許志文 張小全 胡育瑋 魏星 張鋆鋆 郭傳濱 楊立均 夏宗良

摘 要：為探明烤煙不同生長發(fā)育時期葉片保水力變化特征，以抗旱性不同的3個烤煙品種移栽后10、30、50和70 d的離體葉片為材料，研究了不同發(fā)育時期葉片保水力、葉片失水24 h前后抗氧化酶活性、激素和抗逆脅迫響應(yīng)基因表達(dá)的變化特征。結(jié)果表明，品種、發(fā)育時期以及兩者互作對葉片保水力的貢獻(xiàn)率分別為63.09%、24.65%、12.25%，3因素均對烤煙葉片保水力有極顯著的影響。3個品種的葉片保水力表現(xiàn)為植株發(fā)育后期相對較高，同一發(fā)育時期為豫煙6號最高，ND202最低。葉片失水后抗氧化酶活性（SOD、POD、CAT）均表現(xiàn)升高，其中以豫煙6號增幅最大，SOD與POD活性在植株發(fā)育后期增幅較大；MDA含量與相對電導(dǎo)率增幅為豫煙6號最小，各品種在植株發(fā)育后期增幅較??；葉片失水后ABA含量升高，IAA含量略有降低，烤煙發(fā)育后期IAA、CTK和GA含量明顯降低；葉片失水后脅迫響應(yīng)基因（AREB、CDPK2、LEA5、ERD10C）表達(dá)量顯著升高，以豫煙6號增幅最大，各時期增幅均表現(xiàn)出豫煙6號>K326>ND202，與品種間葉片保水力趨勢相一致。本試驗說明品種的遺傳因素是影響烤煙葉片保水力的關(guān)鍵因素，各時期均可采用葉片保水力進(jìn)行抗旱鑒定。

關(guān)鍵詞：葉片保水力；生長發(fā)育時期；品種因素；脅迫響應(yīng)基因

中圖分類號：S572.01 文章編號：1007-5119（2018）02-0017-08 DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2018.02.003

Characteristics of Leaf Water Retention Capacity in Flue-cured Tobacco at Different Growth Stages

XU Zhiwen1， ZHANG Xiaoquan1*， HU Yuwei1， WEI Xing1， ZHANG Yunyun1， GUO Chuanbin2，

YANG Lijun2， XIA Zongliang3

（1. College of Tobacco Sciences， Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， China； 2. Zhumadian Tobacco Company of Henan Province， Zhumadian 463000， China； 3. College of Life Sciences， Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， China）

Abstract： In order to elucidate the characteristics of leaf water retention at different developmental stages of flue cured tobacco， excised leaves of three varieties Yuyan 6， ND202 and K326 with different drought resistance 10， 30， 50 and 70 d after transplanted were used as materials to analyze the change of leaf water retention， antioxidant enzyme activities， hormone and stress resistance gene expression. The results showed that variety， growth stage and their interaction all had significant effects on the water holding capacity， with the contribution rates being 63.09%， 24.65% and 12.25%， respectively. The water holding capacity of leaves of the three varieties was relatively higher at the late stage， with Yuyan6 being the highest and ND202 being the lowest at the same development stage. The activities of antioxidant enzymes （SOD， POD， CAT） were all increased after dehydration， and the increase of Yuyan 6 was the largest. The activities of SOD and POD increased greatly at the late stage. The increase of MDA content and relative conductivity of the three varieties were lower at later stage， and Yuyan6 had the lowest increase. After dehydration， the content of ABA increased， the content of IAA decreased slightly， and the contents of IAA， CTK and GA decreased obviously at the later stage. The expression levels of four stress responsive genes （AREB， CDPK2， LEA5， ERD10C） increased greatly after dehydration， and the largest increase was found in Yuyan 6， followed by K326 and ND202， which is consistent with the trend of water retention between varieties. The results suggested that the genetic factors of the varieties were the key factors affecting water holding capacity of tobacco， and leaf water retention could be used in drought resistance identification at different developmental stages in the field.

Keywords： leaf water retention capacity； growth and development stage； variety factor； stress responsive gene

基金項目：河南省煙草公司駐馬店市公司項目“駐馬店煙區(qū)特色烤煙品種篩選與配套技術(shù)研究”（ZMDKJ201502）；河南省煙草公司重點(diǎn)項目

“烤煙抗旱分子標(biāo)記的開發(fā)及其育種應(yīng)用潛力研究”（HYKJ201401）

作者簡介：許志文（1992-），男，在讀碩士，研究方向：煙草遺傳育種。E-mail：xzw15218026@163.com。*通信作者，E-mail：zxq013415@163.com

收稿日期：2017-10-27 修回日期：2018-01-08

水分是調(diào)控?zé)熤晟L發(fā)育并影響烤煙產(chǎn)質(zhì)量的關(guān)鍵因素。持續(xù)水分脅迫容易導(dǎo)致烤煙光合作用受阻，生長發(fā)育受到抑制，內(nèi)在化學(xué)成分失調(diào)，產(chǎn)質(zhì)量大幅下降[1-3]。葉片保水力是葉片在離體條件下保持自身水分的能力，作為重要抗旱性鑒定指標(biāo)具有操作方法簡單、樣本容量大的優(yōu)點(diǎn)，在小麥[4]、玉米[5]、油菜[6]、煙草[7]、紅樹等[8]抗旱性鑒定中有大量應(yīng)用。吳兆蘇[9]認(rèn)為測定離體葉片保水力可能是篩選小麥抗旱性最有希望的技術(shù)。

大量研究表明葉片保水力的大小與植物遺傳性、細(xì)胞特性和原生質(zhì)膠體性質(zhì)有關(guān)，同時與葉片發(fā)育狀態(tài)相關(guān)。CLARKE等[10-11]對不同發(fā)育階段不同基因型的硬質(zhì)小麥離體葉片保水力進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育時期葉片保水力存在差異，得出了需在抽穗期之前完成取樣的結(jié)論。張小全等[12]研究表明，烤煙葉片保水力的合適測定時間為離體葉片自然失水24 h，且相同發(fā)育時期不同葉位之間保水力差異不顯著。而不同烤煙品種在不同發(fā)育時期葉片保水力變化特征卻不清楚。本研究以抗旱性不同的3個烤煙品種豫煙6號、ND202和K326為材料[13]，研究了烤煙品種與發(fā)育時期對葉片保水力的影響，測定了不同發(fā)育時期3個烤煙品種抗氧化酶活性、激素和抗逆脅迫響應(yīng)基因表達(dá)量的變化特征，以期探明品種與發(fā)育時期對葉片保水力影響的機(jī)制，為應(yīng)用葉片保水力作為煙草抗旱性鑒定和抗旱育種選擇指標(biāo)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與處理

選用抗旱性不同的豫煙6號、ND202和K326為試驗品種。試驗于2016年在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)許昌校區(qū)進(jìn)行，選取3個品種整齊一致的煙苗于4月30日移栽至大田，株距55 cm，行距120 cm。每品種種植4行，每行100株。供試土壤為輕壤土，土壤中堿解氮含量為48.8 mg/kg，速效磷含量為51.7 mg/kg，速效鉀含量為103.9 mg/kg，pH為7.7。田間管理措施按當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙葉栽培技術(shù)規(guī)程進(jìn)行。

于移栽后10 d（還苗期）、30 d（團(tuán)棵期）、50 d（旺長期）和70 d（圓頂期），分別選取各煙株正常生長，葉片完整、朝向一致中部葉片9片，用于葉片保水力及相關(guān)生理指標(biāo)的測定。

1.2 測定指標(biāo)與方法

1.2.1 葉片保水力的測定 采用離體葉片自然失水法測定，具體步驟如下：早上8：00—9：00在田間摘取葉片后，迅速裝入塑料封口袋密封，置于冰盒內(nèi)迅速帶回人工氣候室（溫度25±1 ℃，相對濕度40%）。將樣葉取出，迅速擦干葉片上沾有的水分，選取3片葉用電子天平稱取葉片鮮質(zhì)量（mf0），而后懸掛于人工氣候室內(nèi)，24 h后再次稱其質(zhì)量，獲得每個樣品的mf24。然后將稱量后的葉片105 ℃殺青30 min，95 ℃烘干至恒質(zhì)量，稱取干質(zhì)量（md）。分別在0 h和24 h各選取6片葉，用于相關(guān)生理指標(biāo)含量變化測定。葉片保水力采用下面公式計算：

葉片保水力（%）= （mf24-md）×100/（mf0-md）

1.2.2 生理指標(biāo)測定 抗氧化酶活性測定參考文獻(xiàn)[14]的方法。丙二醛（MDA）含量和相對電導(dǎo)率參照李合生[15]的方法測定。可溶性蛋白含量測定參照考馬斯亮藍(lán)法測定[16]。脫落酸（ABA）、生長素（IAA）、細(xì)胞分裂素（CTK）和赤霉素（GA）含量的測定采用酶聯(lián)免疫吸附分析法[17]。

1.2.3 脅迫響應(yīng)基因的相對表達(dá)量分析 樣品總RNA的提取按照美國Invitrogen公司TRIZOL試劑說明書操作，反轉(zhuǎn)錄參照立陶宛Fermentas公司的RevertAid TM First Strand cDNA Synthesis Kit產(chǎn)品說明書進(jìn)行，合成第一鏈cDNA。PCR擴(kuò)增采用BioRad iQ5實時定量PCR儀進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后將熒光值（CT）導(dǎo)入Excel 2007，按照公式2-△△CT計算目的基因的相對表達(dá)量[18]，并繪制基因表達(dá)差異圖。AREB、CDPK2、ERD10C和LEA5為4個研究較多的干旱脅迫響應(yīng)基因[19-22]。內(nèi)參基因（ACTIN2）和4個脅迫響應(yīng)基因的引物信息參考文獻(xiàn)[23]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析采用DPS 7.05和Excel 2007進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 不同發(fā)育時期葉片保水力變化

由表1看出，品種、發(fā)育時期以及兩者互作3個因素均對烤煙葉片保水力有極顯著的影響，品種、發(fā)育時期以及兩者互作對葉片保水力的貢獻(xiàn)率分別達(dá)到了63.09%、24.65%和12.25%。說明品種因素對葉片保水力起著關(guān)鍵作用，不同發(fā)育時期葉片狀態(tài)以及葉片與生長環(huán)境的互作也對烤煙葉片保水力有重要的影響。

由表2看出，3個品種的葉片保水力均表現(xiàn)為葉片發(fā)育后期相對較高，豫煙6號和K326移栽后50 d左右葉片保水力達(dá)到最大，ND202移栽后70 d左右葉片保水力達(dá)到最大。移栽后10、30、50和70 d各品種中部葉片的保水力均表現(xiàn)為豫煙6號最高、ND202最低，豫煙6號在4個時期均顯著高于ND202。說明烤煙不同發(fā)育時期的葉片保水力是變化的，但在相同發(fā)育時期品種間的趨勢是一致的。

2.2 不同發(fā)育時期葉片離體失水前后生理指標(biāo)變化

3個品種不同發(fā)育時期葉片失水24 h前后的生理指標(biāo)測定結(jié)果顯示，不同發(fā)育時期葉片失水后抗氧化酶活性均呈現(xiàn)不同程度的上升，其中以豫煙6號增幅最大（圖1A、B、C），說明豫煙6號抗逆反應(yīng)較為高效。3個品種葉片失水前后SOD活性的增幅隨發(fā)育時期呈不斷擴(kuò)大趨勢（圖1A），POD活性增幅也表現(xiàn)為移栽后50 d較高（圖1B），說明隨著葉片發(fā)育，各結(jié)構(gòu)功能趨于完善，抗逆反應(yīng)變得更加高效。不同發(fā)育時期葉片經(jīng)過24 h失水，葉片可溶性蛋白含量均增加，且同時期均為豫煙6號增幅最大（圖1E）?？緹熑~片失水后相對電導(dǎo)率以及MDA含量均不同程度增加，同時期以豫煙6號增幅最小，ND202增幅最大（圖1D、F），說明豫煙6號葉片細(xì)胞傷害程度較輕，ND202最重，這與同時期保水力趨勢相一致。MDA含量、可溶性蛋白含量以及相對電導(dǎo)率增幅均在移栽后70 d時表現(xiàn)出最?。▓D1D、E、F），與此時期氣溫較高，葉片蒸騰失水較多且頻繁，且葉片已發(fā)育完全，使葉片對脫水有了較強(qiáng)的適應(yīng)能力，葉片細(xì)胞抗脫水能力也有所增強(qiáng)有關(guān)。

2.3 不同發(fā)育時期葉片離體失水前后激素含量變化

表3顯示，各品種葉片失水后ABA含量均表現(xiàn)升高，豫煙6號增幅較大，說明其抗逆反應(yīng)較為高效。IAA含量略有降低。ABA水平隨發(fā)育時期呈先升后降趨勢，移栽后50 d時達(dá)到最高值。促進(jìn)植物生長發(fā)育的IAA、CTK、GA含量均表現(xiàn)為葉片發(fā)育后期明顯低于前期，與后期葉片發(fā)育逐漸完成，生長需求降低一致。

2.4 不同發(fā)育時期烤煙葉片抗逆基因相對表達(dá)量變化

4個干旱脅迫響應(yīng)基因的相對表達(dá)量分析結(jié)果顯示（圖2），葉片失水24 h后4個基因的相對表達(dá)量均顯著升高，各時期增幅均表現(xiàn)出豫煙6號>K326>ND202，與品種間葉片保水力趨勢相一致。不同發(fā)育時期3品種鮮葉片的各脅迫應(yīng)答基因表達(dá)量均無顯著差異，說明在正常水分條件下品種間脅迫響應(yīng)基因表達(dá)狀況較為接近，在感受到水分虧缺后不同品種的脅迫應(yīng)答基因會做出不同程度的反應(yīng)，從而造就了不同品種葉片保水力不同，抗旱性也不同。說明不同烤煙品種的葉片保水力差異主要是由品種的遺傳因素決定的。

3 討 論

保持水分散失與自身吸水率間的平衡是植物維持自身含水量的重要途徑[24]。植物的吸水主要通過根系，但水分散失主要通過葉片。葉片離體以后吸水途徑喪失，只能通過保持自身水分來維持細(xì)胞平衡，此過程中會發(fā)生一系列代謝反應(yīng)并最終通過葉片保水力反映出來。因此，離體葉片的保水力可以反應(yīng)植物原生質(zhì)的耐脫水能力和葉片角質(zhì)層的保水能力。對3個烤煙品種不同發(fā)育時期葉片離體24 h前后抗氧化酶活性、MDA含量、相對電導(dǎo)率、激素和抗逆脅迫響應(yīng)基因表達(dá)量的變化特征研究發(fā)現(xiàn)，保水力高的品種豫煙6號脅迫響應(yīng)相關(guān)基因AREB、CDPK2、LEA5和ERD10C的相對表達(dá)量增幅均最大，干旱脅迫信號激素ABA含量的上升幅度、清除活性氧應(yīng)激的抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性的上升幅度在各時期也均最大。說明烤煙品種本身的遺傳因素是影響烤煙葉片保水力的關(guān)鍵因素。

本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)育時期因素對烤煙葉片保水力有極顯著的影響，貢獻(xiàn)率達(dá)到24.65%，不同發(fā)育時期的烤煙葉片保水力存在顯著差異，與CLARKE等[10-11]在小麥上的研究結(jié)果一致。3個品種的葉片保水力均表現(xiàn)為葉片發(fā)育后期相對較高。移栽后10d豫煙6號和K326中部葉的葉片保水力均極顯著的低于之后時期，ND202則是在移栽后70 d葉片保水力才顯著的增加，與田間ND202前期地上部分生長發(fā)育較慢，葉片伸長和擴(kuò)展較其他2個品種滯后的現(xiàn)象一致。煙草葉片的生長分為3個時期，一是細(xì)胞分裂生長期，即從幼葉出現(xiàn)到定型葉長的20%～40%為止，葉片增大以細(xì)胞分裂增加為主；二是細(xì)胞伸長生長期，從定型葉長度的20%～40%到70%～80%，此時期葉面積的增大以細(xì)胞伸長為主；三是細(xì)胞腔隙擴(kuò)展期，從定型葉長度的70%～80%到葉片定長為止，葉片增大以細(xì)胞間隙填充為主[25]。移栽后30 d到70 d，烤煙中部葉片逐漸由細(xì)胞分裂生長期變化到細(xì)胞腔隙擴(kuò)展期，葉片內(nèi)含物增加，葉片組織結(jié)構(gòu)由疏松變緊湊，且角質(zhì)層發(fā)育逐漸完整，因此葉片保水力隨著發(fā)育時期的推進(jìn)逐漸增加。田間烤煙生長發(fā)育后期氣溫較高，葉片頻繁遭遇大量蒸騰失水，植株常處于水分脅迫狀態(tài)，IAA、GA等生長發(fā)育相關(guān)激素含量會降低以減緩自身生長，提高抗旱力，減輕逆境造成的傷害[26]，這可能也是本試驗中烤煙發(fā)育后期保水力較高的原因?？緹熑~片的保水力高低與品種本身的遺傳因素、葉片的發(fā)育時期均相關(guān)，品種的遺傳因素是影響烤煙葉片保水力的關(guān)鍵因素。因而，在應(yīng)用葉片保水力作為煙草抗旱性鑒定和抗旱育種選擇指標(biāo)時，在相同的環(huán)境條件、相同的發(fā)育時期、相同的葉位取樣鑒定，葉片保水力的高低可反映出不同材料抗旱性能的強(qiáng)弱。而不同品種葉片自身結(jié)構(gòu)對葉片保水力的影響，以及品種間脅迫響應(yīng)基因表達(dá)高低不同的原因尚不明確，可對葉片超微結(jié)構(gòu)、角質(zhì)層及抗逆基因的時空表達(dá)規(guī)律等進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

烤煙品種、發(fā)育時期以及兩者互作均對烤煙葉片保水力有極顯著的影響，品種因素對葉片保水力的貢獻(xiàn)率達(dá)到了63.09%。葉片保水力隨著發(fā)育時期

的推進(jìn)逐漸增加，同一發(fā)育時期葉片保水力均為 豫煙6號最高，ND202最低。不同發(fā)育時期3個烤 煙品種抗氧化酶活性、激素和抗逆脅迫響應(yīng)基因表 達(dá)量變化特征的研究結(jié)果也證實，品種的遺傳因素 是影響烤煙葉片保水力的關(guān)鍵因素，在烤煙田間生 長各時期均可測定葉片保水力進(jìn)行抗旱鑒定。

參考文獻(xiàn)

[1]陳潔宇，周冀衡，鄧小剛，等.干旱脅迫對不同育苗方式烤煙生長和生理生化特性的影響[J].煙草科技，2011（8）：84-88.

CHEN J Y， ZHOU J H， DENG X G， et al. Effects of drought stress on growth， physiological and biochemical characteristics of flue-cured tobacco from seedling cultured by different seedbed systems[J]. Tobacco Science&Technology， 2011（8）： 84-88.

[2]董順德，張延春，孫德梅，等. 干旱脅迫下烤煙礦質(zhì)養(yǎng)分含量與煙葉產(chǎn)、質(zhì)量的關(guān)系[J].煙草科技，2005（2）：30-34.

DONG S D， ZHANG Y C， SUN D M， et al. Relationship between content of mineral nutrients and yield and quality of flue-cured tobacco under dought stress[J]. Tobacco Science&Technology， 2005（2）： 30-34.

[3]胡瑋，康俊，劉陽，等.干旱脅迫對不同煙草品種光合生理特性的影響[J].中國煙草科學(xué)，2013，34（2）：69-73.

HU W， KANG J， LIU Y， et al. The effect of drought stress on photosynthetic physiological characteristics of the different tobacco varieties[J]. Chinese Tobacco Science， 2013， 34（2）： 69-73.

[4]WINTER S R， MUSIK K B. Evaluation of screening technique for breeding drought-resistant winter wheat[J]. Crop Science， 1988， 28： 512-516.

[5]徐蕊，王啟柏，張春慶，等.玉米自交系抗旱性評價指標(biāo)體系的建立[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42（1）：72-84.

XU R， WANG Q B， ZHANG C Q， et al. Drought-resistance evaluation system of maize inbred[J]. Scientia Agricutura Sinica， 2009， 42（1）： 72-84.

[6]王丹丹.甘藍(lán)型油菜遺傳圖譜構(gòu)建及苗期耐旱相關(guān)性狀的QTL定位[D].重慶：西南大學(xué)，2014.

WANG D D. Mapping and QTL analysis of genes to drought tolerance in Brassica napus L.[D]. Chongqing： Southwest University， 2014.

[7]錢澤勇，張會龍，荊曉姝，等.胡楊Ring finger E3連接酶PeRH2提高煙草耐旱機(jī)制研究[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2015，34（3）：454-463.

QIAN Z Y， ZHANG H L， JING X S， et al. Overexpression of ring finger E3-ligase gene PeRH2 from populus euphratica in tobacco enhances drought tolerance in transgenic plants[J]. Genomics and Applied Biology， 2015， 34（3）： 454-463.

[8]LECHTHALER S， ROBERT E M R， TONN? N， et al. Rhizophoraceae mangrove saplings use hypocotyl and leaf water storage capacity to cope with soil water salinity changes[J]. Frontiers in Plant Science， 2016， 7： 1-13.

[9]吳兆蘇.小麥育種學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1990：289-296.

WU Z S. Wheat breeding[M]. Beijing： Agriculture Press， 1990： 289-296.

[10]CLARKE J M， Mccaig T N. Excised-leaf water retention capability as an indicator of drought resistance of triticum genotypes[J]. Canadian Journal of Plant Science， 1982， 62（3）： 571-578.

[11]CLARKE J M. Phenological variability： effect on determination of leaf water loss in wheat[J]. Crop Science， 1992， 32（6）： 1457-1459.

[12]張小全，許志文，闞紅贏，等.不同葉位和離體時間對烤煙葉片保水能力的影響[J]. 中國煙草學(xué)報，2017，23（4）：33-39.

ZHANG X Q， XU Z W， KAN H Y， et al. Effects of different leaf positions and excised leaf dehydration time on water retention capacity of flue-cured tobacco leaves[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2017， 23（4）： 33-39.

[13]任慶成，陳秀華，張生杰，等.不同烤煙品種抗旱生理特征比較研究[J].西北植物學(xué)報，2009，29（10）：2019-2025.

REN Q C， CHEN X H， ZHANG S J， et al. Comparison of drought resistance characteristics of different flue-cured tobacco varieties[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica. 2009， 29（10）： 2019-2025.

[14]LI Q， YU B， GAO Y， et al. Cinnamic acid pretreatment mitigates chilling stress of cucumber leaves through altering antioxidant enzyme activity[J]. Journal of Plant Physiology， 2011， 168（9）： 927-934.

[15]李合生.植物生理生化實驗原理和技術(shù)[M].北京：高等教育出版社，2000：280-283.

LI H S. Principles and techniques of plant physiological biochemical experiment[M]. Beijing： Higher Education Press， 2000： 280-283.

[16]BRADFORD M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Analytical Biochemistry， 1976， 72（s 1-2）： 248-254.

[17]VERSLUES P E， AGARWAL M， KATIYARAGARWAL S， et al. Methods and concepts in quantifying resistance to drought， salt and freezing， abiotic stresses that affect plant water status[J]. Plant Journal， 2006， 45（4）： 523-539.

[18]LIVAK K J， SCHMITTGEN T D， et al. Analysis of relative gene expression date using real-time quantitative

PCR and the 2-ΔΔCT method[J]. Method， 2001， 25： 402-408.

[19]FUJITA Y， YOSHIDA T， YAMAGUCHISHINOZAKI K. Pivotal role of the AREB/ABF-SnRK2 pathway in ABRE-mediated transcription in response to osmotic stress in plants[J]. Physiologia Plantarum， 2013， 147（1）： 15-27.

[20]HARMON A C， GRIBSKOV M， GUBRIUM E， et al. The CDPK superfamily of protein kinases[J]. New Phytologist， 2010， 151（1）： 175-183.

[21]YANG L， LI W， JIANG S， et al. Group 5 LEA protein， ZmLEA5C， enhance tolerance to osmotic and low temperature stresses in transgenic tobacco and yeast[J]. Plant Physiology & Biochemistry， 2014， 84： 22-31.

[22]LIU X， LIU S， WU J， et al. Overexpression of arachis hypogaea NAC3 in tobacco enhances dehydration and drought tolerance by increasing superoxide scavenging[J]. Plant Physiology & Biochemistry， 2013， 70（1）： 354-359.

[23]霍勇錦，徐紫薇，王燃，等.干旱脅迫下嫁接對煙草抗氧化酶活性、膜脂過氧化及脅迫響應(yīng)基因表達(dá)的影響[J].煙草科技，2016，49（8）：14-20.

HUO Y J， XU Z W， WANG R， et al. Effects of grafting on antioxidant enzyme activities， membrane lipid peroxidation and stress-responsive gene expression in tobacco under drought stress[J]. Tobacco Science&Technology， 2016， 49（8）： 14-20.

[24]BATES J W. Book review： desiccation and survival in plants： drying without dying[J]. Quarterly Review of Biology， 2003， 78（4）： 79-80.

[25]劉國順. 煙草栽培學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：221-222.

LIU G S. Tobacco cultivation[M]. Beijing： China Agriculture Press， 2003： 221-222.

[26]李長寧，謝金蘭，王維贊，等.水分脅迫下甘蔗差異表達(dá)基因篩選及激素相關(guān)基因分析[J].作物學(xué)報，2015，41（7）：1127-1135.

LI C N， XIE J L， WANG W Z， et al. Screening of differentially expressed genes and analysis of plant hormones related genes under water stress in sugarcane[J]. Acta Agronomica Sinica， 2015， 41（7）： 1127-1135.