金廷海 韓立忠 王雅倩

白斑狗魚（Esox lucius）屬狗魚科（Esocidae），狗魚屬（Esox），分布于亞洲、歐洲和北美，我國(guó)僅產(chǎn)于新疆北部額爾齊斯河流域，是新疆特產(chǎn)的以肉食性活餌為主的野生性經(jīng)濟(jì)魚類[1]。白斑狗魚病害少，養(yǎng)殖周期短，肉質(zhì)鮮美，體大肉厚，堅(jiān)韌少刺，深受全國(guó)市場(chǎng)青睞[2]。

目前國(guó)內(nèi)外魚類學(xué)者對(duì)關(guān)于溫度和pH值對(duì)魚類消化酶活性影響的研究報(bào)道較多[3-5]，但關(guān)于白斑狗魚消化酶方面的研究較少[6]，研究了白斑狗魚在不同溫度和pH下不同消化器官中三種酶的活性大小。魚類消化道的結(jié)構(gòu)不同其消化功能也存在差異，一般研究消化酶的種類及分布時(shí)將魚類的消化道分為胃、肝胰臟、幽門盲囊和腸道，腸道又可分為前腸、中腸、后腸，通常不同消化器官內(nèi)分布消化酶的種類和消化酶的活力各不相同，同一種類的同一種酶，也會(huì)因其他條件（溫度、季節(jié)、食物、攝食狀態(tài)等）的變化，其活性分布也有所不同[7]。魚類對(duì)食物的消化主要發(fā)生在胃和腸的前部，大多數(shù)魚類腸道中的消化酶活性由前段向后段呈遞減趨勢(shì)[8-9]。本實(shí)驗(yàn)主要研究越冬期白斑狗魚不同消化器官中消化酶的活性及pH對(duì)其酶活性的影響，以便為越冬期白斑狗魚的飼養(yǎng)提供有價(jià)值的信息。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 白斑狗魚來源 引自新疆養(yǎng)殖地在長(zhǎng)春養(yǎng)殖越冬后的4條白斑狗魚，魚體健康，體型勻稱，平均體重為304.9 g，體長(zhǎng)平均為38.1 cm。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶溶液、0.9% NaCl溶液、考馬斯亮藍(lán)染液、新鮮牛奶、95%乙醇、酚酞試劑、0.01 mol/L的NaOH溶液、1%淀粉溶液、0.025 mol/L、pH為6.9的磷酸緩沖液、3，5-二硝基水楊酸顯色液、6 mol/L NaOH、蒸餾水、10 g/L酪蛋白、0.025 mol/L磷酸緩沖溶液（pH 7.5）、10%的三氯醋酸、0.55 mol/L Na2CO3、Folin-酚試劑、0.2 mol/L磷酸二氫鈉-檸檬酸鈉緩沖液。

1.2 方法

1.2.1 酶粗液的制備 將白斑狗魚先在冰箱中冷凍保存，取魚4尾，將實(shí)驗(yàn)魚隨機(jī)分成兩組，每次取一組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)兩次，參照劉玉梅[10]等的方法制備粗提取液，分別測(cè)定淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的活性。

1.2.2 脂肪酶活性的測(cè)定 脂肪酶活性的測(cè)定參照酚酞試劑指示滴定法[11]。酶活性定義為pH 7.5時(shí)，每分鐘催化鮮牛奶產(chǎn)生1 μmol脂肪酸為1個(gè)脂肪酶活性單位。

1.2.3 磷酸緩沖溶液及pH值梯度的設(shè)定 以0.2 mol/L磷酸二氫鈉-檸檬酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH，在37 ℃恒溫水浴鍋條件下。pH梯度因部位不同而有區(qū)別，胃的pH梯度設(shè)定為2.0～6.5范圍內(nèi)，以pH值0.5為一個(gè)梯度， 肝胰臟pH梯度設(shè)定為3.0～7.5范圍內(nèi)， 以pH值0.5為一個(gè)梯度，腸pH梯度設(shè)定為5.0～9.5范圍內(nèi)，以pH值0.5為一個(gè)梯度測(cè)出各部位消化酶在37 ℃下最適宜的pH值。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

用EXCEL對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，并用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P>0.05即認(rèn)為有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 pH值對(duì)脂肪酶活性的影響

在37 ℃下，由圖3可知胃脂肪酶在pH 2.0～4.0之間活性迅速上升，在pH 4.0時(shí)活性達(dá)到最高為230 U/（min·g），此后，隨pH值增加活性開始快速降低，胃脂肪酶的最適pH為4.0；肝胰臟脂肪酶在pH 3.0～4.5之間活性成上升趨勢(shì)，在3.0～4.0之間上升緩慢，在4.0～4.5之間迅速上升，在pH 4.5時(shí)活性達(dá)到最高為342 U/（min·g）此后，隨pH值增加活性開始降低，在4.5～5.5之間快速下降，5.5～7.5之間下降速度減緩，肝胰臟脂肪酶的最適pH為4.5；前腸和中腸在pH值6.0～7.5之間活性成上升趨勢(shì)，6.0～6.5之間上升緩慢，6.5～7.5之間迅速上升，在pH 7.5時(shí)活性達(dá)到最高分別為388 U/（min·g）和468 U/（min·g），此后，隨著pH的增加活性快速下降，前腸和中腸脂肪酶的最適pH分別為7.5和7.5；后腸脂肪酶在pH 6.0～7.0之間活性迅速上升，在pH 7.5時(shí)活性達(dá)到最高為480 U/（min·g）， 此后，隨pH值增加活性快速降低，后腸脂肪酶的最適pH為7.5。詳見圖1和圖2，胃和肝胰臟脂肪酶的最適宜pH值在弱酸性范圍，前腸、中腸和后腸的最適宜pH值在中性或略偏堿性范圍。

2.2 不同消化器官脂肪酶活性比較

白斑狗魚不同器官脂肪酶活性在最適宜pH值條件下，脂肪酶活性后腸>中腸>前腸>肝胰臟>胃（P>0.05），腸是脂肪的主要消化場(chǎng)所，依次是肝胰臟和胃，而在腸中，后腸是脂肪的主要消化場(chǎng)所，詳見表1和圖3。

3 討論

本研究結(jié)果表明，在37 ℃時(shí)，白斑狗魚消化系統(tǒng)不同部位脂肪酶的最適宜pH值不同。 本研究結(jié)果表明，白斑狗魚胃、肝胰臟、前腸、中腸和后腸脂肪酶的最適宜pH值分別為4.0、4.5、7.5、7.5和7.0， 本研究結(jié)果與其他文獻(xiàn)[12]略有不同，這可能與魚的種類和食物種類不同有關(guān)，也可能與魚類生活水溫和研究時(shí)所處的溫度不同有關(guān)，這需要進(jìn)一步研究才能得出結(jié)論。從pH值對(duì)脂肪酶的影響來看， 在37 ℃下，胃和肝胰臟內(nèi)脂肪酶在強(qiáng)酸或弱酸條件下活性最高；前腸、中腸和后腸內(nèi)脂肪酶則在中性或偏堿性條件下活性最強(qiáng)。這一結(jié)果于消化系統(tǒng)生理機(jī)能是一致的，因魚類的胃內(nèi)多為強(qiáng)酸性，飽食后腸內(nèi)多呈堿性，這與文獻(xiàn)[13]結(jié)果相吻合。John[14]認(rèn)為，魚類消化酶的最適宜溫度為30～50 ℃，在37 ℃下，脂肪酶活力表現(xiàn)為腸>肝胰臟>幽門盲囊>胃，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與前者相近，由此可知腸道是白斑狗魚的主要消化部位。

酶的活性受環(huán)境pH值的影響極為顯著，pH值是酸堿度大小的反映，其對(duì)魚類生理活性的影響是多方面的[15]。酸堿度的作用一方面對(duì)食物進(jìn)行酸堿性的消化，另一方面是為消化酶提供適宜的pH值。通常各種酶只有在一定pH值范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性。因此，為了充分保證食物的消化吸收，促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)發(fā)育，可以在飼料中加入一定的酸化劑和外源性酶制劑，這樣可以提高飼料的利用率，同時(shí)減少有有機(jī)物的排泄量，從而減輕水體污染。

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