盧士紅，葛美麗，鄭以州，楊少光，陳 芳，尤亞紅，韓忠朝

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 血液病醫(yī)院 血液學(xué)研究所國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300020

ActaAcadMedSin，2018,40(2)：178-186

骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是構(gòu)成骨髓微環(huán)境的重要細(xì)胞，其主要發(fā)揮構(gòu)成造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cell，HSC)龕支持造血及免疫調(diào)節(jié)等作用[1- 2]。骨髓中HSC賴以生存的干細(xì)胞龕由多種間充質(zhì)干細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞和成骨細(xì)胞構(gòu)成的血管龕和成骨龕組成[3- 5]，血管龕調(diào)控HSC的增殖、分化和動(dòng)員等行為。所以MSCs被認(rèn)為在調(diào)控HSC命運(yùn)中發(fā)揮重要作用[6- 8]。間充質(zhì)干細(xì)胞已經(jīng)應(yīng)用在多方面的臨床治療，如在脊髓損傷、骨損傷、糖尿病腎病和卵巢早衰以及體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨[9- 10]。也有報(bào)道骨髓中MSCs是內(nèi)皮細(xì)胞和骨細(xì)胞的前體細(xì)胞[11- 12]。已有研究顯示人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，這為間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程血管化及細(xì)胞移植修復(fù)損傷中的應(yīng)用提供了理論與技術(shù)上的支持，為復(fù)雜器官組織工程血管化及細(xì)胞移植修復(fù)損傷組織提供理想細(xì)胞來源[13]。然而，不同的MSCs亞群對(duì)造血干細(xì)胞發(fā)揮著不同的作用[14- 15]。而再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)作為一種異質(zhì)性疾病，是由多種原因引起的骨髓造血功能衰竭，其骨髓血管衰竭[16]臨床上呈全血細(xì)胞減少的一組綜合病征。目前AA患者骨髓血管衰竭的原因仍不清楚，鑒于國內(nèi)外均有文獻(xiàn)報(bào)道AA患者骨髓MSCs存在異常，其成脂能力增強(qiáng)、成骨能力減弱、支持造血能力減弱[16- 17]，但其中的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形成的血管龕是否存在缺陷，目前尚未見報(bào)道。黏附分子(adhesion molecule，AM)是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合的一類分子的統(tǒng)稱。CD106抗原，即血管細(xì)胞黏附分子- 1(vascular cell adhesion molecule- 1，VCAM- 1)屬于黏附分子，為具有多種生物活性的跨膜蛋白，是內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志性分子。因此，為了探討AA患者M(jìn)SCs(AA MSCs)形成血管的能力及受影響的因素，本研究比較AA MSCs血管形成能力，以及造成缺陷的至關(guān)因素(CD106表達(dá)及其表達(dá)高低與MSCs形成內(nèi)皮及管狀形成的能力)。

材料和方法

材料胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒、DF12培養(yǎng)基均購自美國Gibco公司；地塞米松購自美國Sigma 公司；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)均購自美國Pepertch公司；CD105-FITC、CD106-PE、CD31-FITC抗體購自美國BD Pharmingen公司；中性CD106抗體購自英國Abcam公司；肌動(dòng)蛋白-F抗體購自美國Invitrogen公司；基質(zhì)膠購自美國BD公司。

MSCs的獲取與鑒定選取中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院無菌慢性AA患者28例和正常人對(duì)照18例骨髓(標(biāo)本均獲得中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院和血液病醫(yī)院醫(yī)療與安全倫理委員會(huì)批準(zhǔn)：倫理批準(zhǔn)文件編號(hào)KT2014005-EC- 1，所有患者均同意本研究使用其相關(guān)標(biāo)本)，接種到T- 25培養(yǎng)瓶中，加入含有2%FBS的DF12/MCDB201培養(yǎng)基，含10 ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，25 ng/ml EGF，1/100胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒，10-6mol/L地塞米松。2 d后換液，待貼壁細(xì)胞長(zhǎng)至90%融合后傳代培養(yǎng)；將傳至P4 代的MSCs通過0.05%的胰酶消化收集，將部分細(xì)胞接種至共聚焦皿中，部分細(xì)胞用PBS 懸浮細(xì)胞，并分別將與CD13-PE、CD29-PE、CD73-PE、CD166-PE、CD34-PE、CD45-PE的相應(yīng)抗體4℃孵育，用PBS 洗滌細(xì)胞，用1%多聚甲醛固定細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。將共聚焦皿中長(zhǎng)至70%～80%融合的正常人 MSCs、AA MSCs甲醇固定，用1%胎牛血清封閉，分別加入抗人CD13-PE、CD29-PE、CD73-PE、CD166-PE、CD34-PE、CD45-PE的單克隆抗體，避光孵育，用PBS 洗滌細(xì)胞，加入1∶100 肌動(dòng)蛋白-F孵育，標(biāo)記Oregon Green?488鬼筆環(huán)肽染料，加4’，6-二脒基- 2-苯基吲哚二鹽酸鹽(4’，6-diamidino- 2-phenylindole，DAPI)染核，用2%多聚甲醛固定細(xì)胞，掃描共聚焦檢測(cè)照相。

MSCs基因測(cè)序?qū)4代的AA MSCs、正常人 MSCs通過胰酶消化、收集，加RNA提取試劑(TRIzol)處理，然后將合并足夠量AA MSCs、正常人MSCs的處理后的總RNA樣本提供給基因測(cè)序公司進(jìn)行高通量測(cè)序。樣品提取總RNA后，總RNA加熱打開二級(jí)結(jié)構(gòu)后用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，向得到的mRNA中加入適量打斷試劑高溫條件下使其片斷化，再以片斷后的mRNA為模板，合成cDNA，經(jīng)過磁珠純化、末端修復(fù)、3’末端加堿基A、加測(cè)序接頭后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而完成整個(gè)文庫制備工作。構(gòu)建好的文庫用Agilent2100生物分析儀和ABI 實(shí)時(shí)定量PCR 系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)量和產(chǎn)量檢測(cè)，文庫質(zhì)控合格后使用Illumina HiSeqTM 2000進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)束后，擴(kuò)大樣本用ABI 實(shí)時(shí)定量 PCR 系統(tǒng) 7500型PCR儀驗(yàn)證血管細(xì)胞黏附分子- 1(vascular cell adhesion molecule- 1，VCAM1)基因結(jié)果。

AAMSCs與正常人MSCs中CD106+細(xì)胞含量的測(cè)定取AA患者與正常人骨髓P4代MSCs，通過胰酶消化收集，用PBS 懸浮調(diào)整細(xì)胞密度到(1.0～5.0)×105個(gè)/ml，將細(xì)胞標(biāo)記抗人PE-CD106抗體，流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs中CD106+細(xì)胞含量。

CD106+MSCs在新鮮骨髓AAMSCs與正常人MSCs中含量的測(cè)定為了測(cè)定在新鮮骨髓MSCs中CD106+MSCs含量，以CD105+細(xì)胞作為新鮮骨髓中的MSCs。取無菌正常對(duì)照和AA患者檢查后剩余骨髓100 μl，同時(shí)雙標(biāo)記CD105-FITC和CD106-PE，低滲破除紅細(xì)胞、固定，然后流式細(xì)胞儀測(cè)定CD105+CD106+MSCs含量。

AAMSCs與正常人MSCs誘導(dǎo)成CD31+內(nèi)皮細(xì)胞分別將正常人與AA患者骨髓MSCs以5×104個(gè)細(xì)胞接種到6孔板中，貼壁后換成內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液，誘導(dǎo)液含有100 ng/ml VEGF、50 ng/ml EGF、5×10-5mol/L地塞米松、100 U肝素鈉、1%雙抗、5% FBS，7 d時(shí)消化細(xì)胞，以3×104個(gè)接種到33 mm共聚焦皿中，貼壁后，4%甲醛固定，然后原位標(biāo)記鼠抗人FITC-CD31抗體，用DAPI染細(xì)胞核，共聚焦顯微鏡掃描照相。

CD106被封閉后，正常人MSCs被誘導(dǎo)成CD31+細(xì)胞的能力變化消化培養(yǎng)P4代的正常人 MSCs，實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、正常阻斷組。正常阻斷組細(xì)胞與500 ng/ml CD106中和抗體(ab47159)在4℃冰箱中預(yù)孵育1 h。離心收集細(xì)胞，用內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液懸浮細(xì)胞，以5×104個(gè)細(xì)胞接種到6孔板中。誘導(dǎo)液含有100 ng/ml VEGF、50 ng/ml EGF、5×10-5mol/L地塞米松、100 U肝素鈉、1%雙抗、5% FBS，14 d時(shí)消化細(xì)胞，以3×104個(gè)接種到33 mm共聚焦皿中，貼壁后，4%甲醛固定，然后原位標(biāo)記兔抗人CD31抗體，加山羊抗兔IgG(Alexa Fluor?488)二抗，用DAPI染細(xì)胞核，2%多聚甲醛固定，共聚焦顯微鏡掃描照相。

CD106被封閉后，正常人MSCs細(xì)胞管狀形成能力的變化將基質(zhì)膠在冰浴中融化，用冷移液器槍頭吸取50 μl基質(zhì)膠(BD 354234)加入到冷96孔板底部，然后37℃靜置處理30 min，待用。消化正常人 MSCs，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、正常阻斷組。正常阻斷組細(xì)胞為與500 ng/ml CD106中和抗體(ab47159)在4℃冰箱中預(yù)孵育1 h。再分別將正常對(duì)照組與正常阻斷組的MSCs 3×104個(gè)細(xì)胞懸浮在含有20 ng/ml VEGF 的2%FBS IMDM培養(yǎng)基中，分別取100 μl細(xì)胞懸液接種在預(yù)先用基質(zhì)膠包被的96孔培養(yǎng)板中，在37℃ 5% CO2孵箱培養(yǎng)，每2小時(shí)用顯微鏡觀察1次并照相，通過Image J軟件測(cè)量小管長(zhǎng)度[18- 19]。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理通過方差分析確定顯著的差異。顯著性差異分析使用GraphPad Prism 6.0軟件(GraphPad，La Jolla，CA，USA)[16，19- 20]進(jìn)行。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

MSCs的鑒定流式細(xì)胞儀檢測(cè)及細(xì)胞免疫組織化學(xué)方法鑒定均得出MSCs 表面高表達(dá)CD13、CD29、CD73、CD166，而不表達(dá)CD34、CD45(圖1)。

MSCs：間充質(zhì)干細(xì)胞；DAPI：4’，6-二脒基- 2-苯基吲哚

MSCs：mesenchymal stem cells；DAPI：4’，6-diamidino- 2-phenylindole

A.流式法鑒定MSCs；B.免疫熒光標(biāo)記方法標(biāo)記CD13、CD29、CD73、CD166、CD34、CD45[ a1～a6：肌動(dòng)蛋白F(綠色)；b1～b6：分別為間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD13、CD29、CD73、CD166、CD34、CD45(紅色)；c1～c6：DAPI(藍(lán)色)；d1～d6：均為對(duì)應(yīng)的合并圖]

A.evaluating MSCs by fluorescence-activated cell sorting；B.identification of surface markers including CD13，CD29，CD73，CD166，CD34，and CD45 by immunofluorescence labeling [a1-a6：F-actin(green)；b1-b6：the surface markers including CD13，CD29，CD73，CD166，CD34，and CD45(red)，respectively；c1-c6：DAPI(blue)；d1-d6：the corresponding merge]

圖1MSCs流式及免疫熒光法的鑒定

Fig1Identification of MSCs by fluorescence-activated cell sorting and immunohistochemical staining technique

AAMSCs與正常人MSCs細(xì)胞的基因表達(dá)全基因測(cè)序結(jié)果顯示：AA MSCs與正常人MSCs相比有多個(gè)基因發(fā)生顯著性變化，其中上調(diào)基因768個(gè)，下調(diào)基因910個(gè)。與造血、成血管、成骨和成脂等相關(guān)多個(gè)顯著性差異基因中AA MSCs組VCAM1(CD106)基因表達(dá)量與正常人MSCs組VCAM1(CD106)基因表達(dá)量相比顯著降低，降低12.13倍(圖2A)。實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證正常人MSCs CD106基因表達(dá)量與AA MSCs CD106基因表達(dá)量，結(jié)果顯示正常人MSCs CD106 mRNA含量為1.000±0.000(n=4)，而AA MSCs細(xì)胞中CD106 mRNA含量為0.020±0.004(n=4)(P=0.000)(圖2B)。

正常人MSCs、AAMSCs細(xì)胞中CD106+細(xì)胞亞群的含量取AA患者與正常人骨髓第4代MSCs，標(biāo)記抗人PE-CD106 抗體，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD106+MSCs細(xì)胞含量，結(jié)果顯示AA CD106+MSCs細(xì)胞含量為(28.03±17.71)%，正常人 CD106+MSCs細(xì)胞含量為(59.61±12.26)%，AA患者骨髓CD106+MSCs細(xì)胞含量顯著低于正常人CD106+MSCs細(xì)胞含量(t=6.719，P=0.000)(圖3)。

CD105+CD106+MSCs在新鮮正常人、AA骨髓中的含量在新鮮骨髓中，將CD106和CD105的共同表達(dá)作為骨髓MSCs中CD106+MSCs的標(biāo)記。流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD105+CD106+MSCs在新鮮AA骨髓中CD106+MSCs含量為(0.33±0.10)%，較在新鮮正常人骨髓中CD106+MSCs的含量(2.98±0.46)%顯著降低(t=5.612，P=0.0005)(圖4)。

誘導(dǎo)AAMSCs及正常人MSCs成CD31+內(nèi)皮細(xì)胞將誘導(dǎo)的正常人與AA患者骨髓MSCs細(xì)胞7 d時(shí)原位標(biāo)記鼠抗人FITC-CD31抗體，用DAPI染細(xì)胞核，共聚焦顯微鏡掃描觀察照相，結(jié)果顯示正常人 MSCs組比AA MSCs更容易誘導(dǎo)成有內(nèi)皮細(xì)胞(CD31)標(biāo)志的細(xì)胞，7 d時(shí)正常人 MSCs組CD31+細(xì)胞占(43.24±0.96)%，AA MSCs組CD31+細(xì)胞占(13.67±1.50)%(t=11.14，P=0.0004)(圖5)。

AA：再生障礙性貧血；N：正常人

AA：aplastic anemia；N：normal

A.基因測(cè)序方法的AA MSCs 與N MSCs比較的差異基因聚類圖(紅色為上調(diào)基因，綠色為下調(diào)基因)；B.實(shí)時(shí)定量PCR方法驗(yàn)證AA MSCs 與N MSCs 血管細(xì)胞黏附分子-1(CD106)基因表達(dá)變化

A.a clustering dendrogram was constructed according to the gene sequencing results of AA MSCs and N MSCs(the red indicates the up-regulated genes，and the green shows the down-regulated ones)；B.the real-time polymerase chain reaction was used for the verification of vascular cell adhesion molecule- 1(CD106) gene expression in AA MSCs and N MSCs

圖2AA MSCs 與N MSCs的基因表達(dá)比較

Fig2Comparison of the gene expression of AA MSCs and N MSCs

A.流式測(cè)定N MSCs、AA MSCs中CD106+MSCs的含量；B.比較AA MSCs、N MSCs 中CD106+MSCs的含量圖

A.the levels of CD106+MSCs in N MSCs and AA MSCs were measured by fluorescence-activated cell sorting；B.the levels of CD106+MSCs in N MSCs and AA MSCs was compared

圖3CD106+MSCs亞群在N MSCs、AA MSCs中的含量

Fig3Contents of CD106+MSCs in AA MSCs and N MSCs

A.流式測(cè)定在N、AA新鮮骨髓MSCs中CD106+MSCs的含量；B.比較新鮮骨髓AA MSCs、N MSCs 中 CD106+MSCs的含量

A.the content of CD106+MSCs in N and AA fresh bone marrow MSCs was measured by fluorescence-activated cell sorting；B.the contents of CD106+MSCs in fresh bone marrow of N MSCs and AA MSCs were compared

圖4CD106+MSCs亞群在新鮮骨髓N MSCs、AA MSCs中的含量

Fig4The contents of CD106+MSCs in fresh bone marrow of AA MSCs and N MSCs

A.共聚焦檢測(cè)AA MSCs及N MSCs成內(nèi)皮CD31+細(xì)胞；B.被誘導(dǎo)成CD31+細(xì)胞在AA MSCs及N MSCs 中所占比例

A.CD31+endothelial cells were detected by confocal microscopy；B.the proportion of CD31+cells induced from N MSCs and AA MSCs

圖5AA MSCs及N MSCs被誘導(dǎo)成CD31+內(nèi)皮細(xì)胞

Fig5The MSCs from AA MSCs and N MSCs were induced into CD31+endothelial cellsinvitro

CD106分子被封閉后，誘導(dǎo)MSCs成CD31+細(xì)胞被封閉的正常人阻斷組細(xì)胞被誘導(dǎo)形成CD31+細(xì)胞能力顯著降低，14 d時(shí)對(duì)照組CD31+細(xì)胞為(91.78±2.44)%(n=3)，正常人 阻斷組CD31+細(xì)胞為(26.00±2.65)%(n=3)(t=18.29，P=0.000)(圖6)。

CD106分子被封閉后，誘導(dǎo)正常人MSCs細(xì)胞成管狀形成能力被封閉的正常人阻斷組細(xì)胞接種到基質(zhì)膠中，MSCs管狀形成能力顯著降低，而且出現(xiàn)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)不完整，顯微鏡照相，通過Image J軟件測(cè)量小管長(zhǎng)度，管狀結(jié)構(gòu)形成能力對(duì)照組為(68.12±6.781)mm，阻斷CD106組為(13.81±1.979)mm(t=7.688，P=0.0015)(圖7)。

討 論

AA是一組由多種病因所致的骨髓造血功能衰竭性綜合征，以骨髓造血細(xì)胞增生減低和外周血全血細(xì)胞減少為特征，臨床以貧血、出血和感染為主要表現(xiàn)。盡管已知某些病毒、藥物、化學(xué)物質(zhì)及電離輻射等與AA的發(fā)病有關(guān)，但其確切發(fā)病機(jī)制迄今仍未完全明了。目前認(rèn)為，異常免疫、HSC缺陷和造血微環(huán)境支持功能低下為AA病理機(jī)制的3個(gè)重要環(huán)節(jié)。

關(guān)于AA造血微環(huán)境的研究近年有較大進(jìn)展，國內(nèi)外均有文獻(xiàn)報(bào)道AA患者骨髓中血管衰竭[13]。亦有文獻(xiàn)報(bào)道AA患者M(jìn)SCs存在異常，其成脂能力增強(qiáng)、成骨能力減弱[17]，但其形成骨髓血管龕的能力如何報(bào)道較少。本研究顯示擴(kuò)增培養(yǎng)的AA MSCs比正常人 MSCs在體外被誘導(dǎo)成內(nèi)皮細(xì)胞的能力也明顯減弱，表明AA MSCs細(xì)胞比正常人骨髓中MSCs細(xì)胞更難生成血管；全基因測(cè)序顯示AA MSCs中VCAM1(CD106)基因表達(dá)顯著降低，流式檢測(cè)顯示AA患者骨髓體外培養(yǎng)的MSCs缺失CD106+細(xì)胞亞群，進(jìn)一步研究顯示，抽取新鮮骨髓后流式檢測(cè)CD105+CD106+MSCs含量，AA患者較正常人明顯降低，均表明CD106+MSCs在形成骨髓血管龕中發(fā)揮了重要作用。為進(jìn)一步證實(shí)此結(jié)論，本研究利用中和抗體阻斷正常MSCs的CD106分子，然后誘導(dǎo)成內(nèi)皮細(xì)胞，研究表明阻斷CD106分子后的正常MSCs被誘導(dǎo)成內(nèi)皮和形成管狀結(jié)構(gòu)能力都明顯降低，進(jìn)一步表明CD106+MSCs細(xì)胞群是骨髓干細(xì)胞血管龕中重要的細(xì)胞成分。

A.共聚焦檢測(cè)N MSCs和阻斷CD106后的N MSCs誘導(dǎo)成的內(nèi)皮CD31+細(xì)胞；B.被誘導(dǎo)成CD31+細(xì)胞在對(duì)照組和阻斷組中所占比例

A.detection of CD31+endothelial cells differentiation from N MSCs and CD106-blocking N MSCs by confocal microscopy；B.the proportion of CD31+cells induced in N MSCs group and N block group

圖6N MSCs及阻斷血管細(xì)胞黏附分子-1(CD106)抗原后的N MSCs誘導(dǎo)形成的CD31+細(xì)胞

Fig6The CD31+cell differentiation from N MSCs and vascular cell adhesion molecule- 1(CD106)-blocking N MSCs

A.顯微鏡照相N MSCs及N MSCs-阻斷組形成管狀結(jié)構(gòu)圖；B.正常對(duì)照組及正常阻斷組形成管狀結(jié)構(gòu)小管長(zhǎng)度

A.the tubular structures formation from N MSCs group and N block group by photomicrography；B.the total tube length of tubular structures in N MSCs group and N block group

圖7在基質(zhì)膠中N MSCs及N MSCs-CD106阻斷形成管狀結(jié)構(gòu)的比較

Fig7The tubular structures formation in N MSCs group and N block group

CD106是能介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互接觸和結(jié)合的一類分子，是內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志性分子，為具有多種生物活性的跨膜蛋白。在骨髓中造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞之間的相互作用通過α4β1(VLA4)/VCAM1(CD106)交互作用介導(dǎo)[21- 26]。其中HSC與間質(zhì)細(xì)胞以及HSC與干細(xì)胞龕之間附著力的交互作用在調(diào)控HSC的命運(yùn)中被認(rèn)為發(fā)揮著重要的作用[8，24]。另外，有CD106缺陷的小鼠胚胎是不能成活的，其一半的胚胎在胚胎期的第11天前死亡，并在胎盤發(fā)育過程中表現(xiàn)出嚴(yán)重的缺陷，剩下的胚胎存活到胚胎期的11.5～12 d，并且在心臟發(fā)育過程中出現(xiàn)了異常[27]。粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員干細(xì)胞也是通過CD106和CXCL12的表達(dá)減少，得以對(duì)HSC的動(dòng)員[28]。所以更加說明CD106+MSCs細(xì)胞亞群是骨髓干細(xì)胞龕中重要細(xì)胞。

本研究顯示AA新鮮骨髓CD105+CD106+MSCs含量較正常人顯著降低，其體外培養(yǎng)后CD106+MSC含量顯著降低，形成內(nèi)皮細(xì)胞及血管能力下降，進(jìn)一步阻斷CD106抗原后，形成內(nèi)皮及血管能力顯著下降，表明CD106與血管形成密切相關(guān)。

綜上，AA患者骨髓MSCs CD106基因表達(dá)缺失、CD106+MSCs含量降低，致使被誘導(dǎo)成血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力明顯遲緩，如將MSCs封閉CD106抗原后，其被誘導(dǎo)成CD31+細(xì)胞能力及管狀結(jié)構(gòu)形成能力顯著降低，可能促進(jìn)患者的骨髓血管衰竭。

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