包永華，王璐璐，劉帆

(1.浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術學院 應用工程系，杭州 310018；2.浙江方圓檢測集團股份有限公司，杭州 310013)

火鍋，古稱“古董羹”，是一種頗受我國人們歡迎的美食。但近年來，火鍋卻頻頻被曝出一些安全問題[1]，少數(shù)不法經(jīng)營者為了牟取暴利，在火鍋底料中違法添加罌粟殼(籽)或其粉碎物、浸提物[2]，誘騙食用者中毒成癮, 危害消費者健康。針對此種行為國家已多次明令禁止，但由于現(xiàn)行業(yè)內(nèi)缺乏快速有效、針對性強的檢測方法，使得食品安全執(zhí)法工作存在一定難度。

罌粟殼，俗稱“米殼”，為植物罌粟的干燥成熟果殼[3]，含有20多種生物堿，其中以嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因、那可丁等為主要成分[4]。這些生物堿的副作用亦不可低估[5]，長期食用無論從身體上還是心理上都會對其產(chǎn)生嚴重的依賴性，造成毒物癖，對自身和社會都造成了很大的危害。

目前，罌粟殼中生物堿的測定方法主要有分光光度法[6]、層析法[7]、示波極譜法[8]、氣相色譜法[9]、液相色譜法[10]、液質(zhì)聯(lián)用法[11]和氣質(zhì)聯(lián)用法[12]。但由于火鍋底料中香料物質(zhì)眾多，給微量生物堿的檢出造成了嚴重干擾[13]。因此有必要建立一種預處理方法簡便、檢測靈敏、定量準確且快速的方法來測定食品中罌粟殼殘留物的含量。本研究以上海市食品安全地方標準(DB 31/2010-2012)[14]《火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中的實驗方法為基礎，著重對生物堿的提取、樣品預處理過程進行優(yōu)化，確保在能達到低檢出限要求的同時，控制回收率在90%～110%以內(nèi)，RSD均小于10%。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料：火鍋底料，購于杭州世紀聯(lián)華超市。

試劑：罌粟堿(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司，濃度10 mg/L；那可丁(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司，濃度10 mg/L；蒂巴因(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司，濃度10 mg/L；嗎啡(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司，濃度50 mg/L；可待因(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司，濃度50 mg/L；可待因(D3內(nèi)標)(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司, 濃度20 mg/L；嗎啡(D3內(nèi)標)(純度97.5%)，CDGG-G34-142340-01-1 mL，上海安譜，o2si公司, 濃度20 mg/L；乙腈，德國Merck公司，型號1.00030.4008，含量99.9%，規(guī)格4 L；C18，上海安譜實驗科技股份有限公司，100 g/瓶；PSA，上海安譜實驗科技股份有限公司，100 g/瓶；超純水儀，美國Millipore公司；濾膜，北京迪馬科技有限公司，13 mm，0.22 μm，100/pk。

1.2 儀器與設備

1290 Infinity高效液相色譜儀 Agilent Technologies公司；QTRAP 5500 串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀 AB SCIEX公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：C18柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動相：乙腈+0.1%甲酸水(梯度洗脫)；流速：0.3 mL/min；柱溫: 30 ℃；進樣量: 5 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子源：ESI；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：MRM；霧化氣GS1：65.0 psi；輔助加熱氣GS2：65.0 psi；氣簾氣CUR：35.0 psi；輔助氣溫度TEM：500 ℃；噴霧電壓IS：4800 V；入口電壓EP：10.0 V；碰撞池電壓CXP：12.0 V；碰撞氣CAD：Medium。5種生物堿質(zhì)譜條件參數(shù)見表1。

表1 5種生物堿質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS parameters of five alkaloids

注：“*”為定量離子。

1.3.3 標準溶液的配制

將罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡、可待因配制成濃度為10 mg/L以及1 mg/L的標樣待用。

1.3.4 樣品預處理

取樣品5 g，加入5 μL，濃度為20 mg/L的內(nèi)標，加入10 mL乙腈，充分渦旋后振蕩10 min，12000 r/min離心5 min后提取上清液，分別加入適量C18和PSA吸附凈化粉末，充分渦旋后靜置約3 min，取適量上清液過0.22 μm濾膜，上機待測即可。

2 結果與分析

2.1 標樣質(zhì)譜圖

根據(jù)DB 31/2010-2012標準中的要求，那可丁、罌粟堿、蒂巴因定量限為25 μg/kg，可待因和嗎啡定量限為125 μg/kg。因此按照改進步驟中的稀釋倍數(shù)，將 1.3.3 中配制好的標準溶液再次稀釋后分別適量加入空白樣的火鍋底料中，使得那可丁、罌粟堿、蒂巴因標樣上機濃度為5 μg/L，可待因和嗎啡上機濃度為25 μg/L。經(jīng)過改進的實驗方法處理后，進樣分析。

圖1 那可丁出峰質(zhì)譜圖Fig.1 The mass-spectrogram of narcotine

圖2 罌粟堿出峰質(zhì)譜圖Fig.2 The mass-spectrogram of papaverine

圖3 蒂巴因出峰質(zhì)譜圖Fig.3 The mass-spectrogram of thebaine

圖4 可待因出峰質(zhì)譜圖Fig.4 The mass-spectrogram of codeine

圖5 嗎啡出峰質(zhì)譜圖Fig.5 The mass-spectrogram of morphine

圖6 內(nèi)標物出峰質(zhì)譜圖Fig.6 The mass-spectrogram of internal standard

由圖1～圖6可知，那可丁出峰時間在3.36 min，峰高最大值9.3e5 cps；罌粟堿出峰時間在3.34 min，峰高最大值1.1e6 cps；蒂巴因出峰時間在3.30 min，峰高最大值6.7e5 cps；可待因出峰時間在0.95 min，峰高最大值2.5e5 cps；D3-可待因內(nèi)標出峰時間在0.95 min，峰高最大值5.5e4 cps；嗎啡出峰時間在0.95 min，峰高最大值1.2e5 cps；D3-嗎啡內(nèi)標出峰時間在0.94 min，峰高最大值2.4e4 cps。由此可見，火鍋湯料中的基質(zhì)對嗎啡、罌粟堿等生物堿的檢測并無干擾，出峰時間穩(wěn)定，峰形較為明顯。

2.2 回收率試驗

取上述陰性樣品，分別加入不同量的標準溶液，使得那可丁、罌粟堿、蒂巴因、可待因、嗎啡理論上機濃度分別為5，10，15，20，25 μg/L，按照 1.3.4 樣品預處理方法進行處理，上機進樣分析后，結果見表 2。

表2 各目標物加標回收率Table 2 The recovery rates of five alkaloids

經(jīng)過多次實驗表明，該改良版實驗步驟能夠完全保證實驗數(shù)據(jù)的有效可行性，回收率控制在90%～110%。

2.3 精密度試驗

取濃度為 5 μg/L的基質(zhì)標準溶液，重復進樣3次，結果見表 3。

表3 檢測方法精密度Table 3 Precision of inspection method

由表3可知，那可丁、罌粟堿、蒂巴因、可待因、嗎啡3次相應的RSD值在0.19%～1.33%范圍內(nèi)，精密度良好。

2.4 實際樣品測定

為驗證方法的可靠性，從超市購買了某品牌火鍋底料，根據(jù)改進后的方法進行測定，樣品均未檢出這5種生物堿目標物，結果令人滿意。

3 結論

優(yōu)化了樣品預處理過程。針對火鍋底料高油脂的特性，采用乙腈作為溶劑直接振蕩離心提取，C18和PSA靜置凈化，可將嗎啡、罌粟堿等生物堿測定出來，且經(jīng)過多次實驗證明，該優(yōu)化方法能夠達到標準要求的目標物檢出限。

檢測方法靈敏度高，操作簡便，可靠，重現(xiàn)性好。采用超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜法定量檢測了火鍋底料中罌粟堿、嗎啡、那可丁、蒂巴因以及可待因5種生物堿成分的含量。罌粟堿、嗎啡、那可丁、蒂巴因以及可待因的回收率控制在95%～105%以內(nèi)，RSD為0.19%～1.33%，該方法可充分適用于火鍋底料以及其他油脂含量較高食品中生物堿的測定。

參考文獻：

[1]劉少偉,阮贊林.火鍋底料暗藏貓膩——高湯“勾兌門”事件[J].質(zhì)量與標準化,2017(2):39-40.

[2]饒德榮,章厚安,林昌祥,等.火鍋底料中添加罌粟殼的檢驗方法探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,1992(6):373-374.

[3]高志瑩,洪霞,劉琦,等.UPLC-MS/MS同時測定肉湯中5種罌粟殼生物堿[J].食品研究與開發(fā),2017,38(10):118-123.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015 年版 (第一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:369-370.

[5]張虹,廖文娟,蔡增軒,等.液質(zhì)聯(lián)用法檢測摻罌粟殼食物中生物堿的殘留[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005(12):93-97.

[6]張忠會,王惠達,楊威.罌粟殼生物堿的可見分光光度法測定[J].中成藥,2002(7):51-52.

[7]馬明善,李巖,尤杰玉.摻偽食品中罌粟殼的紙層色譜測定法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,1992(6):375.

[8]陶銳,高舸,楊元.火鍋湯料中嗎啡的示波極譜測定[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,1994(3):140-143.

[9]杜黎明,許慶琴,吳秀蘭.大口徑毛細管氣相色譜法測定罌粟殼中的生物堿[J].色譜,1999(6):578-579.

[10]董南,王海燕.高效液相色譜法檢測食品中多種香料共存時的罌粟殼[J].色譜,2000(6):554-555.

[11]王柯,鄭榮,簡龍海,等.火鍋調(diào)料中5種生物堿成分的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(2):363-365.

[12]沈平,謝朝梅,謝燕湘.氣相色譜-質(zhì)譜法測定食品中罌粟殼提取物的殘留量[J].理化檢驗(化學分冊),2016,52(1):48-51.

[13]張林田,史佳虹,楊晞,等.火鍋底料及小吃類食品中非法添加罌粟殼的危害及檢測技術研究進展[J].福建分析測試,2014(3):9-13.

[14]DB 31/2010-2012,火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].