李雪嬌，劉晨曦，孫亞偉，楊開倫，劉明軍

(1 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830000；2 新疆畜牧科學(xué)院 生物技術(shù)研究所，新疆 烏魯木齊 830000)

綿羊一直是畜牧業(yè)的主要畜種[1]。羊肉營養(yǎng)價(jià)值較高，是人們?nèi)粘Ｉ钪兄匾娜馄穪碓粗籟2]。隨著養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，人們?cè)絹碓阶⒅匮蛉獾钠焚|(zhì)。影響肉品質(zhì)的原因很多，骨骼肌肌纖維的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征是決定肉品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一[3-4]。胎兒期是決定產(chǎn)肉性能的關(guān)鍵時(shí)期，胎兒期肌纖維的數(shù)量和直徑影響著骨骼肌終生的生長發(fā)育，且肌纖維組成類型和比例也在胎兒期基本形成。目前關(guān)于胎兒期骨骼肌肌纖維發(fā)育的相關(guān)研究多以豬為主[5-6]，反芻動(dòng)物較少。胎兒期肌纖維生長發(fā)育能力影響或決定著綿羊的產(chǎn)肉性能，因此弄清綿羊胎兒期骨骼肌肌纖維的組織學(xué)發(fā)育性特征，對(duì)綿羊產(chǎn)肉性能以及肉品質(zhì)性能的提高具有重要的科學(xué)意義。

家畜肌纖維形成大致可分為2個(gè)階段，即初級(jí)纖維和二級(jí)纖維形成階段。目前國內(nèi)對(duì)于豬骨骼肌的形成及其發(fā)育規(guī)律研究相對(duì)較為成熟，豬初級(jí)纖維大約從妊娠后32 d開始形成，初級(jí)纖維形成后不久(妊娠后35 d左右)開始形成二級(jí)纖維，第85天二級(jí)纖維開始大量形成，直到妊娠第105天左右所有的肌纖維全部形成，之后肌纖維的數(shù)量保持相對(duì)穩(wěn)定，直到成年[7-9]。目前，對(duì)綿羊骨骼肌發(fā)育的研究尚比較少，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)綿羊妊娠后期和出生后的肌肉生長由早期肌纖維數(shù)量增加轉(zhuǎn)變?yōu)榧±w維體積增大[10]，此時(shí)表現(xiàn)為肌纖維直徑和長度增加。除了肌纖維數(shù)量，肌纖維組成類型(Ⅰ型和Ⅱ型纖維)和比例也在胎兒期基本形成，并在胎兒中后期開始發(fā)育。胎兒肌纖維的形成與發(fā)育存在品種差異性，任航行[11]比較了Texel羊和烏珠穆沁羊胎兒中后期發(fā)育模型的差異，發(fā)現(xiàn)骨骼肌組織生長發(fā)育差異具有時(shí)段特征。這種發(fā)育模型上的差異有可能是造成產(chǎn)肉性能高低不同的原因。目前對(duì)綿羊胎兒期肌纖維形成和分化的大致過程基本清楚，但對(duì)于肌纖維類型的發(fā)育模型，初級(jí)纖維和二級(jí)纖維的數(shù)量、比例變化規(guī)律，以及其與不同肌纖維類型形成的關(guān)系等還有待進(jìn)一步深入研究。

德國美利奴羊是由泊力考斯和英國萊斯特公羊與原產(chǎn)德國的美利奴羊雜交培育而成[12]，具有早熟、生長發(fā)育快、產(chǎn)肉多、繁殖率高以及被毛品質(zhì)好等優(yōu)良特點(diǎn)。德國美利奴羊周歲母羊平均體質(zhì)量可達(dá)58.67 kg，凈肉率高達(dá)36.29%[13]，是一種典型的肉用羊，但其骨骼肌發(fā)育機(jī)制尚不清楚。德國美利奴羊產(chǎn)肉性能優(yōu)良，胎兒期肌纖維的生長發(fā)育能力很有可能影響其產(chǎn)肉性狀。鑒于目前對(duì)綿羊骨骼肌肌肉發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)尚不全面，本研究選取德國美利奴羊胎兒肌纖維發(fā)育的中后期，通過研究肌纖維直徑、數(shù)量、密度和肌纖維類型等組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征，探究胎兒期骨骼肌組織學(xué)生長發(fā)育特征，以期為進(jìn)一步探究綿羊胎兒骨骼肌發(fā)生機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇年齡相近、體況良好、體質(zhì)量55～60 kg的成年德國美利奴母羊(購自新疆巴州種畜場)，經(jīng)過埋栓同期發(fā)情處理后進(jìn)行人工授精配種，通過超數(shù)排卵獲得胚胎并移植到身體狀況相同的受體母羊，懷孕母羊均按照國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 816-2004)的肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)母羊體質(zhì)量定時(shí)、定量飼喂，其后代為試驗(yàn)動(dòng)物即德國美利奴羊胎兒。采樣時(shí)間分別為懷孕母羊妊娠的第75天(D75)、第105天(D105)和第135天(D135)，每組采樣個(gè)體數(shù)為3只。

1.2 主要試劑

快肌抗體(Monoclonal Anti-Myosin (Skeletal,Fast) antibody produced in mouse)和慢肌抗體(Monoclonal Anti-Myosin (Skeletal,Slow) antibody produced in mouse)，購自Sigma公司；伊紅染液(水溶性)和蘇木素染液(Harris)，購自(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司；DAB染色液(鏈霉菌-生物素法)免疫組化試劑盒，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 樣品采集及組織切片的制作

在母羊妊娠的第75，105和135天分別進(jìn)行剖腹產(chǎn)取出胎兒，迅速采集3只胎羊的骨骼肌組織(背最長肌)，液氮凍存，記錄試驗(yàn)動(dòng)物羊號(hào)、體長、體高、體質(zhì)量等。所有試驗(yàn)動(dòng)物取材部位相同，對(duì)胎兒骨骼肌組織進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋，組織修塊(6 mm×6 mm)后置于自來水中沖洗3 h以上或過夜，用體積分?jǐn)?shù)50%,70%,80%,85%和90%乙醇依次各浸泡30 min，然后用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇浸泡30 min×2，體積分?jǐn)?shù)100%乙醇浸泡30 min×2，使組織塊完全脫水；再將組織塊放入二甲苯-無水乙醇溶液(V(二甲苯)∶V(無水乙醇)=1∶1)中浸泡20 min，二甲苯中浸泡10 min×2；經(jīng)過二甲苯透明后，放入60 ℃烘箱中，二甲苯-石蠟溶液(V(二甲苯)∶V(石蠟)=1∶1)浸泡1 h，放入石蠟浸泡1 h×2，最后對(duì)組織塊進(jìn)行包埋[14-15]。

1.4 常規(guī)HE染色

將石蠟包埋好的樣品按照6 μm厚度連續(xù)切片，每個(gè)樣品制作6～8張組織切片，65 ℃烘片3 h，冷卻至室溫，用HE染色法[16-18]對(duì)切片進(jìn)行染色。將切片于體積分?jǐn)?shù)100%二甲苯中浸泡15 min，重復(fù)2次，體積分?jǐn)?shù)100%乙醇-二甲苯溶液(V(體積分?jǐn)?shù)100%乙醇)∶V(甲苯)=1∶1)浸泡3～5 min，體積分?jǐn)?shù)100%,95%,80%,70%,50%乙醇各浸泡3 min，用新鮮配制的蘇木素溶液染色8～10 min后，用自來水沖洗3～5 min，置于體積分?jǐn)?shù)0.5%鹽酸酒精中分色藍(lán)化3～5 s后，自來水沖洗3～5 min，再于體積分?jǐn)?shù)70%,80%,90%乙醇中各浸泡3 min，用體積分?jǐn)?shù)0.5%伊紅溶液染色浸泡2 min，體積分?jǐn)?shù)95%乙醇浸泡3 min×2；體積分?jǐn)?shù)100%乙醇浸泡3 min×2；再將切片放入體積分?jǐn)?shù)100%乙醇-二甲苯溶液(V(體積分?jǐn)?shù)100%乙醇)∶V(二甲苯)=1∶1)浸泡3 min，100%二甲苯浸泡5 min×2，用中性樹膠封片。

1.5 肌纖維類型的鑒定

使用粘附載玻片(多聚賴氨酸載玻片)切片，厚度約5 μm，每個(gè)樣品切3張組織切片，放入烘箱中加熱2～3 h，冷卻至室溫后進(jìn)行脫蠟和水化，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次進(jìn)行抗原修復(fù)。將切片浸入枸櫞酸緩沖液，微波中火(98～100 ℃)加熱至沸騰，冷卻5 min，重復(fù)2次；用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；加內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；加非特異染色阻斷劑孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；分別加快肌抗體 (M4276，Sigma)和慢肌抗體(M8421，Sigma)4 ℃孵育過夜，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；加生物素標(biāo)記的羊抗小鼠/兔IgG聚合物孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復(fù)3次；加DAB顯色液孵育5 min，自來水沖洗后加蘇木素體細(xì)胞染色液孵育30 s，PBS溶液沖洗反藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明后用中性樹膠和蓋玻片封片[19-20]。

1.6 分析方法

用Olympus DP2-BSW圖像采集系統(tǒng)取10×40倍放大的圖像，每個(gè)樣本取5張切片進(jìn)行分析，每個(gè)樣品選取不重復(fù)、不缺失的10個(gè)視野。用圖像分析軟件(Imgae)進(jìn)行數(shù)據(jù)的測量，統(tǒng)計(jì)單位面積肌纖維的數(shù)量、直徑和面積。肌纖維數(shù)量為每個(gè)視野面積內(nèi)單根肌纖維總數(shù)量的平均值，肌纖維直徑為每個(gè)視野面積內(nèi)肌纖維直徑的平均值，肌纖維密度值為每個(gè)視野中肌纖維數(shù)量除以視野面積所得的平均值。用圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)視野面積內(nèi)快肌和慢肌數(shù)量。所測量數(shù)據(jù)用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，同時(shí)對(duì)所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 德國美利奴胎羊的發(fā)育情況

德國美利奴羊D75～D135胎兒體尺性狀如表1所示。由表1可以看出，在妊娠的第75～135天，德國美利奴羊胎兒各項(xiàng)體尺指標(biāo)均在不斷增加。隨著懷孕母羊妊娠時(shí)間的增加，胎兒體質(zhì)量增加，體長和體高增長，體尺性狀均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。妊娠75～105 d胎兒體質(zhì)量呈近5倍增長，體長、體高呈近2倍增長，妊娠105～135 d胎兒體質(zhì)量呈3.5倍增長，體長、體高的增長趨勢(shì)相對(duì)緩慢。

表1 德國美利奴羊胎兒期體尺性狀Table 1 German Merino sheep fetal body traits

2.2 德國美利奴羊胎兒期肌纖維組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征

采用常規(guī)HE染色法對(duì)德國美利奴羊胎兒背最長肌進(jìn)行組織切片分析，結(jié)果如圖1所示。由圖1可以看出，德國美利奴羊胎兒背最長肌細(xì)胞核被蘇木素著色為藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)、間質(zhì)以及纖維類物質(zhì)均被伊紅著色為不同程度的紅色。D75胎兒骨骼肌可見中空管狀的初級(jí)肌纖維典型結(jié)構(gòu)，圍繞在初級(jí)肌纖維的四周，形成了數(shù)量眾多的次級(jí)肌纖維，此時(shí)肌纖維仍在不斷形成。D105和D135胎兒骨骼肌切片未見初級(jí)肌纖維結(jié)構(gòu)，而均呈現(xiàn)為次級(jí)肌纖維結(jié)構(gòu)。表明在妊娠105 d之前，初級(jí)肌纖維已經(jīng)與次級(jí)肌纖維融合，肌纖維的形成已經(jīng)完成。妊娠135 d時(shí)，視野內(nèi)單根肌纖維面積明顯增大，且肌間脂肪含量逐漸降低，肌纖維直徑顯著增粗，且排列緊密。

A.D75；B.D105；C.D135圖1 德國美利奴羊胎兒期不同發(fā)育時(shí)期背最長肌的HE染色觀察(10×40)Fig.1 German Merino sheep fetus at different developmental stages of longissimus muscle HE staining result(10×40)

單位面積肌纖維數(shù)量、直徑是肌纖維組織結(jié)構(gòu)最重要的2個(gè)特征。本研究針對(duì)德國美利奴羊胎兒的背最長肌組織，統(tǒng)計(jì)分析了單位面積肌纖維數(shù)量、直徑和單位面積，結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，D75胎兒單位面積肌纖維數(shù)量較少，為(310.23±77.15) 根；D105胎兒單位面積肌纖維數(shù)量最大，為(369.41±72.64) 根，D135胎兒單位面積肌纖維數(shù)量為(301.80±41.76) 根，低于D105胎兒?？梢?，從D75至D105，單位面積肌纖維數(shù)量逐漸增加，于D105時(shí)單位面積肌纖維數(shù)量達(dá)到最高，但肌纖維數(shù)量在3個(gè)時(shí)期間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從D75至D135肌纖維直徑逐漸增大，胎兒肌纖維直徑由(1.80±0.26) μm發(fā)育至(2.91±0.25) μm，單位面積肌纖維直徑增粗了1.6倍，且D75至D105胎兒肌纖維直徑的增長幅度較為平緩，D105至D135胎兒肌纖維直徑的增長幅度顯著增大。肌纖維面積隨發(fā)育階段呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，而肌纖維密度隨發(fā)育階段呈現(xiàn)先高后低的變化趨勢(shì)，D105時(shí)期胎兒單位面積肌纖維密度最大，達(dá)6.82根/μm2。

表2 德國美利奴羊胎兒期單位面積肌纖維數(shù)量、直徑的統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 2 The statistical results of quantity,Germany Merino sheep fetal unit area of muscle fiber diameter

注：“*”表示該時(shí)期與其他時(shí)期相比差異顯著(P<0.05)。

Note: The“*”stand for the period is significant compared with other periods(P<0.05).

2.3 德國美利奴羊胎兒期肌纖維類型的變化規(guī)律

使用快肌抗體 (M4276，Sigma)和慢肌抗體(M8421，Sigma)，通過DAB染色液(鏈霉菌-生物素法)免疫組化方法對(duì)德國美利奴羊胎兒不同發(fā)育時(shí)期背最長肌進(jìn)行染色，結(jié)果如圖2所示。由圖2可以看出，DAB染色液會(huì)使相應(yīng)抗原出現(xiàn)區(qū)域沉淀，使相應(yīng)抗原存在處顯示淺黃色、棕黃色或是褐色，蘇木素體細(xì)胞染色液可將細(xì)胞核染至淺藍(lán)色。D75胎兒單位面積快肌數(shù)量較少而慢肌數(shù)量較多，中空的初級(jí)纖維結(jié)構(gòu)均為慢肌，圍繞在初級(jí)纖維四周的次級(jí)纖維為快肌。D105和D135胎兒單位面積快肌數(shù)量明顯增加，而慢肌數(shù)量逐漸減少。

用圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)單位面積快、慢肌數(shù)量，結(jié)果如表3所示。由表3可以看出，單位面積德國美利奴羊D75胎兒骨骼肌褐色快肌數(shù)量較少，為(178.86±5.22) 根;D105胎兒快肌數(shù)量最多，為(323.75±6.13)根;D135胎兒快肌數(shù)量為(281.86±5.64) 根，低于D105胎兒快肌數(shù)量，總體上來看，快肌數(shù)量隨胎齡增大呈先增加后減少趨勢(shì)。與快肌數(shù)量的變化不同，胎兒單位面積慢肌數(shù)量隨胎齡增加而逐漸減少，D75時(shí)最多，為(83.4±5.36)根， D135時(shí)慢肌數(shù)量最少，為(23.9±3.45) 根。德國美利奴羊胎兒不同發(fā)育階段相比，骨骼肌快、慢肌數(shù)量的差異均達(dá)極顯著水平(P<0.01)。從肌纖維密度來看，D105時(shí)期單位面積快肌密度最大，達(dá)5.97 根/μm2，D75時(shí)期單位面積慢肌密度最大，為1.54根/μm2。

A.D75(快肌)；B.D105(快肌)；C.D135(快肌)；D.D75(慢肌)；E.D105(慢肌)；F.D135(慢肌)A.D75 (Fast muscle);B.D105 (Fast muscle);C.D135 (Fast muscle);D.D75 (Slow muscle);E.D105 (Slow muscle);F.D135 (Slow muscle)圖2 德國美利奴羊胎兒期不同發(fā)育時(shí)期背最長肌快慢肌免疫組化染色結(jié)果(10×40)Fig.2 German Merino sheep fetus at different developmental stages of longissimus muscle skeletal muscles immunohistochemical staining results(10×40)

胎齡Gestationalage快肌數(shù)量/根Numberoffastmuscle慢肌數(shù)量/根Numberofslowmuscle快肌密度/(根·μm-2)Fastmuscledensity慢肌密度/(根·μm-2)SlowmuscledensityD75178.86±5.22**83.4±5.36**3.301.54D105323.75±6.13**61.5±20.64**5.971.13D135281.86±5.64**23.9±3.45**5.200.44

注：“**”表示該時(shí)期與其他時(shí)期相比差異極顯著(P<0.01)。

Note:The“**”stand for the period is very significant compared with other periods(P<0.01).

3 討 論

國內(nèi)外對(duì)家畜肌纖維組織學(xué)特性的研究大多以出生后為主，且相關(guān)研究最早見于肉牛。如Crouse[21]1972年首次研究了牛肉肌纖維的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征。之后Cornforth等[22]發(fā)現(xiàn)，牛肉肌纖維橫截面積隨日齡的增加而增加，Cassens等[23]發(fā)現(xiàn)，肌纖維越細(xì)則肌纖維密度就越大，且肌肉橫截面紋理呈天鵝絨狀則表示肉品質(zhì)優(yōu)良。秦寧等[24]對(duì)長白山野豬和東北民豬骨骼肌組織學(xué)特性的研究發(fā)現(xiàn)，豬肌纖維直徑與密度呈顯著負(fù)相關(guān)?？偟膩砜?，目前對(duì)家畜胎兒不同發(fā)育階段肌纖維生長發(fā)育的數(shù)據(jù)結(jié)果尚較為缺乏。

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院任航行[11]比較了特克塞爾(Texel)和烏珠穆沁綿羊不同發(fā)育階段胎兒骨骼肌的組織細(xì)胞學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)多個(gè)與肌肉發(fā)生及生肌細(xì)胞增殖相關(guān)的基因在胎兒特定發(fā)育期的表達(dá)差異顯著，并且發(fā)現(xiàn)Texel在D85階段數(shù)目上有明顯增加，而烏珠穆沁綿羊肌纖維數(shù)則在D105時(shí)明顯增加。劉衛(wèi)娟[25]研究發(fā)現(xiàn)，隨著懷孕母羊妊娠時(shí)間的增加，胎兒體質(zhì)量、體長、體高逐漸增加，肌纖維的直徑呈遞增趨勢(shì)，相應(yīng)的肌纖維密度也發(fā)生了變化。本研究結(jié)果顯示，德國美利奴羊胎兒肌纖維數(shù)量在D105階段達(dá)到峰值，骨骼肌中期發(fā)育主要以肌纖維數(shù)量的增加為主，到D105左右肌纖維數(shù)量基本恒定，而胎兒骨骼肌后期發(fā)育主要以肌纖維面積的增大為主，且發(fā)育至后期胎兒肌纖維排列緊致，肌間脂肪含量較少。

根據(jù)肌肉收縮功能的不同，可將肌纖維類型分為慢收縮肌Ⅰ型和快收縮?、蛐蚚23,26]，Ⅱ型肌纖維又可分為快速氧化型(ⅡA型)、快速酵解型(ⅡB型)和中間型肌纖維(ⅡX型)3類[24-25]。Ⅰ型肌纖維收縮較慢且持久，其中與肌纖維收縮能力相關(guān)的ATP酶活性較低。ⅡB型肌纖維由于其ATP酶活性較高, 因此其收縮快而短[28]。ⅡX型肌纖維收縮能力和代謝特性均處于ⅡA型和ⅡB型肌纖維之間[29-30]。肌纖維類型與肉品質(zhì)息息相關(guān)[31]，氧化性肌纖維(Ⅰ型肌纖維)比例較高時(shí)，肉品質(zhì)嫩度優(yōu)良，而PSE肉和瘦肉率等與ⅡB型肌纖維含量有關(guān)[32]。因此，肌纖維類型的研究不僅具有分子學(xué)意義，而且對(duì)肉品質(zhì)的改良也起著重要指導(dǎo)作用。本研究通過免疫組化分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中空的初級(jí)纖維結(jié)構(gòu)均為慢肌，次級(jí)纖維大多數(shù)以快肌為主。D75時(shí)胎兒次級(jí)纖維成倍圍繞在初級(jí)纖維四周，發(fā)育后期胎兒骨骼肌快肌纖維數(shù)量逐漸增加，慢肌纖維數(shù)量隨胎齡的增加而逐漸減少，發(fā)育至D135慢肌數(shù)量極少。肌纖維類型的變化規(guī)律表現(xiàn)為：快肌數(shù)量整體呈先增加后降低趨勢(shì)，而慢肌數(shù)量呈逐漸下降趨勢(shì)。

綜上所述，本研究探究了德國美利奴羊胎兒骨骼肌組織學(xué)結(jié)構(gòu)以及肌纖維類型的變化規(guī)律，確定了德國美利奴羊胎兒妊娠的第105天是肌纖維從肌增生到肌肥大的關(guān)鍵時(shí)間窗口，肌纖維類型早期發(fā)育主要以慢肌(Ⅰ型肌纖維)為主，后期發(fā)育主要以快肌(Ⅱ型肌纖維)為主。本研究為進(jìn)一步探究綿羊胎兒骨骼肌發(fā)生機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，并為提高綿羊產(chǎn)肉量和肉品質(zhì)性能研究提供了理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 蔣小懷.新疆養(yǎng)羊業(yè)生產(chǎn)形勢(shì)分析與發(fā)展對(duì)策研究 [J].草食家畜,2014(2):1-5.

Jiang X H.Study on the production situation and development countermeasures of Xinjiang sheep industry [J].Grass-Feeding Livestock,2014(2):1-5.

[2] 趙有璋.羊生產(chǎn)學(xué) [M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1993.

Zhao Y Z.Production science of sheep and goat [M].Beijing:China Agriculture Press,1993.

[3] 周金星,畢亞玲,高登惠.肌肉組織學(xué)結(jié)構(gòu)及其與肉品品質(zhì)的關(guān)系 [J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào),2004,23(5):438-441.

Zhou J X,Bi Y L,Gao D H.The relationship between structure and meat quality and muscle tissue [J].Journal of Mountain Agriculture and Biology,2004,23(5):438-441.

[4] 趙 曉,莫德林,張 悅,等.豬的骨骼肌生長發(fā)育研究進(jìn)展 [J].生命科學(xué),2011,23(1):37-44.

Zhao X,Mo D L,Zhang Y,et al.Research progress on skeletal muscle growth and development in pigs [J].Chinese Bulletin of Life Sciences,2011,23(1):37-44.

[5] 劉居鵬,單安山,彭濟(jì)昌.豬肌纖維發(fā)育及其與肉質(zhì)的關(guān)系 [J].中國飼料,2006(16):11-14.

Liu J P,Shan A S,Peng J C.Development of porcine muscle fiber and its relationship with meat quality [J].China Feed,2006(16):11-14.

[6] 郭云雁,王立賢,程篤學(xué),等.豬肌纖維組織學(xué)特性研究進(jìn)展 [J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(8):49-52.

Guo Y Y,Wang L X,Cheng D X,et al.Research progress on histological characteristics of porcine muscle fibers [J].China Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2007,34(8):49-52.

[7] Wilson D A,Baker G J,Pijanowski G J,et al.Composition and morphologic features of the interosseous muscle in Standardbreds and Thoroughbreds [J].Am J Vet Res,1991,52(1):133-139.

[8] Ashmore C R,Addis P B,Doerr L.Development of muscle fibers in the fetal pig [J].J Anim Sci,1973,36(6):1088-1093.

[9] Wigmore P M,Stickland N C.Muscle development in large and small big fetuses [J].Journal of Anatomy,1983,40(137):235-245.

[10] Zhu M J,Ford S P,Nathanielsz P W,et al.Effect of maternal nutrient restriction in sheep on the development of fetal skeletal muscle [J].Biol Reprod,2004,71(6):1968-1973.

[11] 任航行.Texel與烏珠穆沁綿羊妊娠中、后期胎兒骨骼肌基因表達(dá)譜及組織學(xué)分析 [D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2010.

Ren H X.Texel and ujumqin sheep in late pregnancy, fetal skeletal muscle profiles of gene expression and histological analysis [D].Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences,2010.

[12] 陳曉濤,章煥然,陳偉德.德國美利奴羊在新疆的應(yīng)用前景 [J].草食家畜,2003(1):9-10.

Chen X T,Zhang H R,Chen W D.The German Merino sheep application in Xinjiang [J].Grass-Feeding Livestock,2003(1):9-10.

[13] 蔣烈戈,李勇忠,景亞平,等.德國美利奴羊與中國美利奴羊主要生產(chǎn)性能比較 [J].中國草食動(dòng)物科學(xué),2013,33(6):78-79.

Jiang L G,Li Y Z,Jing Y P,et al.The German Merino sheep and Chinese Merino sheep production performance comparison [J].China Herbivores Science,2013,33(6):78-79.

[14] 陳 璐,馬恒輝,金邦莖.骨骼肌組織石蠟制片技術(shù)的改進(jìn) [J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2008,24(2):233-234.

Chen L,Ma H H,Jin B J.Improvement of paraffin sectioning technique for skeletal muscle tissue [J].Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology,2008,24(2):233-234.

[15] 李 艷,高友晶,張 喜,等.細(xì)胞石蠟包埋切片技術(shù)的應(yīng)用 [J].江漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,39(1):72-74.

Li Y,Gao Y J,Zhang X,et al.Application of cell paraffin embedded section technique [J].Journal of Jianghan University (Natural Science Edition),2011,39(1):72-74.

[16] 王 巧.HE染色方法在臨床病理診斷中的應(yīng)用 [J].臨床合理用藥雜志,2014(32):118-119.

Wang Q.Application of HE staining method in clinical pathological diagnosis [J].Journal of Clinical Rational Drug Use,2014(32):118-119.

[17] 張 敏.HE染色在臨床病理診斷中的應(yīng)用 [J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,35(4):552-553.

Zhang M.Clinical application of HE staining in clinical pathological diagnosis [J].Journal of Qiqihar University of Medicine,2011,35(4):552-553.

[18] 劉增輝.病理染色技術(shù) [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:14.

Liu Z H.Pathological staining technique [M].Beijing:People Health Publishing House,2001:14.

[19] 吳秉銓,劉彥仿.免疫組化學(xué)病理診斷 [M].北京:北京科學(xué)技術(shù)出版社,2007.

Wu B Q,Liu Y F.Immunohistochemical pathological diagnosis [M].Beijing:Beijing Science and Technology Press,2007.

[20] 張衛(wèi)琴.免疫組化技術(shù)在病理診斷中的應(yīng)用 [J].安徽醫(yī)藥,2012,16(11):1700-1702.

Zhang W Q.Application of immunohistochemical technique in pathological diagnosis [J].Anhui Medical and Pharmaceutical Journal,2012,16(11):1700-1702.

[21] Crouse H R.Palatability of individual muscles from bovine leg steaks as related to chemical and histologocal traits [J].J Food Sci,1972,37:282-287.

[22] Cornforth D P,Hecker A L,Cramger D A,et al.Maturity and its relationship to muscle characteristics of cattle [J].Journal of Animal Science,1980,50:75-80.

[23] Cassens R G,Rymkiewicz J,Szeremeta J,et al.The importance of myofiber type [J].Food Microstructure,1984,3:1-7.

[24] 秦 寧,徐日福,張樹敏,等.長白山野豬和東北民豬骨骼肌組織學(xué)特性比較 [J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,34(3):343-347.

Qin N,Xu R F,Zhang S M,et al.Comparison of histological characteristics of skeletal muscle between Changbai Mountain wild boar and Northeast China pig [J].Journal of Jilin Agricultural University,2012,34(3):343-347.

[25] 劉衛(wèi)娟.幾種肉羊肌肉組織學(xué)形狀和理化性狀的研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

Liu W J.Several studies of the shape and physical-chemical properties of the muscle groups were studied [D].Baoding,Hebei:Agricultural University of Hebei,2009.

[26] Ausoni S,Gorza L,Schiaffino S,et al.Expression of myosin heavy chain isoforms in stimulated fast and slow rat muscles [J].The Journal of Neuroscience,1990,10:153-160.

[27] 楊飛云.豬骨骼肌肌纖維類型分布及轉(zhuǎn)化的分子機(jī)理研究 [D].四川雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

Yang F Y.Study on the distribution and transformation of muscle fiber types in porcine skeletal muscle [D].Ya’an,Sichuan:Sichuan Agricultural University,2008.

[28] 高儒松,程志斌,楊正華.肌纖維類型與豬肉品質(zhì)的關(guān)系 [J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(4):191-195.

Gao R S,Cheng Z B,Yang Z H.Relationship between muscle fiber types and pork quality [J].China Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2009,36(4):191-195.

[29] 羅 軍.肌肉纖維特性研究進(jìn)展 [J].黃牛雜志,1989,5(4):36-40.

Luo J.Research progress of muscle fiber characteristics [J].Journal of Yellow Cattle Science,1989,5(4):36-40.

[30] 楊飛云,陳代文,黃金秀,等.豬背最長肌肌纖維類型的發(fā)育性變化及品種與營養(yǎng)影響特點(diǎn) [J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2008,39(12):1701-1708.

Yang F Y,Chen D W,Huang J X,et al.The developmental changes of muscle fiber types in longissimus dorsi muscle of pigs and the characteristics of the variety and nutrition [J].Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences,2008,39(12):1701-1708.

[31] 楊曉靜,趙茹茜,陳 杰，等.豬背最長肌肌纖維類型的發(fā)育性變化及其品種和性別特點(diǎn) [J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2005,25(1):89-94.

Yang X J,Zhao R Q,Chen J,et al.Developmental changes of muscle fiber types and characteristics of breed and sex of longissimus dorsi muscle in pigs [J].Chinese Journal of Veterinary Science,2005,25(1):89-94.

[32] Engel W K.The essentiality of histo and cytochemical studies in the investigation of meuromuscular disease [J].Neurology,1962,12:778-784.