（青海省海南藏族自治州興海縣畜牧獸醫(yī)工作站，海南 813399）

1 實驗方法與材料

1.1 實驗材料選取

實驗動物選擇青海省興?？h一養(yǎng)殖場提供的健康羊100只，在實驗之前，對實驗動物進(jìn)行虎紅平板凝集試驗檢測布氏桿菌均為陰性。本次研究所選擇的兩個疫苗，分別來自兩個不同生產(chǎn)企業(yè)，S2疫苗和M5疫苗的生產(chǎn)批號分別為1112007、2011002，全部為凍干和菌疫苗，均在有效期內(nèi)。羊布魯氏桿菌虎紅平板凝集實驗試劑為標(biāo)準(zhǔn)羊布魯氏桿菌抗原、布魯氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)血清、布魯氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。上述材料均購自于中國科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.2 實驗方法

本次研究共設(shè)計5組實驗，每組20只羊，分別采用不同疫苗、不同免疫方法、不同免疫次數(shù)，就羊體內(nèi)抗體轉(zhuǎn)陽率進(jìn)行分析，找出最佳的疫苗接種方案，確保免疫效果，為制定更加合理的羊布魯氏桿菌免疫方案提供相應(yīng)數(shù)據(jù)參考。[1]在免疫的第15 d、第30 d、第60 d、第90 d、第120 d、第145 d分別對各實驗組羊群采集新鮮血液，并及時分離血清，測定免疫抗體轉(zhuǎn)陽率?？贵w檢測方法采用虎紅平板凝集試驗，并嚴(yán)格按照國家相關(guān)規(guī)定嚴(yán)格操作。

2 實驗結(jié)果

2.1 不同疫苗對羊布魯氏桿菌病免疫抗體轉(zhuǎn)陽率的影響

分別使用S2疫苗和M5疫苗，對實驗1組羊群進(jìn)行疫苗免疫，每種疫苗免疫羊10只，免疫30 d后再進(jìn)行1次強(qiáng)化免疫，按照疫苗免疫使用說明書的相關(guān)免疫方法操作，免疫后定期采集血液制備血清，檢測抗體轉(zhuǎn)陽率。通過對結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，2種疫苗分別進(jìn)行免疫和強(qiáng)化免疫以后羊群均能夠達(dá)到良好的抗體水平，免疫第15 d到第145 d，抗體轉(zhuǎn)陽率始終維持在100%。

2.2 同種疫苗不同免疫次數(shù)對比實驗

表1 S2疫苗不同免疫次數(shù)陽抗體轉(zhuǎn)陽率檢測結(jié)果（%）

用S2疫苗對實驗2組羊群進(jìn)行疫苗免疫免疫，30 d后對同組的10只羊再進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，并按照疫苗免疫使用說明書指定的免疫方法進(jìn)行免疫免疫后，定期采集血清檢測抗體轉(zhuǎn)陽率。通過表1數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，羊群免疫15 d內(nèi)身體內(nèi)快速產(chǎn)生免疫應(yīng)答抗體水平進(jìn)一步提升，并在30 d內(nèi)持保持在較高抗體水平。對同組的10只羊進(jìn)行強(qiáng)化免疫后，抗體水平一直保持在相對穩(wěn)定的高抗體水平，而進(jìn)行第1次免疫的10只羊在30 d后，抗體水平呈現(xiàn)顯著下降，到145 d抗體轉(zhuǎn)陽率已經(jīng)下降到接近于5%以下。詳細(xì)情況如表1所示。

按照上述方法用M5疫苗對實驗3組羊群進(jìn)行免疫注射，30 d后對同組的10只羊進(jìn)行1次強(qiáng)化免疫注射，采集羊群新鮮血液進(jìn)行血清檢測實驗。檢測結(jié)果和表1變化基本一致。

2.3 同種疫苗不同免疫方法對比實驗

用S2疫苗分別采用自由飲水、人工灌服、皮下注射、肌肉注射4種不同免疫方法，對實驗4組羊群進(jìn)行免疫，每種方法免疫5頭羊，免疫30 d后，分別使用上述4種方法，強(qiáng)化免疫1次。免疫之后分別采集羊群新鮮血液制備血清，進(jìn)行抗體轉(zhuǎn)陽率檢測。通過對結(jié)果進(jìn)行分析可以發(fā)現(xiàn)，自由人水和人工灌服2種方法均不能獲得良好的免疫效果，皮下注射和肌肉注射能夠起到很好的免疫作用，隨著時間的增長，免疫效果持續(xù)穩(wěn)定，詳細(xì)情況如表2所示。

表2 S2疫苗不同免疫方法抗體轉(zhuǎn)陽率檢測結(jié)果（%）

用M5疫苗按照上述免疫方法，對試驗5組羊群進(jìn)行免疫，免疫30 d后再進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，免疫后及時檢測血清中的抗體轉(zhuǎn)陽率。檢測結(jié)果顯示和表2趨勢基本一致。

3 討論

通過上述實驗可以發(fā)現(xiàn)，2種疫苗均能夠使羊產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，第1次免疫30 d后強(qiáng)化免疫一次，能夠有效提高羊體內(nèi)抗體水平，并且免疫持續(xù)期更長[2]。而不同的免疫方法，所取得的免疫效果也存在較大差異性，其中自由飲水免疫效果最差，皮下注射和肌肉注射免疫效果最佳，其中肌肉注射相對于皮下注射來說，前期能夠獲得較好的免疫效果，后期差異性不顯著[3]。由此可以看出，在進(jìn)行羊布魯氏桿菌疫苗免疫過程中，應(yīng)該采用皮下注射或者肌肉注射，這樣能夠有效提高免疫效果，避免疫苗浪費(fèi)。同時在第一次疫苗免疫后，還要繼續(xù)強(qiáng)化免疫一次，因為單次免疫并不能有效提高羊群體內(nèi)抗體水平。

[1] 鄒瑩．布魯氏菌病的免疫程序[J]．獸醫(yī)科技信息，1994(3):3.

[2] 樊武昌．生豬布魯氏菌病的綜合防控措施淺析[J]．南方農(nóng)業(yè)，2017 (30):101-102．

[3] 李建玲，李愛巧．烏魯木齊牛羊布魯氏菌疫苗免疫效果對比試驗[J]．中國動物檢疫，2013，30(4):47-49．