楊志強(qiáng)，李瀟軒

（江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017）

錦鯉養(yǎng)殖發(fā)展的兩大制約瓶頸是親本選育和魚苗培育，其中，魚苗培育過程中各種病原（細(xì)菌、真菌及病毒等）的侵襲常會導(dǎo)致魚苗大量死亡，嚴(yán)重制約苗種生產(chǎn)的規(guī)?；?。人工育苗中對受精卵進(jìn)行消毒，可以在很大程度上阻斷病原體的垂直傳播途徑（通過卵和親體排泄物傳播給幼體）。由于消毒過程中化學(xué)藥物的介導(dǎo)，受精卵卵膜、卵質(zhì)及滲透壓存在遭到破壞的危險，可能導(dǎo)致孵化率降低、畸形率升高，因此，選擇合適的藥物種類及控制適宜的藥物濃度是受精卵消毒處理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。該試驗運用不同濃度甲醛、過氧化氫、聚維酮碘和二氧化氯等4種常用水產(chǎn)消毒劑對錦鯉受精卵進(jìn)行消毒，觀察各種藥物對受精卵孵化效果的影響，以期為確定錦鯉育苗過程中適宜的消毒劑及最佳處理濃度等方面提供技術(shù)參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2017年5月在江蘇省淡水水產(chǎn)研究所揚(yáng)中基地進(jìn)行。促黃體素釋放激素類似物L(fēng)RH-A1加絨毛膜促性腺激素HCG溶于0.7%生理鹽水，注射LRH-A2和HCG的混合物催產(chǎn)親魚，LRH-A1的濃度為 3 μg/mL，HCG 的濃度為 500 IU/mL，胸鰭基部注射催產(chǎn)激素，注射劑量：雌魚2 mL/kg，雄魚1 mL/kg，效應(yīng)時間10～24 h后獲取質(zhì)量較好、未感染病原的同一批受精卵。

試驗用消毒藥物甲醛、過氧化氫、聚維酮碘和二氧化氯的規(guī)格及生產(chǎn)廠家等見表1。

1.2 試驗方法

表1 4種消毒藥物的規(guī)格與成分

依據(jù)相關(guān)要求與標(biāo)準(zhǔn)配置試驗液母液，逐步稀釋獲得設(shè)定藥液濃度，受精卵浸入不同濃度藥液中。根據(jù)實際生產(chǎn)，結(jié)合已有的文獻(xiàn)資料和前期預(yù)試驗的結(jié)果，設(shè)置各種藥物濃度梯度及處理時間（表 2）。

試驗采用靜水一次消毒的方法進(jìn)行處理，每一試驗組取150粒處于Ⅳ細(xì)胞期的受精卵，在相應(yīng)的藥物濃度中浸泡相應(yīng)的處理時間后，過濾網(wǎng)濾掉消毒劑溶液，將受精卵放入1 500 mL燒杯中，微充氣使受精卵上下翻滾，孵化用水為經(jīng)48 h曝氣的自來水，pH 值為（7.8±0.1），溶解氧濃度＞4.5 mg/L，水溫為（24.0±0.5）℃。試驗設(shè)對照組，每組150粒受精卵，每組3個重復(fù)。受精卵孵化結(jié)束后，統(tǒng)計各試驗組的孵出魚苗數(shù)和脊椎彎曲、脊柱或尾部彎曲、油球異位或異數(shù)等畸形魚苗數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

孵化率=孵出魚苗數(shù)/總受精卵數(shù)×100%；

畸形率=畸形魚苗數(shù)/孵出魚苗總數(shù)×100%。

表2 4種消毒藥物的濃度梯度及處理時間

用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示數(shù)據(jù)結(jié)果，使用Excel 2013和SPSS 21.0分析數(shù)據(jù)，以P<0.05表示差異具統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

錦鯉受精卵經(jīng)4種消毒藥物處理后，孵化率、畸形率統(tǒng)計比較結(jié)果如表3。由表3可知4種消毒藥物對受精卵孵化效果的影響。

甲醛：隨著濃度增加，孵化率基本保持不變，各濃度組孵化率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；畸形率隨著濃度增加逐漸升高，各濃度組畸形率顯著高于對照組（P<0.05）。

過氧化氫：孵化率隨著濃度增加先升高后下降，1 000 mg/L濃度組孵化率最高，為94.51%，500 mg/L、1 000 mg/L濃度組孵化率顯著高于對照組（P<0.05），1 500 mg/L、2 000 mg/L 濃度組孵化率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；畸形率隨著濃度增加逐漸升高，500 mg/L、1 000 mg/L濃度組畸形率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），1 500 mg/L、2 000 mg/L濃度組畸形率顯著高于對照組（P>0.05）。

聚維酮碘：孵化率隨著濃度增加逐漸下降，50 mg/L濃度組孵化率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），75 mg/L、100 mg/L、125 mg/L 濃度組孵化率顯著低于對照組（P<0.05）；畸形率隨著濃度增加逐漸升高，50 mg/L、75 mg/L濃度組畸形率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），100 mg/L、125 mg/L濃度組畸形率顯著高于對照組（P>0.05）。

二氧化氯：孵化率隨著濃度增加先升高后下降，1.5 mg/L濃度組孵化率最高，為92.35%，0.5 mg/L、1.0 mg/L濃度組孵化率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），1.5 mg/L、2.0 mg/L 濃度組孵化率顯著高于對照組（P<0.05）；畸形率隨著濃度增加逐漸升高，0.5 mg/L、1.0 mg/L濃度組畸形率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），1.5 mg/L、2.0 mg/L 濃度組畸形率顯著高于對照組（P＞0.05）。

表3 4種消毒藥物的消毒效果

3 討論

魚類人工育苗過程中，出苗率不高的主要原因是一些細(xì)菌、真菌和病毒引發(fā)的疾病導(dǎo)致魚苗大規(guī)模死亡。引發(fā)魚苗疾病的病原體有多種來源，如餌料、養(yǎng)殖水體、親魚的體表黏液及排泄物、卵帶入的可垂直傳播的病毒（神經(jīng)壞死病毒、傳染性造血器官壞死病毒、傳染性胰臟壞死病毒等）。育苗過程中，對親魚、育苗池、育苗用水及受精卵進(jìn)行消毒是必不可少的程序，因此，受精卵孵化率得以提高且仔稚魚發(fā)病減少、存活率升高。人工育苗中對受精卵進(jìn)行消毒，可以很大程度上防止病原體的垂直傳播，預(yù)防各種病原對受精卵的危害。甲醛、過氧化氫、聚維酮碘和二氧化氯作為常用的消毒藥物已在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到廣泛使用，該試驗比較了不同濃度的此4種消毒藥物對錦鯉受精卵孵化的影響。

化學(xué)藥物消毒處理過程中，藥物必定對受精卵產(chǎn)生一定程度的危害。此外，由于化學(xué)藥物破壞了受精卵的卵膜、卵質(zhì)及滲透壓導(dǎo)致消毒處理組受精卵畸形的表現(xiàn)與對照組不同，對照組大多為脊椎彎曲、脊柱或尾部彎曲，而消毒處理組大多為圍心腔、卵黃囊的腫大。4種化學(xué)藥物消毒處理后受精卵的畸形率較對照組都呈現(xiàn)升高的趨勢，且畸形率與藥物的濃度呈正相關(guān)，這與孔祥迪等[1]對棕點石斑魚（♀）×鞍帶石斑魚（♂）受精卵的研究結(jié)果相似。

該研究中，甲醛和聚維酮碘處理錦鯉受精卵對其孵化效果的影響變化幅度較大，甲醛處理孵化率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義、畸形率顯著高于對照組，聚維酮碘處理孵化率顯著低于對照組、畸形率差異不具統(tǒng)計學(xué)意義。此外，甲醛對人體具有強(qiáng)烈的致癌和促癌作用，人體、牲畜及水產(chǎn)動物均易受其殘留危害，水體也易受污染，故不建議使用上述兩種藥物對錦鯉受精卵進(jìn)行消毒。

500 mg/L、1 000 mg/L過氧化氫處理組孵化率顯著高于對照組，分別為93.37%、94.51%，且畸形率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義，分別為6.38%、6.79%。國外學(xué)者的研究也發(fā)現(xiàn)，500 mg/L、1 000 mg/L過氧化氫藥浴虹鱒受精卵10 min或15 min，可以有效控制受精卵感染水霉，提高孵化率，與該試驗結(jié)果相似。因此，建議錦鯉受精卵孵化過程中，適宜消毒藥物及濃度范圍為過氧化氫500～1 000 mg/L處理10 min。

1.5 mg/L、2.0 mg/L二氧化氯處理組孵化率顯著高于對照組，分別為92.35%、92.27%，且畸形率顯著高于對照組，分別為8.72%、9.09%。這與陳超然等[2]對草魚、鰱和鳙受精卵的研究結(jié)果（二氧化氯1.0～10.0 mg/L處理20 min，孵化率、畸形率與對照組差異不具統(tǒng)計學(xué)意義）相差較大，可能因試劑有效氯含量不同（陳超然使用的為6.6%，該試驗為10%）。使用1.5 mg/L、2.0 mg/L二氧化氯處理錦鯉受精卵可以提高孵化率，但是，畸形率也因此升高，不是消毒藥物的首選。

受精卵的生理生態(tài)、消毒劑耐受力及外部環(huán)境忍耐力因魚類種類不同而有較大差異。錦鯉作為觀賞魚類，研究消毒劑對其受精卵孵化效果的影響較食用魚類相對粗淺，主要是依據(jù)生產(chǎn)育苗工作人員的經(jīng)驗，結(jié)合考慮藥物的價格和安全性，來設(shè)定不同梯度的藥物濃度及消毒時間。另外，為盡可能確保受精卵和環(huán)境都不受消毒劑的危害，在育苗生產(chǎn)中要嚴(yán)格控制藥物的使用濃度，最大程度地降低對魚卵的副作用及環(huán)境的影響。該試驗未研究對感染病原的受精卵消毒后其孵化效果的變化，因此，對感染病原的錦鯉受精卵進(jìn)行藥物消毒，研究對其孵化效果的影響，可進(jìn)一步加強(qiáng)對錦鯉受精卵消毒環(huán)節(jié)的科學(xué)指導(dǎo)。

[1]孔祥迪，陳超，李炎璐，等.4種常用消毒藥物對棕點石斑魚（♀）×鞍帶石斑魚（♂）受精卵孵化的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2014，35（05）：122-127.

[2]陳超然，孟長明，陳昌福.穩(wěn)定性粉狀二氧化氯對魚類受精卵上附著菌的清除作用[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2001，（06）：568-570.