何平有 郁宏偉 吳雅清 鄒立宏 張德寶 楊保收 朱秀同

摘要：為進(jìn)一步了解鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗（HB株）在生產(chǎn)中的使用效果，我們對(duì)該產(chǎn)品的臨床安全和效力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗安全且有效。試驗(yàn)分為兩個(gè)處理組：1）安全試驗(yàn)組，免疫后21d注射部位疫苗無(wú)殘留，且該疫苗免疫對(duì)雛鴨體重、種鴨的產(chǎn)蛋率和孵化率均無(wú)明顯影響；2）效力試驗(yàn)組，免疫鴨的ELISA抗體免疫后14d開始轉(zhuǎn)陽(yáng)，免疫后28d、60d、90d、120d和135d的陽(yáng)性率均不低于90%。免疫后28d和135d的攻毒保護(hù)率均不低于80%。

關(guān)鍵詞：鴨，坦布蘇病毒病，疫苗，安全，效力

從2010年春季開始，中國(guó)浙江、江蘇、山東、河北和北京等地區(qū)相繼暴發(fā)了一種以鴨產(chǎn)蛋下降為主要特征的疫病。在病原不清楚的情況下，根據(jù)卵巢出血的大體病變，將該病暫命名為鴨出血性卵巢炎（ duckhemorrhagic ovaritis，DHO）。2011年首屆水禽疫病防控研討會(huì)將該病統(tǒng)一命名為“鴨坦布蘇病毒病”。不同日齡的北京鴨、櫻桃谷鴨、金定鴨、麻鴨和康貝爾鴨等均可發(fā)病，雛鴨發(fā)病后期出現(xiàn)精神沉郁、體重減輕、仰翻、側(cè)翻和死亡等臨床癥狀，若細(xì)菌繼發(fā)感染，出現(xiàn)肝周炎、心包炎和氣囊炎等，死淘率增加，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。產(chǎn)蛋鴨發(fā)病后表現(xiàn)為持續(xù)性產(chǎn)蛋率低下，由于繼發(fā)感染和飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)纫蛩乜芍滤劳雎蔬_(dá)到15%～20%。疫苗免疫是預(yù)防該病流行、傳播的有效手段。為了進(jìn)一步弄清鴨坦布蘇病毒病的疫苗實(shí)際防控效果，我們選取河北、北京和廣西等地的北京鴨、櫻桃谷鴨進(jìn)行鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗臨床安全和效力進(jìn)行評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1毒種

生產(chǎn)和檢驗(yàn)用毒均為鴨坦布蘇病毒（HB株），由北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所分離、鑒定和提供。

1.2疫苗

采用鴨坦布蘇病毒（HB株）毒種，按照試行規(guī)程在瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司GMP車間生產(chǎn)5批鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗（HB株），批號(hào)為160502、160703、160804、160805和161006.

1.3試驗(yàn)地點(diǎn)及動(dòng)物

免疫試驗(yàn)地點(diǎn)為北京、河北和廣西地區(qū)，攻毒試驗(yàn)地點(diǎn)為瑞普（保定）生物藥業(yè)有公司負(fù)壓動(dòng)物舍，試驗(yàn)動(dòng)物所在試驗(yàn)地點(diǎn)未發(fā)生過鴨坦布蘇病毒病，試驗(yàn)用鴨也是未免疫過鴨坦布蘇病毒病疫苗的健康鴨。

1.4試劑盒

ELISA試劑盒（ID ScreenWest Nile Competition，產(chǎn)品編號(hào)WNC-2P），購(gòu)自法國(guó)IDVET公司。

1.5疫苗評(píng)價(jià)

1.5.1疫苗安全性評(píng)價(jià)選用7日齡櫻桃谷鴨和北京鴨肉雛鴨各3，000只，均分成6組，500只/比，其中5組為免疫組，分別制備5批疫苗，1.OmL/只，另1組為非免疫對(duì)照，各組鴨單獨(dú)隔離飼養(yǎng)。觀察鴨免疫后1—3周的采食和精神狀態(tài)。并于免疫后21d各免疫組隨機(jī)取5只免疫鴨連同5只免疫對(duì)照鴨，剖檢觀察疫苗在注射部位的吸收情況（注射部位是否水腫、滲出和出血等病理變化），免疫后28d每組隨機(jī)抽取50只免疫鴨連同對(duì)照50只非免鴨，稱重，比較其對(duì)增重的影響。

開產(chǎn)后50d北京鴨600只，均分成6組，100只/批，其中5組為免疫組，分別制備5批疫苗，2.Oml/只，另1組為非免疫對(duì)照，其中兩側(cè)胸部肌肉各注射l.OmL疫苗，各組鴨隔離飼養(yǎng)。記錄種鴨免疫后30d內(nèi)的產(chǎn)蛋數(shù)量，并進(jìn)行標(biāo)記，與非免疫種鴨同期產(chǎn)蛋數(shù)與孵化率進(jìn)行比較

1.5.2疫苗效力評(píng)價(jià)將35日齡后備鴨北京鴨4，000只分成6組，1—5組，每組750只，分別免疫5批疫苗，頸胸部肌內(nèi)注射1.OmL/只，余下250只不免疫，作空白對(duì)照，各組鴨隔離飼養(yǎng)。首次免疫后2周，進(jìn)行二次免疫。免疫后0、14、28、60、90、120和135d連同非免疫組隨機(jī)抽取10只鴨，采血，檢測(cè)ELISA抗體，統(tǒng)計(jì)并分析抗體陽(yáng)性率的變化規(guī)律。并于免疫后28、135d連同非免疫組隨機(jī)抽取10只鴨，按照文獻(xiàn)所述方法在負(fù)壓動(dòng)物舍進(jìn)行攻毒，計(jì)算各組的攻毒保護(hù)率。

將開產(chǎn)后30d北京鴨4，000只分成6組，1～5組，每組750只，分別免疫5批疫苗，經(jīng)胸部肌內(nèi)注射1.OmL/只，余下250只不免疫，作空白對(duì)照，各組鴨隔離飼養(yǎng)。首次免疫后2周，進(jìn)行二次免疫。免疫后0、14、28、60、90、120和135天連同非免疫組隨機(jī)抽取10只鴨，采血，檢測(cè)ELISA抗體，統(tǒng)計(jì)并分析抗體陽(yáng)性率的變化規(guī)律。并在免疫后28、1 35天連同非免疫組隨機(jī)抽取10只鴨，按照文獻(xiàn)所述方法在負(fù)壓動(dòng)物舍進(jìn)行攻毒，計(jì)算各組的攻毒保護(hù)率。

2結(jié)果與分析

2.1疫苗安全性

2.1.1全身不良反應(yīng)情況所有免疫疫苗的雛鴨和種鴨，按照說明書要求的2倍免疫劑量免疫后，連續(xù)觀察21d。所有免疫鴨與非免疫鴨相比未見異常，免疫鴨精神狀況、采食正常，未出現(xiàn)任何全身不良反應(yīng)。

2.1.2注射部位疫苗吸收情況免疫后21d，每組隨機(jī)取出5只免疫鴨，用手檢查注射部位，均未發(fā)現(xiàn)有腫脹或肉芽腫塊。剖檢：免疫鴨2/5在注射部位可見極其微小的疫苗痕跡，其余鴨的注射部位均無(wú)疫苗顆粒存在，吸收良好，注射部位局部均無(wú)水腫、滲出和出血。

2.1.3鴨群生產(chǎn)性能

1）雛鴨體重：具體結(jié)果見表1。從表1可以看出，雛鴨免疫后28d時(shí)，5批疫苗免疫組鴨和非免疫對(duì)照組鴨的體重?zé)o明顯差異，疫苗免疫未給雛鴨的增重帶來(lái)負(fù)面影響。

2）種鴨的產(chǎn)蛋和孵化情況：種鴨免疫后，每天統(tǒng)計(jì)各組產(chǎn)蛋情況，連續(xù)統(tǒng)計(jì)30d。產(chǎn)蛋量在免疫后第3d開始下降，下降3～4個(gè)百分點(diǎn)，然后逐漸恢復(fù)，到第10d已經(jīng)基本恢復(fù)到非免疫對(duì)照鴨的同樣水平。且從種鴨免疫后4～ 6d內(nèi)每組隨機(jī)抽取80枚入孵蛋，通過統(tǒng)計(jì)孵化率，發(fā)現(xiàn)免疫組與對(duì)照組無(wú)明顯差異，說明疫苗對(duì)免疫后30d內(nèi)的產(chǎn)蛋率和免疫后4～ 6d孵化率無(wú)明顯影響，結(jié)果詳見表2。

2.2疫苗的免疫效力

2.2.1對(duì)后備鴨的免疫效力后備鴨免疫前和對(duì)照鴨ELISA抗體均為陰性，一次免疫后14d，ELISA抗體陽(yáng)性率40%～80%，一次免疫后28d～135d抗體陽(yáng)性率為90%～100%，其免疫后28d和135d攻毒保護(hù)率分別為90%～100%，相應(yīng)對(duì)照發(fā)病率均為100%，說明疫苗免后14d產(chǎn)生保護(hù)力，免疫后28d～135d均能提供良好的保護(hù)，抗體檢測(cè)方法與病毒分離法結(jié)果吻合，結(jié)果詳見表3。

2.2.3對(duì)產(chǎn)蛋鴨的免疫效力種鴨免疫前和對(duì)照鴨ELISA抗體均為陰性，一次免疫后14d，ELISA抗體陽(yáng)性率為20%～30%，一次免疫后28天抗體陽(yáng)性率為90%～100%，60～135d的抗體陽(yáng)性率均為90%～100%，其免疫后28d和135d攻毒保護(hù)率分別為90%～100%和100%，相應(yīng)對(duì)照發(fā)病率均為100%。解剖觀察免疫組卵巢均發(fā)育正常且部分有成形蛋，對(duì)照組出現(xiàn)不同程度卯泡膜變性、卯泡變形和嚴(yán)重出血，且輸卯管內(nèi)無(wú)成形蛋，說明疫苗免疫后14d產(chǎn)生保護(hù)力，免疫后28～135d均能提供良好的保護(hù)，抗體檢測(cè)方法與病毒分離法、大體病變法結(jié)果均符合，個(gè)別組大體病變法判定的保護(hù)率偏低，這可能與產(chǎn)蛋期鴨對(duì)該病毒更為敏感有關(guān)。

3討論與結(jié)論

生物制品的安全性是養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的前提條件。本研究通過5批GMP車間生產(chǎn)的鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗雙倍劑量免疫生產(chǎn)中的雛鴨（櫻桃谷鴨和北京鴨）和產(chǎn)蛋北京鴨，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均沒有明顯免疫副反應(yīng)，免疫后21d疫苗吸收良好，且對(duì)雛鴨的增重和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)蛋率無(wú)明顯影響，說明疫苗安全性好。但不同品種的鴨對(duì)外界因素的敏感性差異比較大，為了不影響實(shí)際生產(chǎn)業(yè)績(jī)，建議產(chǎn)蛋鴨在開產(chǎn)前進(jìn)行免疫。

疫苗的效力是關(guān)鍵，尤其是臨床效力更為直接和可靠。本研究通過5批GMP車間生產(chǎn)的鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗免疫生產(chǎn)中的北京鴨雛鴨和北京鴨產(chǎn)蛋鴨，免疫后14d發(fā)現(xiàn)抗體開始轉(zhuǎn)陽(yáng)，轉(zhuǎn)陽(yáng)率在40%～80%，免疫后28～135d的抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率不低于90%，且免疫后28d和135d攻毒血清的病毒分離率和卵巢病變發(fā)生率均可減少80%以上，說明疫苗保護(hù)效果好，免疫可以用于臨床鴨坦布蘇病毒病的防治。具體免疫過程為免疫后14d產(chǎn)生保護(hù)力，免疫持續(xù)期可以達(dá)免疫后135d。抗體檢測(cè)法可用于臨床疫苗效果評(píng)價(jià)，為臨床疫苗的正確使用提供有效支撐。

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