李惠

摘 要：想要粉針針劑車間生產(chǎn)線能夠?qū)o菌注射劑進(jìn)行分裝，同時(shí)能夠滿足有關(guān)的法規(guī)和無菌生產(chǎn)的工藝。需要在已經(jīng)經(jīng)過滅菌清洗的針劑瓶中灌入3%TSB培養(yǎng)基，在模擬無菌分裝時(shí)，可將實(shí)際物料用無菌乳糖進(jìn)行代替，惰性氣體保護(hù)可用壓縮的潔凈空氣進(jìn)行模擬，經(jīng)過燈檢、壓塞及軋蓋后再來培養(yǎng)。樣品先培養(yǎng)7d保持在20℃～25℃環(huán)境中，再在30℃～35℃的環(huán)境中進(jìn)行7d的培養(yǎng)，并且設(shè)置陽性、陰性的對(duì)照組。最后操作人員表面微生物和無菌分裝環(huán)境的微生物都通過了檢測，也符合陽性、陰性的對(duì)照，未檢出試驗(yàn)樣本有微生物。所以在分裝無菌粉針時(shí)，只要操作人員通過嚴(yán)格的培訓(xùn)，也按照要求的流程來操作，就可以實(shí)現(xiàn)實(shí)際生產(chǎn)產(chǎn)品保證無菌。

關(guān)鍵詞：粉針劑 無菌工藝 分裝

中圖分類號(hào)：R944.1+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2018）01（b）-0235-02

粉針生產(chǎn)線生產(chǎn)過程要實(shí)現(xiàn)無菌化，需人員、環(huán)境、設(shè)備及工藝相結(jié)合，進(jìn)行定期的無菌工藝試驗(yàn)來模擬，才能使得無菌分裝注射劑符合相關(guān)規(guī)定及生產(chǎn)工藝的要求。為了讓無菌制劑安全性得到保障，在生產(chǎn)過程中，就需要對(duì)整個(gè)過程中的無菌化程度進(jìn)行評(píng)價(jià)，整個(gè)流程需經(jīng)過嚴(yán)格精心設(shè)計(jì)且需要經(jīng)過驗(yàn)證的流程和方法來進(jìn)行。通常會(huì)用無菌惰性粉末代替藥品來進(jìn)行培養(yǎng)基模擬分裝試驗(yàn)，在其中裝進(jìn)培養(yǎng)基來促進(jìn)微生物的生長，通過觀察微生物培養(yǎng)生長情況，就可以了解整個(gè)生產(chǎn)的無菌化情況及存在的問題。因?yàn)榕囵B(yǎng)基與實(shí)際情況相比對(duì)微生物的生長繁殖更加有利，對(duì)無菌化生產(chǎn)過程進(jìn)行模擬，就能對(duì)整個(gè)無菌措施的有效性進(jìn)行驗(yàn)證。

1 驗(yàn)證準(zhǔn)備工作

1.1 前提條件

首先針對(duì)參與無菌區(qū)、潔凈區(qū)的人員，如果進(jìn)行培養(yǎng)基分裝操作，就要進(jìn)行GMP知識(shí)的培訓(xùn)并進(jìn)行考核通過后才能得到許可，對(duì)人員所負(fù)責(zé)的工作進(jìn)行職責(zé)明確和授權(quán)。相關(guān)資源需要及時(shí)安排到位，比如膠塞、培養(yǎng)基、西林瓶及分裝器具等都進(jìn)行了滅菌清洗；保證監(jiān)控生產(chǎn)過程的設(shè)備符合規(guī)定；有關(guān)設(shè)備和儀器如果用于分裝培養(yǎng)基，需要進(jìn)行相關(guān)的認(rèn)證或復(fù)核以確保正常運(yùn)行；有關(guān)于分裝培養(yǎng)基的流程及結(jié)果確保經(jīng)過了審核、培訓(xùn)等手續(xù)并具有有效性。

1.2 乳糖的無菌處理

用大概25kGy的鈷60對(duì)乳糖先進(jìn)行過度輻射進(jìn)行滅菌，然后測試樣本抑菌、無菌及溶解情況。對(duì)微生物的滋生情況進(jìn)行每天觀察，在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，微生物在所有樣本及對(duì)照物上生長很明顯，表明白色念珠菌及金黃色葡萄球菌在乳糖上不能被抑制。在對(duì)乳糖進(jìn)行溶解性試驗(yàn)時(shí)，乳糖溶解為澄清溶液，根據(jù)我國藥典附錄中的“無菌檢驗(yàn)法”檢查乳糖樣品是否無菌，結(jié)果全部乳糖均檢測為無菌狀態(tài)，所以根據(jù)試驗(yàn)可以確認(rèn)乳糖滿足無菌模擬分裝測試的需求。

1.3 培養(yǎng)基的微生物生長性能

為確保所使用的培養(yǎng)基在無菌模擬實(shí)驗(yàn)中的有效性，需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行無菌及生物性能測試，保證在模擬分裝測試中使用的培養(yǎng)基滿足要求。通過實(shí)踐說明，培養(yǎng)基模擬分裝試驗(yàn)使用胰酪大豆胨液體配成3%的水溶液來測試是否符合測試要求的。

2 粉針劑無菌分裝模擬驗(yàn)證

2.1 驗(yàn)證方法

首先需要進(jìn)行培養(yǎng)基水溶液的配制，此過程需根據(jù)廠商的規(guī)定來進(jìn)行，配制出3%水溶液，將其放入脈動(dòng)滅菌柜進(jìn)行滅菌操作后，再倒入所需數(shù)目的西林瓶中，瓶中也需確保無菌。然后，將無菌乳糖分裝進(jìn)有無菌培養(yǎng)基的西林瓶內(nèi)，此過程需根據(jù)無菌分裝的操作規(guī)定來進(jìn)行，整個(gè)分裝的過程應(yīng)該詳細(xì)的進(jìn)行記錄保存。在操作完之后，對(duì)西林瓶的分裝順序給予相應(yīng)的標(biāo)記或者標(biāo)號(hào)。將分裝好的樣品進(jìn)行倒置培養(yǎng)，環(huán)境溫度需滿足20℃～25℃，在此條件下至少要進(jìn)行7d的培養(yǎng)，如果有的瓶子有密封性風(fēng)險(xiǎn)問題的需要及時(shí)去除。之后在30℃～35℃的溫度環(huán)境中，再進(jìn)行至少7d的培養(yǎng)。如果在此期間內(nèi)，觀察微生物生長狀況時(shí)，發(fā)現(xiàn)有污染的情況，需要及時(shí)進(jìn)行記錄污染的批號(hào)、瓶數(shù)及日期等信息。再對(duì)污染的樣品情況進(jìn)行仔細(xì)鑒別，主要包括細(xì)胞形態(tài)、菌落和革蘭染色特征等信息。還需要監(jiān)測分裝人員及環(huán)境狀況，對(duì)于所取得的樣本中如果微生物有陽性的，還要鑒別其微生物屬、種等信息，同時(shí)也要檢測所用的材料和工具是否都是無菌狀態(tài)。

2.2 單位分裝體積及分裝數(shù)量

在進(jìn)行體積選擇時(shí)，要能夠讓容器內(nèi)表面接觸到培養(yǎng)基，再進(jìn)行旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)，讓密封件的內(nèi)表面也接觸到培養(yǎng)基，使得在培養(yǎng)微生物之后具體情況能夠被觀察到。在進(jìn)行分裝時(shí)，需考慮到微生物能夠獲得充足的氧氣，頂部需留1/4的空間，培養(yǎng)基體積需大于瓶子總?cè)莘e的1/3。此次測試把6.7mL的培養(yǎng)基裝進(jìn)了20mL的試驗(yàn)瓶中，根據(jù)相關(guān)規(guī)定及試驗(yàn)需求，此次共有3臺(tái)KF32型分裝機(jī)來進(jìn)行分裝，預(yù)計(jì)每臺(tái)分裝5000瓶，總共15000瓶。

2.3 培養(yǎng)基促生長性試驗(yàn)

在分裝后的培養(yǎng)基中隨即選擇18份，其中進(jìn)行細(xì)菌陰性對(duì)比的兩份，進(jìn)行真菌陰性對(duì)比的兩份，在其他的樣本中加入環(huán)境分離菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌及黑曲霉，分別準(zhǔn)備各兩份，含菌數(shù)均小于100cfu。陰性對(duì)照組也需要同時(shí)培養(yǎng)，培養(yǎng)真菌需5d，細(xì)菌需3d，其他的接種管都是有菌生長，而陰性對(duì)照組應(yīng)該保持無菌的環(huán)境。

3 討論

3.1 驗(yàn)證要求

只有廠房設(shè)施等已經(jīng)完成確認(rèn)，才可以進(jìn)行分裝模擬的試驗(yàn)，主要包括水系統(tǒng)、空氣凈化系統(tǒng)、真空系統(tǒng)及壓縮空氣系統(tǒng)；對(duì)物料傳遞系統(tǒng)及人員更衣系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證；對(duì)環(huán)境熏蒸滅菌情況和干熱、濕熱滅菌系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證；保證儀器設(shè)備都通過了校準(zhǔn)。

3.2 從事驗(yàn)證的人員

管理、組織及實(shí)施人員如要進(jìn)行培養(yǎng)基的分裝測試，必須通過驗(yàn)證方案、更衣驗(yàn)證、崗位SOP、微生物知識(shí)及分析方式等培訓(xùn)，并且其能力需符合參與條件。在進(jìn)行驗(yàn)證測試時(shí)，需讓人員現(xiàn)場活動(dòng)的頻次降低，動(dòng)作幅度盡量減小，嚴(yán)格遵守規(guī)定來進(jìn)行無菌生產(chǎn)的操作。

3.3 驗(yàn)證過程中環(huán)境的監(jiān)測

在進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，監(jiān)測微生物狀態(tài)需根據(jù)有關(guān)的規(guī)定來操作，和平常的生產(chǎn)頻次數(shù)保持一致，應(yīng)該把無菌工藝的各個(gè)流程都包含進(jìn)去。通常包含：浮游菌、沉降菌、空氣粒子數(shù)、人員監(jiān)測及表面微生物，對(duì)工作人員的口罩、無菌衣及手套等地方進(jìn)行取樣，保證微生物的數(shù)量保持在可以接受的范圍以內(nèi)。

3.4 對(duì)驗(yàn)證全過程控制

培養(yǎng)基在開展驗(yàn)證時(shí)，需要確認(rèn)分裝設(shè)備已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了無菌化，按照要求對(duì)膠塞、鋁蓋及西林瓶都要滅菌清洗而且通過了檢驗(yàn)，同時(shí)所需要的文件都通過了審核批準(zhǔn)可以進(jìn)行。為了讓最差情況的干擾活動(dòng)得到體現(xiàn)，需要對(duì)實(shí)際過程中的計(jì)劃干擾進(jìn)度詳細(xì)制定。在進(jìn)行分裝時(shí)，需要對(duì)中斷、人員干擾操作、空機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)和異常狀況等進(jìn)行完整及時(shí)的記錄。為了避免驗(yàn)證給后面的生產(chǎn)產(chǎn)生污染，需制定完善的方法來進(jìn)行防止。

3.5 建議

培養(yǎng)基的選擇應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品特點(diǎn)和微生物菌種庫的情況，選擇能夠適合廣泛微生物的培養(yǎng)基。想要培養(yǎng)基能夠維持并捕聚微生物活性的能力時(shí)，其中工藝惰性氣體可使用無菌空氣來代替；如果環(huán)境中需要低于0.1%的氧氣濃度時(shí)，培養(yǎng)基可使用適合厭氧微生物成長的類型。在設(shè)計(jì)分裝模擬計(jì)劃時(shí)，應(yīng)對(duì)實(shí)際班次進(jìn)行考慮，因?yàn)槠渲邪硕鄠€(gè)班次，在計(jì)劃中還應(yīng)該包含第二、三個(gè)班次，其他還需照顧到像夜班人員等的實(shí)際狀態(tài)。

參考文獻(xiàn)

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