王 倩，趙向婭，趙倩茹，楊 軼，楊勝楠，李 冰，李 馨，田 蕊

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年綜合二科，河南 鄭州 450052)

腎間質(zhì)纖維化是慢性腎臟病(chronic kidney disease，CKD)進(jìn)展的共同途徑。持續(xù)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)可促進(jìn)腎損傷，導(dǎo)致腎小管間質(zhì)纖維化[1]。巨噬細(xì)胞在調(diào)節(jié)腎臟炎癥及纖維化中發(fā)揮重要作用，且與疾病進(jìn)展有關(guān)。血液中的單核細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同途徑分化為M1型或M2型巨噬細(xì)胞，M1型巨噬細(xì)胞具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)的作用，引起腎臟纖維化，M2型巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗炎作用，促進(jìn)腎臟修復(fù)[2-3]。環(huán)氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids，EETs)是花生四烯酸經(jīng)細(xì)胞色素P450作用后的代謝產(chǎn)物，主要在心血管和腎臟循環(huán)中發(fā)揮舒張血管、抗炎等效應(yīng)，其中14，15-環(huán)氧二十碳三烯酸(14，15-epoxyeicosatrienoic acids,14，15-EET)的活性最強(qiáng)。EETs被可溶性表氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase，sEH)催化形成脫氫二十碳三烯酸(dihydroxyeicosatrienoic acids，DHET)，從而降低或失去活性[4]。在順鉑導(dǎo)致的急性腎損傷、單側(cè)輸尿管結(jié)扎導(dǎo)致的腎臟纖維化等多種動(dòng)物模型中，通過(guò)抑制sEH的表達(dá)可增加EETs水平，減輕巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，改善腎功能，保護(hù)腎臟[5-9]。巨噬細(xì)胞極化是單核細(xì)胞活化后一系列功能狀態(tài)的2個(gè)極端，在感染、代謝和免疫等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但關(guān)于sEH如何調(diào)控腎組織中巨噬細(xì)胞極化的作用機(jī)制尚不明確。本研究選用腎小管上皮細(xì)胞系及巨噬細(xì)胞系為研究對(duì)象，觀察蛋白尿刺激對(duì)腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生sEH和巨噬細(xì)胞極化相關(guān)炎性因子的影響，探討腎小管上皮細(xì)胞中sEH對(duì)巨噬細(xì)胞極化的作用，為延緩CKD進(jìn)展提供新的治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1主要試劑與儀器人近端腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞、小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC公司。高糖達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle medium，DMEM)、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司，sEH抑制劑12-(3-金剛烷-1-烴基-脲基)正十二烷酸[12-(3-adamantan-1-yl-ureido)-dodecanoic acid，AUDA]、14，15-EET/14，15-DHET 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒、兔抗小鼠sEH抗體購(gòu)自美國(guó)Caymann公司，干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-4購(gòu)自美國(guó)Perotech公司，二辛可寧酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Pierce公司，兔抗小鼠β-actin購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。蛋白質(zhì)電泳、轉(zhuǎn)膜及凝膠成像分析系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司，實(shí)時(shí)定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)Stratagene公司。

1.2細(xì)胞培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞及小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞置于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM中，在37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～85%融合時(shí)，給予無(wú)胎牛血清的DMEM靜置24 h，將細(xì)胞同步靜止于G0期。

1.3尿蛋白提取收集病理診斷為IgA腎病患者(初治患者腎穿刺前)晨尿250 mL，采用NH4SO4沉淀法提取尿蛋白。選用截留相對(duì)分子質(zhì)量為3 500的透析袋透析NH4SO4蛋白質(zhì)溶液。濃縮尿蛋白溶液：將蛋白質(zhì)溶液置于透析袋中，放置在聚乙二醇8000粉末中；將50～100 mL溶液濃縮至 5～10 mL 待用。尿蛋白粉末凍干：取1～2 mL濃縮的蛋白質(zhì)溶液置于清潔的青霉素小瓶?jī)?nèi)，傾斜放置于-20 ℃冰箱過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)至-80 ℃冰箱凍存1 d；然后置于凍干機(jī)內(nèi)6～10 h，得到蛋白質(zhì)粉末。

1.4尿蛋白溶液制備此操作嚴(yán)格在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行。取一定量的蛋白質(zhì)粉末置于干凈的10 mL離心管中，稱(chēng)質(zhì)量后用DMEM溶解為濃度為1 000 g·L-1的尿蛋白溶液，利用22 μm濾器過(guò)濾尿蛋白溶液，將尿蛋白溶液加入含有DMEM的無(wú)菌培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5 % CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 3 d，進(jìn)行驗(yàn)菌實(shí)驗(yàn)；經(jīng)驗(yàn)菌實(shí)驗(yàn)陰性，保證無(wú)菌后可用于處理細(xì)胞。

1.5實(shí)驗(yàn)分組將人近端腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞分為正常對(duì)照組、sEH抑制劑組、尿蛋白組和sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組。正常對(duì)照組細(xì)胞不給予任何干預(yù)處理，sEH抑制劑組細(xì)胞給予1 μmol·L-1AUDA，尿蛋白組細(xì)胞給予10 g·L-1尿蛋白，sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組細(xì)胞給予10 g·L-1尿蛋白和1 μmol·L-1AUDA，各組細(xì)胞均培養(yǎng)24 h，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。將小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞分為A組、B組、C組、D組、M1型巨噬細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組(IFN-γ陽(yáng)性對(duì)照組)、M2型巨噬細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組(IL-4陽(yáng)性對(duì)照組)。分別取正常對(duì)照組、sEH抑制劑組、尿蛋白組和sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組培養(yǎng) 24 h 的HK-2細(xì)胞培養(yǎng)基上清液，1 500 r·min-1離心3 min，取上清液備用。A、B、C、D組細(xì)胞分別加入正常對(duì)照組、sEH抑制劑組、尿蛋白組、sHE抑制劑聯(lián)合尿蛋白組培養(yǎng)24 h的HK-2細(xì)胞培養(yǎng)基上清液孵育 24 h；IFN-γ陽(yáng)性對(duì)照組和IL-4陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞均加入孵育24 h的正常對(duì)照組HK-2細(xì)胞培養(yǎng)基，并分別加入M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑IFN-γ(100 μg·L-1)和M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑IL-4(20 μg·L-1)孵育 24 h。

1.6Westernblot法檢測(cè)HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)細(xì)胞培養(yǎng)皿應(yīng)用磷酸鹽緩沖液洗3次，加入預(yù)冷的放射免疫沉淀裂解液和蛋白酶抑制劑的全細(xì)胞裂解液，刮下細(xì)胞，超聲粉碎后于4 ℃下13 000×g離心15 min，取上清液置于 -80 ℃ 冰箱備用。使用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組上清液中蛋白濃度，每組取50 μg上樣，聚丙乙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，電泳后將蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上，室溫下30 g·L-1牛血清白蛋白封閉1 h，加一抗sEH，4 ℃ 下震蕩過(guò)夜，以β-actin為內(nèi)參。次日，Tris洗膜緩沖液洗膜，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG室溫孵育1 h。Tris洗膜緩沖液洗膜，用含有辣根過(guò)氧化物酶底物的化學(xué)發(fā)光液顯色并掃描結(jié)果，應(yīng)用 Image J圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。

1.7RT-PCR檢測(cè)HK-2細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocytechemotacticprotein-1，MCP-1)、IL-6、集落刺激因子-1(colonystimulatingfactor-1，CSF-1)、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)mRNA表達(dá)及RAW264.7細(xì)胞中誘導(dǎo)型氮氧化物合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)、IL-6、精氨酸酶-1(arginase，Arg-1)、IL-10mRNA表達(dá)棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，用TRIzol RNA提取液按照氯仿-異丙醇法提取細(xì)胞總RNA，使用分光光度儀測(cè)定RNA濃度。取總RNA 2 μg進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將合成的cDNA保存于-20 ℃冰箱備用。實(shí)驗(yàn)所用引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。IL-6上游引物序列為5′-ACAACCACGGCCTTCCCTACTT-3′，下游引物序列為5′-CACGATTTCCCAGAGAACATGTG-3′；MCP-1上游引物序列為5′-AGGTCCCTGTCATGCTTCTG-3′，下游引物序列為5′-TCTGGACCCATTCCTTCTTG-3′；CSF-1上游引物序列為5′-CGGGCATCATCCTAGTCTTGCTGACTGT-3′，下游引物序列為5′-ATAGTGGCAGTATGTGGGG-GGCATCCTC-3′；TNF-α上游引物序列為5′-CCAGACCCTCACACTCAGATC-3′，下游引物序列為5′-CACTTGGTGGTTTGCTACGAC-3′；iNOS上游引物序列為5′-GTTCTCAGCCCAACAATACAAGA-3′，下游引物序列為5′-GTGGACGGGTCGATGTCAC-3′；Arg-1上游引物序列為5′-CTCCAAGCCAAAGTCCTTAGAG-3′，下游引物序列為5′-GGAG-CTGTCATTAGGGACATC-3′；IL-10上游引物序列為5′-GCAGCTCTAGGAGCATGTGG-3′，下游引物序列為5′-ACAGCCGGGAAGACAATAACT-3′；內(nèi)參基因18 S上游引物序列為5′-ACCGCAGCTAGGAATAATGGA-3′，下游引物序列為5′-GCCTCAGTTCCGAAAACCA-3′。將cDNA用SYBR Green染料進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR。PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，62 ℃延伸20 s，共40個(gè)循環(huán)。結(jié)果分析采用2-△△CT(Livak法)，18 S作為內(nèi)參基因。所有試驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.8ELISA測(cè)定各組HK-2細(xì)胞培養(yǎng)上清液中14，15-EET和14，15-DHET水平收集各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液，3 000×g離心5 min，取上清液，用0.1 mmol·L-1苯基膦處理，乙酸調(diào)整pH值至3～4，加入等體積乙酸乙酯，充分混勻，12 000×g離心10 min，取上清液；按上述方法操作3次，留取有機(jī)相上清液；應(yīng)用氮?dú)赓N著上清液面將有機(jī)相吹干；加入20 μL二甲基甲酰胺溶解14，15-DHET，余步驟詳見(jiàn)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定HK-2細(xì)胞培養(yǎng)液中14，15-EET和14，15-DHET水平，計(jì)算14，15-EET/14，15-DHET。

2 結(jié)果

2.1尿蛋白及sEH抑制劑對(duì)HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)的影響結(jié)果見(jiàn)圖1和表1。正常對(duì)照組與sEH抑制劑組HK-2細(xì)胞中sEH蛋白及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中14，15-EET/14，15-DHET比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常對(duì)照組比較，蛋白尿組HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05)；尿蛋白組HK-2細(xì)胞上清液中14，15-EET/14，15-DHET顯著降低(P<0.05)。sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組與尿蛋白組HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組HK-2細(xì)胞上清液中14，15-EET/14，15-DHET顯著高于尿蛋白組(P<0.05)。

A：正常對(duì)照組；B：sEH抑制劑組；C：尿蛋白組；D：sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組。

圖1各組HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)(Westernblot)

Fig.1ExpressionofsEHproteininHK-2cellsineachgroup(Westernblot)

表1各組HK-2細(xì)胞中sEH蛋白表達(dá)及上清液中14，15-EET/14，15-DHET比較

組別sEH蛋白14,15-EET/14,15-DHET正常對(duì)照組0.29±0.011.43±0.45sEH抑制劑組0.31±0.011.78±0.92尿蛋白組1.12±0.05a0.35±0.18asEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組1.09±0.060.89±0.21b

注：與正常對(duì)照組比較aP<0.05；與尿蛋白組比較bP<0.05。

2.2各組HK-2細(xì)胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-αmRNA表達(dá)比較結(jié)果見(jiàn)表2。正常對(duì)照組與sEH抑制劑組HK-2細(xì)胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-α mRNA表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常對(duì)照組比較，尿蛋白組HK-2細(xì)胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-α mRNA表達(dá)均顯著增加(P<0.05)。與尿蛋白組比較，sEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組HK-2細(xì)胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-α mRNA表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。

表2各組HK-2細(xì)胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-αmRNA表達(dá)比較

組別MCP-1mRNAIL-6mRNACSF-1mRNATNF-αmRNA正常對(duì)照組1.00±0.001.00±0.001.00±0.001.00±0.00sEH抑制劑組1.24±0.300.82±0.110.91±0.351.21±0.23尿蛋白組5.41±1.24a2.76±0.93a4.72±1.42a3.15±0.65asEH抑制劑聯(lián)合尿蛋白組2.84±0.97b1.83±0.54b2.43±1.12b1.93±0.41b

注：與正常對(duì)照組比較aP<0.05；與尿蛋白組比較bP<0.05。

2.3各組HK-2細(xì)胞培養(yǎng)24h的培養(yǎng)基對(duì)RAW264.7細(xì)胞極化作用的影響結(jié)果見(jiàn)表3。A組與B組RAW264.7細(xì)胞中IL-6、iNOS、Arg-1及IL-10 mRNA表達(dá)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與A組比較，C組和IFN-γ陽(yáng)性對(duì)照組RAW264.7細(xì)胞中 iNOS、IL-6 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05，P<0.01)；IL-4陽(yáng)性對(duì)照組RAW264.7細(xì)胞中Arg-1、IL-10 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05)。與C組比較，D組RAW264.7細(xì)胞中 iNOS、IL-6 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)，Arg-1、IL-10 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05)。

表3各組RAW264.7細(xì)胞中IL-6、iNOS、IL-10及Arg-1mRNA表達(dá)比較

組別iNOSmRNAIL-6mRNAArg-1mRNAIL-10mRNAA組1.00±0.001.00±0.001.00±0.001.00±0.00B組1.05±0.480.89±0.501.05±0.480.89±0.53C組3.21±1.34a4.51±1.52a0.52±0.670.41±0.51D組2.09±0.43c1.75±1.21c1.38±0.82c1.19±0.92cINF-γ陽(yáng)性對(duì)照組5.73±1.38b5.97±2.36b1.42±0.511.15±0.84IL-4陽(yáng)性對(duì)照組1.53±0.930.85±0.543.28±1.18a2.71±0.37a

注：與A組比較aP<0.05，bP<0.01；與C組比較cP<0.05。

3 討論

近年來(lái)，CKD患病率逐漸增加，已成為威脅全球人民健康的重要公共問(wèn)題之一。我國(guó)CKD總患病率為10.8%[10]。腎小管間質(zhì)纖維化是CKD進(jìn)展的共同途徑，其主要特征包括炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性因子釋放、肌成纖維細(xì)胞活化和細(xì)胞外基質(zhì)沉積[11]。炎性細(xì)胞的募集處于核心環(huán)節(jié)。巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，且與疾病預(yù)后密切相關(guān)。巨噬細(xì)胞是具有吞噬功能的免疫細(xì)胞，可根據(jù)局部微環(huán)境分化為經(jīng)典活化M1型和替代活化M2型巨噬細(xì)胞[2]。M1型巨噬細(xì)胞以表達(dá)高水平的致炎細(xì)胞因子、活性氧等產(chǎn)物為特征，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，如果炎癥持續(xù)存在，可促進(jìn)炎癥蔓延，導(dǎo)致臟器纖維化。M2型巨噬細(xì)胞主要發(fā)揮抗炎作用，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管新生而發(fā)揮組織修復(fù)作用[3]。

M1及M2型巨噬細(xì)胞在多種急、慢性腎臟疾病動(dòng)物模型中發(fā)揮不同作用。在小鼠急性腎損傷模型中，造模前敲除巨噬細(xì)胞可減輕腎損傷，造模后3～5 d敲除巨噬細(xì)胞則延緩腎小管增殖修復(fù)，加重腎損傷[12]。如果M1型巨噬細(xì)胞不能及時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)镸2型，將阻礙腎小管修復(fù)，腎損傷持續(xù)存在，加重腎病進(jìn)展[13-14]。在小鼠慢性炎性腎病模型中，注射M2型巨噬細(xì)胞后可減輕腎臟炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腎組織修復(fù)[15]。在單側(cè)輸尿管結(jié)扎腎纖維化小鼠模型中，早期干預(yù)M1型巨噬細(xì)胞可發(fā)揮改善腎損傷、延緩腎纖維化的作用[16]。

近年來(lái)，EETs與巨噬細(xì)胞的關(guān)系已有相關(guān)研究，但在腎臟中的作用仍不明確。有研究顯示，在脂多糖介導(dǎo)的心功能不全動(dòng)物模型中，EETs通過(guò)抑制NF-κB而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化[17]。在高脂飲食導(dǎo)致的脂肪肝模型中，sEH抑制劑促進(jìn)巨噬細(xì)胞向抗炎的M2型極化，可改善肝臟炎癥狀態(tài)及胰島素抵抗[18]。在高脂喂養(yǎng)的小鼠中給予sEH抑制劑或外源性補(bǔ)充EETs可抑制脂肪細(xì)胞募集巨噬細(xì)胞，抑制巨噬細(xì)胞向M1型極化，改善脂肪炎癥狀態(tài)及胰島素抵抗[19]。

本研究通過(guò)應(yīng)用sEH抑制劑，增加腎小管上皮細(xì)胞EETs水平，可減少M(fèi)CP-1、IL-6、CSF-1和TNF-α等誘導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞極化細(xì)胞因子的表達(dá)，增加Arg-1、IL-10等誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞極化細(xì)胞因子的表達(dá)。利用腎小管上皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基孵育巨噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)sEH抑制劑可抑制巨噬細(xì)胞向M1型極化，促進(jìn)其向M2型極化，說(shuō)明腎小管EET、sEH參與了腎間質(zhì)巨噬細(xì)胞的極化。本研究將EETs及sEH抑制劑在腎小管上皮細(xì)胞的抗炎作用擴(kuò)展到腎間質(zhì)巨噬細(xì)胞，但尚缺乏深入的機(jī)制探討。本研究將為明確EETs在腎臟的生理作用研究以及為sEH抑制劑作為一種有效的腎臟治療藥物的臨床推廣提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] BOOR P，OSTENDORF T，F(xiàn)LOEGE J.Renal fibrosis：novel insights into mechanisms and therapeutic targets[J].NatRevNephrol，2010，6(11)：643-656.

[2] GUITERAS R，F(xiàn)LAQUER M，CRUZADO J M.Macrophage in chronic kidney disease[J].ClinKidneyJ，2016，9(6)：765-771.

[3] SICA A，MANTOYANI A.Macrophage plasticity and polarization：invivoveritas[J].JClinInvest，2012，122(3)：787-795.

[4] FAN F，ROMAN R J.Effect of cytochrome P450 metabolites of arachidonic acid in nephrology[J].JAmSocNephrol，2017，28(10)：2845-2855.

[5] HASHIMOTO T，F(xiàn)ANG Y I，OHATA H，etal.Change in soluble epoxide hydrolase (sEH) during cisplatin-induced acute renal failure in mice[J].JToxicolSci，2015，40(4)：451-457.

[6] BETTAICH A，KOIKE S，CHAHED S，etal.Podocyte-specific soluble epoxide hydrolase deficiency in mice attenuates acute kidney injury[J].FEBSJ，2017，284(13)：1970-1986.

[7] KIM J，IMIG J D，YANG J，etal.Inhibition of soluble epoxide hydrolase prevents renal interstitial fibrosis and inflammation[J].AmJPhysiolRenalPhysiol，2014，307(8)：F971-F980.

[8] WANG Q，PANG W，CUI Z，etal.Upregulation of soluble epoxide hydrolase in proximal tubular cells mediated proteinuria-induced renal damage[J].AmJPhysiolRenalPhysiol，2013，304(2)：F168-F176.

[9] ROCHE C，GUERROT D，HAROUKI N，etal.Impact of soluble epoxide hydrolase inhibition on early kidney damage in hyperglycemic overweight mice[J].ProstaglandinsOtherLipidMediat，2015，120：148-154.

[10] ZHANG L，WANG F，WANG L，etal.Prevalence of chronic kidney disease in China：a cross-sectional survey[J].Lancet，2012，379(9818)：815-822.

[11] ROCKEY D C，BELL P D，HILL J A.Fibrosis-A common pathway to organ injury and failure[J].NEnglJMed，2015，373(1)：96.

[12] LEE S，HUEN S，NISHINO H，etal.Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair[J].JAmSocNephrol，2011，22(2)：317-326.

[13] LECH M，GROBMAYR R，RYU M，etal.Macrophage phenotype controls long-term AKI outcomes：kidney regeneration versus atrophy[J].JAmSocNephrol，2014，25(2)：292-230.

[14] ANDERS H J，RYU M.Renal microenvironments and macrophage phenotypes determine progression or resolution of renal inflammation and fibrosis[J].KidneyInt，2011，80(9)：915-925.

[15] WANG Y，WANG Y P，ZHENG G，etal.Exvivoprogrammed macrophages ameliorate experimental chronic inflammatory renal disease[J].KidneyInt，2007，72(3)：290-299.

[16] TIAN S，ZHANG L，TANG J，etal.HMGB1 exacerbates renal tubulointerstitial fibrosis through facilitating M1 macrophage phenotype at the early stage of obstructive injury[J].AmJPhysiolRenalPhysiol，2015，308(1)：F69-F75.

[17] DAI M，WU L，HE Z，etal.Epoxyeicosatrienoic acids regulate macrophage polarization and prevent LPS-induced cardiac dysfunction[J].JCellPhysiol，2015，230(9)：2108-2119.

[18] LOPEZ C，ALCARAZ J，GARCIA V，etal.Inhibition of soluble epoxide hydrolase modulates inflammation and autophagy in obese adipose tissue and liver：role for omega-3 epoxides[J].ProcNatlAcadSciUSA，2015，112(2)：536-541.

[19] DAI M，WU L，WANG P，etal.CYP2J2 and its metabolites EETs attenuate insulin resistance via regulating macrophage polarization in adipose tissue[J].SciRep，2017，7：46743.