馬春慶，楊代勤

(長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州 434025)

寬體金線蛭(Whitmaniapigrawhitmania)屬環(huán)節(jié)動(dòng)物門(mén)(Annelida)蛭綱(Hirudinea)無(wú)吻蛭目(Arhynchobdellida)黃蛭科(Haemopidae)金線蛭屬(Whitmania)[1]，又名牛螞蟥、金邊大螞蟥、寬身螞蟥，是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用水生動(dòng)物。從水蛭唾液提取分離得到的一種多肽水蛭素[2]，對(duì)凝血酶有極強(qiáng)的抑制作用，是迄今發(fā)現(xiàn)的活性最強(qiáng)的特異性凝血酶抑制劑。

國(guó)內(nèi)外對(duì)日本醫(yī)蛭(Hirudonipponia)的研究已有較多報(bào)道，但對(duì)寬體金線蛭的研究則多側(cè)重于藥理和生理方面[3～6],包括藥理活性成分的提取和關(guān)于其形態(tài)結(jié)構(gòu)、呼吸、生長(zhǎng)和攝食規(guī)律等方面的研究，尤其是在其唾液分泌物中發(fā)現(xiàn)的含有肝素及抗血栓素等的化學(xué)成分研究[7]。近年來(lái)，水蛭的藥用范圍已延伸到心血管系統(tǒng)、腦血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)[8]。史紅專等[9，10]初步探究了寬體金線蛭的耗氧率與窒息點(diǎn)，確定了寬體金線蛭的最佳產(chǎn)卵溫度、體重及卵繭的最適孵化溫度。高明等[11]通過(guò)對(duì)寬體金線蛭食性的研究，得出寬體金線蛭以攝取螺類和河蚌等軟體動(dòng)物的汁液為主，也攝食植物碎屑、有機(jī)質(zhì)、微生物、蠕蟲(chóng)和水蚯蚓等的結(jié)論，與王安綱等[12]得出的結(jié)果一致。但目前對(duì)于剛孵化出的仔蛭培育的最適溫度和適宜的開(kāi)口餌料的了解還不多，影響仔蛭生長(zhǎng)和存活的因子還有很多也不確定。為了進(jìn)一步研究溫度、餌料對(duì)早期仔蛭生長(zhǎng)和存活率的影響，本研究采用不同溫度和餌料對(duì)仔蛭進(jìn)行試驗(yàn)，分別探討了溫度和餌料對(duì)寬體金線蛭生長(zhǎng)的影響，以為寬體金線蛭的人工繁育提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)水蛭苗種為長(zhǎng)江大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地自繁自育、同一批次產(chǎn)出的寬體金線蛭仔蛭，平均體重為(0.0184±0.0061)g,平均體長(zhǎng)為(1.01±0.17)cm，體格健壯、活性較強(qiáng)、體表無(wú)明顯傷痕；試驗(yàn)所用活體餌料均來(lái)自于長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖基地池塘。

試驗(yàn)材料取回后均放置在設(shè)有防逃裝置的水桶內(nèi)，置于室內(nèi)，恒溫25℃，暫養(yǎng)3d后開(kāi)始試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)在長(zhǎng)江大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1)溫度對(duì)寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)和存活的影響試驗(yàn) 采用12個(gè)相同規(guī)格(540mm×250mm×400mm)的藍(lán)色水族箱，保持水位高度為25cm，設(shè)置4個(gè)試驗(yàn)組，用加熱棒進(jìn)行控溫，溫度分別控制為15、20、25℃和30℃，每個(gè)試驗(yàn)組各設(shè)2個(gè)平行，每3箱為1個(gè)試驗(yàn)組，均移入100條仔蛭。試驗(yàn)期間，12個(gè)水族箱每次均投喂相同的餌料，投喂量均為每箱30個(gè)螺螄。

2)餌料對(duì)寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)和存活的影響試驗(yàn) 采用9個(gè)相同規(guī)格(540mm×250mm×400mm)的藍(lán)色水族箱，水溫均控制為26℃，每箱移入100條仔蛭。每3箱為1個(gè)試驗(yàn)組，分別投喂蛋黃、輪蟲(chóng)(Rotifer)+中華圓田螺(Cipangopaludinacahayensis)、輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺(Lymnaeastagnalis)，每箱每天投喂2次，每次投喂量分別為蛋黃0.5個(gè)、輪蟲(chóng)50mL(50個(gè)/mL)+中華圓田螺(平均0.1770±0.0660g)30個(gè)、輪蟲(chóng)50mL(50個(gè)/mL)+靜水椎實(shí)螺(平均0.0637±0.0085g)30個(gè)。

每天下午5：00對(duì)各個(gè)水族箱進(jìn)行換水，用虹吸法排掉底部污物，保持水質(zhì)的清新。

1.3 指標(biāo)測(cè)定、計(jì)算與處理

試驗(yàn)為期25d，結(jié)束后，將所有幼蛭用75%酒精進(jìn)行麻醉，置于裝有目測(cè)微尺的雙筒解剖鏡下，測(cè)仔蛭體長(zhǎng)；隨后將仔蛭放于濾紙上，用電子天平稱其重量(精確到0.0001g)，用鑷子輕輕夾取仔蛭后再稱量濾紙的重量(同樣精確到0.0001g)，同時(shí)統(tǒng)計(jì)存活率。按下述公式計(jì)算各個(gè)試驗(yàn)組的日增重、日增體長(zhǎng)。

日增重=(最終平均干重-初始平均干重)/25

日增體長(zhǎng)=(最終平均體長(zhǎng)-初始平均體長(zhǎng))/25

存活率=(存活條數(shù)/初始條數(shù))×100%

試驗(yàn)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007處理后，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度條件下水蛭苗種的生長(zhǎng)速率

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。方差分析結(jié)果顯示，不同溫度條件下仔蛭的生長(zhǎng)速度和存活率存在顯著性差異。其中，25℃時(shí)，寬體金線蛭仔蛭的生長(zhǎng)速度最快,顯著高于其他試驗(yàn)組(P<0.05)，日增體重達(dá)到0.0040g，日增體長(zhǎng)達(dá)到0.0276cm，存活率也最高，為83.2%；水溫在15℃時(shí)，仔蛭的生長(zhǎng)速度最慢，日增體重僅為0.0017g，日增體長(zhǎng)僅為0.0071cm，顯著低于其他試驗(yàn)組仔蛭的生長(zhǎng)速度和存活率(P<0.05)，但其存活率要高于30℃試驗(yàn)組仔蛭的存活率。20℃時(shí)仔蛭存活率(80.5%)與25℃下的最高存活率(83.2%)沒(méi)有顯著差異，生長(zhǎng)速度差異也不顯著。

表1 不同溫度條件下寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)速度及存活率

注：同列數(shù)據(jù)后不同字母者表示組間差異性顯著(P<0.05)，表2同。

2.2 不同餌料下水蛭苗種的生長(zhǎng)速率

試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，經(jīng)方差分析可知，投喂不同的餌料，寬體金線蛭仔蛭的日增體長(zhǎng)、日增重及存活率差異顯著(P<0.05)，以輪蟲(chóng)和靜水椎實(shí)螺為餌料的仔蛭存活率最高，為87.3%，日增體長(zhǎng)達(dá)到0.0260cm，日增體重達(dá)0.0048g，顯著高于其他試驗(yàn)組仔蛭的存活率和生長(zhǎng)速度(P<0.05)；投喂輪蟲(chóng)+中華圓田螺的仔蛭存活率和日增體重都要顯著低于輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺的試驗(yàn)組，而兩組的日增體長(zhǎng)并沒(méi)有顯著差異；蛋黃餌料組仔蛭的日增體重、日增體長(zhǎng)僅為0.0022g和0.0172cm，存活率也最低，僅為60.1%，說(shuō)明餌料采用輪蟲(chóng)和靜水椎實(shí)螺投喂效果最好，采用蛋黃投喂效果最差。

表2 不同餌料下寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)差異

3 討論與結(jié)論

3.1 溫度對(duì)寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)和存活的影響

水生生物的生長(zhǎng)發(fā)育同時(shí)受遺傳和外界環(huán)境因子的影響，而溫度是影響水生生物生長(zhǎng)發(fā)育最為重要的環(huán)境因子，能直接影響參與生物體某些活動(dòng)所需酶的生物學(xué)活性，影響其生命活動(dòng)的代謝效率以及代謝過(guò)程中的能量收支，從而對(duì)發(fā)育期生物的生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生影響[13]。寬體金線蛭是變溫動(dòng)物，當(dāng)溫度范圍在適宜其仔蛭生長(zhǎng)的范圍之間，隨著溫度的升高，仔蛭的攝食效率和食物轉(zhuǎn)化效率會(huì)逐步提高，生長(zhǎng)速度也會(huì)隨之加快。研究表明，適宜寬體金線蛭生長(zhǎng)的水溫范圍為15～30℃[14～16]，此結(jié)論與本研究結(jié)果基本一致，當(dāng)水溫從15℃逐漸升高到25℃，寬體金線蛭仔蛭的生長(zhǎng)速度逐漸變快、存活率也越來(lái)越高；但當(dāng)水溫達(dá)到30℃時(shí)，仔蛭代謝發(fā)生紊亂，常表現(xiàn)為躁動(dòng)不安，在水族箱內(nèi)四處游動(dòng)，該溫度條件已經(jīng)成為仔蛭生長(zhǎng)的脅迫因子[17]，導(dǎo)致仔蛭死亡。本研究結(jié)果顯示，培育寬體金線蛭仔蛭的溫度范圍最好控制在20～25℃之間，能夠有效保證仔蛭長(zhǎng)期處于快速生長(zhǎng)的狀態(tài)，同時(shí)培育存活率也高。

3.2 餌料對(duì)寬體金線蛭仔蛭生長(zhǎng)的影響

自然條件下很多魚(yú)類都有相對(duì)應(yīng)的開(kāi)口餌料生物，魚(yú)類仔魚(yú)期攝食、生長(zhǎng)和成活的內(nèi)在關(guān)系,也已成為國(guó)際上魚(yú)類早期生活史前沿研究的主要內(nèi)容之一[18]，而仔魚(yú)開(kāi)口期的外源性營(yíng)養(yǎng)對(duì)仔魚(yú)的生長(zhǎng)和成活起著決定性作用。因此，當(dāng)仔魚(yú)進(jìn)入攝食期，及時(shí)在最恰當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)投喂開(kāi)口餌料，能提高苗種的培育成活率[19]。

寬體金線蛭為動(dòng)物食性，在水體中多以螺螄、河蚌、河蜆等軟體動(dòng)物的汁液為食，很少攝食脊椎動(dòng)物的血液[11，12]。本研究采用蛋黃、輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺、輪蟲(chóng)+中華圓田螺對(duì)寬體金線蛭仔蛭進(jìn)行開(kāi)口餌料的選擇試驗(yàn)，從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，投喂輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺的寬體金線蛭仔蛭成活率最高，生長(zhǎng)速度最快，顯著高于投喂蛋黃、輪蟲(chóng)+中華圓田螺的試驗(yàn)組(P<0.05)。輪蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)豐富，可供仔蛭攝食，在水體中也可以起到加快物質(zhì)循環(huán)的速度。靜水椎實(shí)螺不具角質(zhì)或者石灰質(zhì)的厴，而且肌肉和體液中富含氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，方便仔蛭攝食，仔蛭的存活率也可以得到保證；相對(duì)而言，具有厴的中華圓田螺不易被寬體金線蛭仔蛭捕獲，而且還可能在仔蛭攝食時(shí)夾傷仔蛭。所以輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺是寬體金線蛭仔蛭最好的開(kāi)口餌料。

綜上所述，在人工培育寬體金線蛭仔蛭時(shí)，需要將仔蛭生活的環(huán)境溫度控制在20～25℃之間，最好不要超過(guò)30℃，同時(shí)對(duì)其投喂輪蟲(chóng)+靜水椎實(shí)螺，可以達(dá)到很好地培育效果；當(dāng)餌料不足時(shí)，可輔助投喂部分中華圓田螺，但需要注意先進(jìn)行消毒處理，充分保障餌料的充足和安全性，達(dá)到最大利益。

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