龐梓辰，穆淑媛，張燦剛

（1.山東省泰安第一中學(xué)，山東泰安 271018；2.泰安市泰山林業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安 271000；3.泰安市植物源農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心，山東泰安 271033）

植物中蘊(yùn)藏著豐富的抗病毒天然活性物質(zhì)，是開發(fā)抗植物病毒制劑的重要資源[1]。魚腥草、馬齒莧、商陸的次生代謝產(chǎn)物中有抗病毒、抗菌的活性成分，魚腥草的主要化學(xué)成分中含有癸酰乙醛（也叫魚腥草素）、黃酮類等活性物質(zhì)[2]；馬齒莧的主要成分包括酸類、花色苷類、揮發(fā)油、生物堿、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖和黃酮類等活性物質(zhì)[3]；商陸主要化學(xué)成分有商陸多糖、商陸蛋白、三萜皂甙等活性物質(zhì)[4]，這些活性成分無毒、無殘留、不污染環(huán)境、不殺傷天敵、對人畜安全，具有廣譜抗菌作用。

番茄花葉病毒病主要表現(xiàn)為葉片花葉，嚴(yán)重時(shí)凹凸不平；新葉較小且細(xì)長，皺縮、畸形，病株易矮化，花芽分化下降，花、蕾大量脫落，果實(shí)少且小，花臉，極大影響產(chǎn)量，減產(chǎn)可達(dá)30%以上[5,6]。有研究發(fā)現(xiàn)，植物源抗病毒制劑對防治植物病毒病有明顯效果[2]，本研究通過超聲波高效提取魚腥草、馬齒莧、商陸中次生代謝產(chǎn)物，研制出植物源抗病毒制劑，用于防控番茄花葉病毒病。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備

JYT-LC型超聲波提取濃縮機(jī)組（該機(jī)組包括100L超聲波提取、夾層蒸汽發(fā)生罐、60L芳香油收集罐、60L負(fù)壓蒸發(fā)罐、60L濃縮罐、160L溶劑回收罐組合而成），濟(jì)寧雙和超聲設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 材料

魚腥草，購于泰安市宏康藥店；馬齒莧全草、商陸根，采自泰安市徂徠山林場，切片（段），80℃烘干，粉碎過孔徑為0.38mm的篩備用。20%病毒A（生產(chǎn)常用抗病毒化學(xué)藥劑），齊齊哈爾華豐化工有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 植物粗提物的三種提取方法

超聲波提取法：將魚腥草粉、馬齒莧全草粉、商陸根，按重量比 1∶1∶1混合均勻，稱取混合粉 20kg，進(jìn)行超聲波室溫提取，提取條件為超聲波頻率30kHz、80%乙醇、料液比為1∶15、提取時(shí)間15min。提取液過濾，共提取2次，合并濾液，濃縮，定容至3000mL，搖勻備用，定為A提取液。

煎煮法：稱取魚腥草、馬齒莧全草、商陸根混合粉20kg，加水 300L，浸泡 30min，水沸后煎 80min，過濾，共煎煮兩次，合并濾液，濃縮，定容至3000mL，搖勻備用，定為B提取液。

連續(xù)回流提取法：稱取魚腥草、馬齒莧全草、商陸根混合粉20kg，加80%乙醇300L，沸后回流80min，過濾，共提取兩次，合并濾液，濃縮，定容至3000mL，搖勻備用，定為C提取液。

1.2.2 接種用病毒制備方法

病毒的制備方法是：采感染病毒病的番茄鮮葉，按鮮病葉∶緩沖液 =1∶3（g∶mL）加緩沖液，緩沖液種類為 OPBS，緩沖液的酸堿度pH7。將上述混合體用石英砂碾磨成勻漿，用紗布過濾，摩擦接種。

1.3 防治番茄花葉病毒病試驗(yàn)

1.3.1 田間預(yù)防效果試驗(yàn)

2016年5月在泰安市岱岳區(qū)房村鎮(zhèn)番茄種植園進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)番茄苗出現(xiàn)第一片真葉（破心）時(shí)，噴施藥劑，每個(gè)處理噴施番茄苗100株。之后間隔7d噴一次，連噴3次。藥劑處理為A提取液、B提取液、C提取液、20%病毒A（生產(chǎn)常用抗病毒化學(xué)藥劑）對照、清水對照，共5個(gè)處理，藥劑使用濃度均為50μg/mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。藥劑噴施完畢后，接種病毒。接種10d后調(diào)查病情。計(jì)算病情指數(shù)及預(yù)防效果。

1.3.2 田間治療效果試驗(yàn)

當(dāng)番茄苗第一花序現(xiàn)蕾，接種病毒，接種方法同上。接種48h后噴施藥劑，藥劑處理和噴施方法同上。每次噴藥前以及第3次噴藥后第7d后調(diào)查病情。

1.4 測量指標(biāo)與方法

1.4.1 病毒病分級標(biāo)準(zhǔn)

0級—無病癥；1級—葉片明顯呈花葉或黃化，有瘡斑；3級—葉片凹凸不平，變小且畸形；5級—植株形成叢枝，大量落花落蕾；7級—整個(gè)植株矮化、果小質(zhì)劣，果實(shí)花臉。

1.4.2 計(jì)算方法

式中：CK0—對照區(qū)用藥前病情指數(shù)；

CK1—對照區(qū)用藥后病情指數(shù)；

CL0—處理區(qū)用藥前病情指數(shù)；

CL1—處理區(qū)用藥后病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間預(yù)防效果

表1 抗病毒制劑對番茄花葉病毒病的預(yù)防效果Table 1 Preventive effect of antiviral agents on tomato virus disease

由表1可以看出，三種提取液對番茄花葉病毒病均有一定的預(yù)防效果。A提取液預(yù)防效果為87.01%，C提取液次之，預(yù)防效果為77.78%，均高于常用抗病毒化學(xué)藥劑20%病毒A；B提取液的預(yù)防效果最差，僅為55.06%，低于20%病毒A。綜合分析，超聲波提取的A提取液，其成本低、抗病毒效果好，較為理想。

2.2 田間治療效果

由表2可以看出，三種提取液通過3次使用后，均取得了一定的治療效果。A提取液具有較好的治療效果，相對防效為74.36%，顯著高于相對防效為50.32%的C提取液，相對防效為43.03%的B提取液，及相對防效為50.36%的對照20%病毒A的治療效果。綜合分析，A提取液使用濃度50μg/mL具有較好的治療效果。

表2 抗病毒制劑對番茄花葉病毒病的治療效果Table 2 Treatment effect of antiviral agents on tomato virus disease

3 討論

植物活性物質(zhì)提取方法已有許多報(bào)道，如煎煮法、酶解法、浸漬法、連續(xù)回流法、微波提取法和超聲波提取法等[7]，其中，超聲波提取法的效率最高。本研究運(yùn)用三種方法提取魚腥草、馬齒莧、商陸混合提取物，通過提取物對番茄花葉病毒病防治效果的田間對比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，超聲波提取液對番茄花葉病毒病具有較好的預(yù)防和治療效果，分別達(dá)到87.01%和74.36%，均高于煎煮法提取物、連續(xù)回流提取物和常用抗病毒化學(xué)藥劑20%病毒A的防治效果。說明三種植物的超聲波混合提取物均具有較高的抗病毒活性，是天然的抗病毒劑，為植物病毒病的生物防控，以及果蔬的安全生產(chǎn)開辟新的途徑。

[1] 張豐強(qiáng).臨床大本草[M].北京∶華夏出版社,2002.

[2] 孫謙,胡中海,孫志高,等.魚腥草的生物活性及其機(jī)理研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2014,35(23)∶354-358.

[3] 牛廣財(cái),朱丹.馬齒莧化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(6)∶1090.

[4] 王鵬程,王秋紅,趙珊,等.商陸化學(xué)成分及藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中草藥,2014,45(18)∶2722-2731.

[5] 趙璇.番茄病毒病的發(fā)生規(guī)律及無公害綜合治理 [J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,(02)∶71-72.

[6] 鄭旭東,許偉東,方振興,等.露地番茄病毒病無公害綜合防治技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)科技通訊,2011,(06)∶209-211.

[7] 夏日照,廖曉蘭.農(nóng)用植物活性成分提取技術(shù)研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào),2015,31(03)∶49-56.