吳功強(qiáng)

摘 要：鹽酸羅沙替丁醋酸酯是臨床上廣泛應(yīng)用于胃及十二指腸潰瘍的H2受體拮抗劑。鹽酸羅沙替丁醋酸酯為前體藥物，在體內(nèi)它通過(guò)小腸、血漿和肝臟的脂化作用，迅速轉(zhuǎn)化成其活性代謝物羅沙替丁，在口服給藥后的血漿樣品不能檢出，因此，所有的藥動(dòng)學(xué)研究均是檢測(cè)生物樣品中羅沙替丁的含量來(lái)實(shí)現(xiàn)。羅沙替丁是鹽酸羅沙替丁醋酸酯的初級(jí)代謝產(chǎn)物。筆者在此研究服用鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片及緩釋膠囊后的藥物動(dòng)力學(xué)特征，進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：鹽酸羅沙替丁醋酸酯；緩釋片；藥動(dòng)學(xué)研究

前言：早期的出版物中描述了多種鹽酸羅沙替丁醋酸酯生物樣品分析的方法，包括氣質(zhì)聯(lián)用、高效液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用。因?yàn)楦咝б合嗌V法操作簡(jiǎn)便，其靈敏度及適用性可以滿足生物樣本分析的要求，所以筆者采用高效液相色譜法進(jìn)行血漿中羅沙替丁濃度的測(cè)定。筆者在此描述了一種簡(jiǎn)便的高效液相色譜法，將其用于檢測(cè)血漿中羅沙替丁的濃度。

1.鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片的藥動(dòng)學(xué)研究發(fā)展情況

鹽酸羅沙替丁醋酸酯，是日本臟器制藥株式會(huì)社研制開(kāi)發(fā)，1986年在日本上市的中長(zhǎng)效抑酸藥物。體內(nèi)通過(guò)水解作用脫乙酰基迅速轉(zhuǎn)化為其活性代謝產(chǎn)物羅沙替丁，選擇性阻斷組胺H2受體，臨床主要用于預(yù)防和治療由于胃酸高分泌狀態(tài)引起的消化系統(tǒng)疾病，如胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、反流性食管炎、急性胃炎、慢性胃炎急性發(fā)作。該藥尚未在國(guó)內(nèi)上市，只能通過(guò)研究來(lái)檢測(cè)體內(nèi)活性代謝產(chǎn)物羅沙替丁的濃度，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，揭示該藥在中國(guó)人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為臨床合理用藥提供依據(jù)。本研究采用高效液相色譜法進(jìn)行血漿中羅沙替丁濃度的測(cè)定。同時(shí)選擇了一種簡(jiǎn)便的高效液相色譜法，將其用于檢測(cè)血漿中羅沙替丁的濃度，其具有較寬泛的線性范圍（100～6000μg·L-1），以及良好的精密度和準(zhǔn)確度。

2.鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片的藥動(dòng)學(xué)研究的具體方法

2.1受試者的選擇條件和標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)方案需經(jīng)正規(guī)醫(yī)院的醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)討論通過(guò)，本次研究選取32名參與者，其中男女各16名，身高（165.3±7.9）cm，體質(zhì)量（56.3±6.5）kg，年齡（20.6±1.3）歲。均無(wú)藥物過(guò)敏史，無(wú)肝、腎疾病史，精神狀態(tài)良好，全面體格檢查均正常（包括肺部聽(tīng)診、肝脾觸診、心電圖、心率、血壓、肝腎功能、血尿常規(guī)等），排除了一切可能影響本次研究的所有因素，旨在獲得最準(zhǔn)確的研究結(jié)果，為臨床合理用藥提供依據(jù)。在被告知所有與藥物有關(guān)可能的不良反應(yīng)后，自愿簽署知情同意書。受試者在受試前2周內(nèi)未服過(guò)任何藥物，從開(kāi)始進(jìn)入試驗(yàn)后直至試驗(yàn)結(jié)束，禁煙酒及任何飲料。

2.2儲(chǔ)備液及標(biāo)準(zhǔn)液的配制

研究需要使用的羅沙替丁及咖啡因儲(chǔ)備液用純化水配制成符合0.1g·L-1的溶液。羅沙替丁儲(chǔ)備液連續(xù)稀釋制得質(zhì)量濃度分別為1、2、4、8、15、30和60mg·L-1的工作標(biāo)準(zhǔn)液。向空白血漿中分別加入不同質(zhì)量濃度的羅沙替丁工作標(biāo)準(zhǔn)液，得到血漿中藥物質(zhì)量濃度分別為100、200、400、800、1500、3000和6000μg·L-1的樣品，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。用同樣的方法制得質(zhì)量濃度分別為200、800及6000μg·L-1的質(zhì)控樣品?？Х纫颍▋?nèi)標(biāo)物）用純化水稀釋至最終質(zhì)量濃度為3000μg·L-1的內(nèi)標(biāo)溶液。所有的溶液在4℃冰箱中冷藏保存。接著取出經(jīng)冷凍保存的血漿，室溫下溶化，精密吸取100μL置于4mL試管中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液10μL、甲醇水溶液50μL（甲醇-水體積比1∶1）和pH值11的磷酸鹽緩沖液100μL，再加入正己烷-二氯甲烷-異丙醇（體積比30∶1∶1.5）萃取溶劑3mL，渦旋混合10min，3000r·min-1離心10min，吸取上層有機(jī)相置于干凈試管中，50℃氮?dú)饬飨麓蹈伞堅(jiān)尤肓鲃?dòng)相100μL，渦旋5min復(fù)溶[2，6-7]，得供試液。色譜條件為色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-水（含0.1%甲酸）（37∶63）；流速：0.2mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。質(zhì)譜條件為離子化方式：ESI；掃描方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）；離子極性：正離子；檢測(cè)離子：羅沙替丁[M+H]+，m/z307.0→107.碰撞能34eV；內(nèi)標(biāo)（石杉?jí)A甲）[M+H]+，m/z243.2→210.9，碰撞能30eV；掃描時(shí)間：0.5s；電噴霧電壓：4.8kV；毛細(xì)管溫度：320℃；源內(nèi)碰撞CID：9V；鞘氣流速：38arb；輔助氣流速：3arb。

2.3方法學(xué)驗(yàn)證

先進(jìn)行方法特異性的相關(guān)試驗(yàn)：考察6個(gè)不同個(gè)體的空白血漿色譜圖、空白血漿樣品外加羅沙替丁及內(nèi)標(biāo)的色譜圖（質(zhì)量濃度3000μg·L-1）以及用藥后的血漿樣品色譜圖，記錄羅沙替丁及內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間分別4.7min和5.6min，二者的分離度大于1.5，空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾羅沙替丁及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定。記錄信噪比為3∶1時(shí)的樣品質(zhì)量濃度為最低檢測(cè)限。其次通過(guò)對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間和溫度的羅沙替丁血漿樣品進(jìn)行分析來(lái)評(píng)估其穩(wěn)定性。將制備后的低（200mg·L-1）、中（800mg·L-1）和高（6000μg·L-1）3種質(zhì)量濃度的血漿樣品在不同的條件下放置，每個(gè)條件每一質(zhì)量濃度3個(gè)樣品。將儲(chǔ)存后的樣品按“2.2”條方法進(jìn)行處理，所得樣品與內(nèi)標(biāo)的峰面積比，與新鮮配制的血漿樣品處理后的峰面積比進(jìn)行比較，計(jì)算其百分率。短期穩(wěn)定性：將羅沙替丁血漿樣品于室溫下放置4h后，進(jìn)行分析；長(zhǎng)期穩(wěn)定性：將羅沙替丁血漿樣品于-20℃冰箱中冷凍保存，放置21d后取出進(jìn)行分析；處理后樣品穩(wěn)定性：將處理后羅沙替丁血漿樣品于室溫放置8h后進(jìn)行分析。采用雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每個(gè)受試者空腹抽取空白血4mL，每組分別給予自制鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片及市售鹽酸羅沙替丁緩釋膠囊150mg，給藥后分別于0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h取血3mL，血樣用肝素抗凝，離心取血漿，于-20℃冰箱中冷凍保存。間隔兩周后，交叉給藥，同時(shí)間點(diǎn)采血。

3.藥動(dòng)學(xué)參數(shù)測(cè)定

32例受試者在分別了自制的鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片及市售鹽酸羅沙替丁緩釋膠囊150mg后，經(jīng)DAS2.0統(tǒng)計(jì)軟件擬合，符合開(kāi)放二室模型，血漿羅沙替丁主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后受試制劑的AUC0→24 在參 比制劑的80%～125%內(nèi)，受試制劑的AUC0→∞ 在參比制劑的80%～125%內(nèi)，受試制劑的ρmax 在參 比制劑的75%～133%內(nèi)，兩藥生物等效。經(jīng)重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，自制鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片與市售緩釋膠囊的生物等效性分析在性別間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

結(jié)語(yǔ)：鹽酸羅沙替丁醋酸酯是一種目前國(guó)內(nèi)正處于臨床研究階段的新藥，在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化成其活性代謝物羅沙替丁。筆者運(yùn)用液-液萃取后高效液相色譜檢測(cè)的方法，用于測(cè)定人類血漿內(nèi)羅沙替丁的含量，其具有適合的靈敏度、精密度及準(zhǔn)確度。同時(shí)該分析方法簡(jiǎn)便，在進(jìn)行大量的生物樣品分析時(shí)，方便快速。應(yīng)用該方法進(jìn)行了自制鹽酸羅沙替丁醋酸酯緩釋片與市售緩釋膠囊的生物等效性分析，其結(jié)果符合中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局相關(guān)指南的要求，二者生物等效。

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