xiàn)形狀相同的清晰深藍(lán)色斑點(diǎn)，無拖尾，陰性對照色譜中無斑點(diǎn)。

3.2 含量測定

3.2.1 供試品和對照品的制備 取棗仁安神膠囊20粒，將內(nèi)容物倒出混合后精密稱定，置于索氏提取器中按照3.1.1的操作步驟，甲醇溶液定容至2 mL作為供試品溶液。精密稱取酸棗仁皂苷A和B對照品適量，甲醇溶液定容制備成含酸棗仁皂苷A 2.30 mg/mL及酸棗仁皂苷B 1.90 mg/mL的對照品混合溶液。

3.2.2 掃描條件 單波長反射法掃描，測定波長選擇620 nm。

3.2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取酸棗仁皂苷A、B對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 μL，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣后，按照層析條件及掃描條件操作，測定各個(gè)斑點(diǎn)的面積積分值，以點(diǎn)樣量X為橫坐標(biāo)，斑點(diǎn)面積積分分值Y為縱坐標(biāo)，得到酸棗仁皂苷A回歸方程：YA=0.958X+0.921×10-4(r=0.999 8)，酸棗仁皂苷B的線性回歸方程為：YB=0.652X+0.767×10-4(r=0.999 7)，皂苷A點(diǎn)樣量在2.1～7.1 μg，皂苷B點(diǎn)樣量在2.0～6.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2.4 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取酸棗仁皂苷A、B對照品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上，共6個(gè)點(diǎn)，展開，顯色，掃描進(jìn)行測定。結(jié)果RSD值分別為2.54%、1.52%。另準(zhǔn)確吸取酸棗仁皂苷A、B對照品溶液，點(diǎn)于硅膠G薄層板，共6個(gè)點(diǎn)，展開顯色后，每隔30 min進(jìn)行掃描測定。結(jié)果表明，薄層色譜板顯色后3.0 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定，RSD值分別為1.52%、1.34%。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析

注：F0.05(2,2)=19.0

表4 酸棗仁皂苷A、B加樣回收率試驗(yàn)(n=3)

表5 酸棗仁皂苷A、B的含量(n=3)

3.2.5 加樣回收率測定 取已知含量的樣品3份精密稱定，加入一定量的酸棗仁皂苷A、B對照品溶液；再取棗仁安神膠囊20粒將內(nèi)容物取出后混勻，按照供試品溶液的制備方式制備，取一定量的溶液點(diǎn)樣，展開，顯色，掃描并進(jìn)行測定，計(jì)算加樣回收率。見表4。

3.2.6 樣品含量測定 精密吸取對照品溶液2.0 μL、3.0 μL，供試品溶液4.0 μL，分別交叉點(diǎn)于同一薄層色譜板上，用外標(biāo)2點(diǎn)法測定供試品中酸棗仁皂苷A、B的含量。見表5。

4 小結(jié)

4.1 酸棗仁為棗仁安神膠囊中的君藥，其中酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠的主要有效成分[7]，其性質(zhì)為易溶于水。水煎煮法可以提取出較多的酸棗仁皂苷有效成分，同時(shí)也符合中醫(yī)傳統(tǒng)用藥的習(xí)慣，溶劑價(jià)格便宜，容易得到[8]，結(jié)合實(shí)際的生產(chǎn)規(guī)模、安全性等因素，實(shí)驗(yàn)中確定水為生產(chǎn)工藝的提取溶劑。

4.2 正交試驗(yàn)結(jié)果得到的最佳提取工藝為A3B2C2，處方藥材重量與水為1∶8，提取3次，每次2.0 h時(shí)，浸膏率和酸棗仁皂苷A、B的提取率高，穩(wěn)定性好，在保證臨床治療療效的同時(shí)節(jié)約了提取成本。

4.3 研究過程中采用的正丁醇-冰醋酸-水(15∶5∶20)展開劑，樣品分離效果好，顯色后斑點(diǎn)清晰，無拖尾，形狀完整。

4.4 對樣品進(jìn)行索氏提取時(shí)，參考文獻(xiàn)資料有關(guān)乙醚[9]和氯仿[10]兩種提取液方法的報(bào)道，優(yōu)先氯仿作為提取液。結(jié)果表明，氯仿可以有效除去樣品中的無效雜質(zhì)和干擾因素；供試液在展開時(shí)，酸棗仁皂苷A、B可以徹底分離，能準(zhǔn)確測量含量。

本試驗(yàn)對棗仁安神膠囊中的酸棗仁皂苷A、B進(jìn)行鑒別研究，并對其進(jìn)行含量控制，可以對棗仁安神膠囊進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，為進(jìn)一步的研究及優(yōu)化提供參考依據(jù)。

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