王雪 李海全 萬(wàn)青山 肖香 陳橋 黃宇

1.四川省北川羌族自治縣農(nóng)業(yè)局

2.四川省三臺(tái)縣農(nóng)業(yè)局

禽流感是一種由A型流感病毒引起的多種家禽及野鳥(niǎo)的高度接觸性傳染病，被OIE列為A類傳染病，我國(guó)也將其列為一類動(dòng)物疫病，為強(qiáng)制免疫病種。2016-2017年期間，為分析春秋兩季集中免疫質(zhì)量，及時(shí)掌握流行病學(xué)動(dòng)態(tài)和免疫效果，筆者在每年的5月和11月對(duì)轄區(qū)內(nèi)部分規(guī)模場(chǎng)、散戶進(jìn)行H5型高致病性禽流感抗體的血清學(xué)監(jiān)測(cè)采樣和檢測(cè)，現(xiàn)將近2年的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

一、材料與方法

1.試劑。自配阿氏液，1%雞紅細(xì)胞懸液，pH7.2的0．Olmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS），H5型禽流感抗原，及陰、陽(yáng)對(duì)照血清（由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供），批號(hào):20160401，20170512。

2.采樣。

（1）采樣選擇。共對(duì)17個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)、180個(gè)村218戶采樣。如表1。

表1北川縣高致病性禽流感監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)

（2）采樣要求。每個(gè)家禽均采用翅靜脈采取血液，并記錄地址、日齡、養(yǎng)殖規(guī)模、免疫次數(shù)、最近免疫時(shí)間、品種及使用疫苗的相關(guān)資料。

（3）采集內(nèi)容。共采集雞血583份、鴨血25份、鵝血10份，每個(gè)樣品采血量1.5～2.0ml。

3.檢測(cè)方法。血凝抑制試驗(yàn):采集血液后，及時(shí)分離出血清，并參照H5高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）和禽流感微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（SN/T1182.2-2004）的規(guī)定，采用血凝抑制試驗(yàn)，集中對(duì)血清樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并作系統(tǒng)分析。

4.結(jié)果判定。以完成抑制4個(gè)HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2 log2．陽(yáng)性對(duì)照孔血清誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，試驗(yàn)結(jié)果才有效。HI價(jià)小于或等于3 log2判定HI試驗(yàn)陰性；HI價(jià)等于4 log2為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；HI價(jià)大于或等于 5 log2 為陽(yáng)性。

二、結(jié)果與分析

2016年全年共檢測(cè)免疫禽血清310份，其中合格255份，平均合格率為82.3%。2017年全年共檢測(cè)免疫禽血清308份，其中合格237份，平均合格率為77%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 2016-2017年北川縣H5高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果 份

1．規(guī)模場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果。在2016年總檢測(cè)數(shù)90份中，合格79份，平均合格率為88%，2017年總檢測(cè)數(shù)80份中，合格71份，平均合格率為89.5%。

2.散養(yǎng)戶檢測(cè)結(jié)果。在2016年總檢測(cè)數(shù)220份中，合格176份，平均合格率為80%，2017年總檢測(cè)數(shù)228份中，合格166份，平均合格率為72.8%。

三、結(jié)論與討論

1.規(guī)模場(chǎng)的抗體水平普遍比較高，這些養(yǎng)殖場(chǎng)基本上是外地購(gòu)買(mǎi)雞苗，蛋雞居多，選址嚴(yán)格，周圍有天然的免疫屏障，有專業(yè)的獸醫(yī)技術(shù)人員駐場(chǎng)或作技術(shù)指導(dǎo)，疫苗有專規(guī)范保存和運(yùn)輸，按照科學(xué)的免疫程序進(jìn)行接種。商品代養(yǎng)殖場(chǎng)均經(jīng)兩次禽流感免疫，有時(shí)新禽二聯(lián)和重組禽流感間隔免疫。

2.有的散養(yǎng)戶禽流感免疫抗體合格率始終較規(guī)模場(chǎng)低的原因主要有以下幾方面：（1）免疫程序不科學(xué)。有些散養(yǎng)場(chǎng)養(yǎng)殖戶防疫意識(shí)淡薄，重點(diǎn)靠春秋兩季集中免疫，基礎(chǔ)免疫過(guò)遲或加強(qiáng)免疫的間隔時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，加之北川地處山區(qū)，家禽多散養(yǎng)林間，存在免疫困難，免疫效果差；（2）疫苗的運(yùn)輸和保存不當(dāng)。北川山區(qū)養(yǎng)殖戶不集中，村社間距離遠(yuǎn)，疫苗浪費(fèi)嚴(yán)重，禽流感滅活油乳苗稀釋后要在當(dāng)天內(nèi)用完，禽流感一新城疫重組二聯(lián)活疫苗稀釋后2小時(shí)內(nèi)用完。有些養(yǎng)禽戶家禽散養(yǎng)不方便抓，多用二聯(lián)苗飲水，自行擠到水槽內(nèi)，之前沒(méi)有限水，無(wú)法保證2小時(shí)內(nèi)喂完，水槽也沒(méi)清理干凈，家禽免疫效果不得而知；（3）疫苗使用前準(zhǔn)備不充分，未按免疫劑量接種，加大或減少劑量。疫苗使用前溫度回到室溫的水平，油乳劑要充分搖勻，加上注射過(guò)程中操作技術(shù)不熟練，出現(xiàn)空打或少打。有的還隨意減少或加大劑量，造成免疫抑制或不能產(chǎn)生足夠的抗體，以致抗體水平偏低；（4）禽苗首免10～14日齡，但是散養(yǎng)戶考慮到家禽日齡比較小，一般不讓免疫。以致抗體水平低。

3.需要注意的是，本次檢測(cè)的規(guī)模場(chǎng)樣品170份中，陽(yáng)性率雖然都達(dá)到80%以上，但是尚未出現(xiàn)達(dá)100%免疫合格率的雞群，仍需要認(rèn)真分析免疫過(guò)程中的各種問(wèn)題，按照強(qiáng)制免疫計(jì)劃做好強(qiáng)制免疫工作。2017年比2016年春秋防規(guī)模場(chǎng)檢測(cè)合格率要略高，原因應(yīng)該是2017年局里加強(qiáng)了規(guī)模場(chǎng)管理，大部分用的是重組禽流感，而有文獻(xiàn)表明重組禽流感比新禽二聯(lián)苗效果要好。農(nóng)業(yè)部2017年起增加對(duì)H7型高致病性禽流感免疫，新禽二聯(lián)苗將退出市場(chǎng)，但是禽流感不能飲水免疫對(duì)于散戶抗體達(dá)標(biāo)始終存在困難，

4.HI主要檢測(cè)血清中針對(duì)HA蛋白的抗體，具有特異性，HA抗體的產(chǎn)生在很大程度上反映了機(jī)體對(duì)病毒感染的抵抗力水平。因此，免疫是預(yù)防和控制禽流感最有效的手段。在家禽生產(chǎn)中，長(zhǎng)期對(duì)AI的血清學(xué)監(jiān)測(cè)是十分必要的，同時(shí)多做宣傳，定期培訓(xùn)縣內(nèi)的基層防疫員，了解疫苗注射流程及必要性，最終提升禽流感的抗體合格率。