詹麗娥 陸冰洋 劉華棟 李婷婷 唐娟 王彩先 丁樹榮

摘要：近年來，在山西省不同地區(qū)總發(fā)現(xiàn)有新城疫（ NDv）的發(fā)生。本文針對(duì)一例疑似病例通過臨床癥狀，剖檢變化，PCR鑒定等方法對(duì)其進(jìn)行診斷，確定其為新城疫感染。研究過程中發(fā)現(xiàn)通過使用血凝抑制試驗(yàn)方法對(duì)養(yǎng)殖場的雞群進(jìn)行采血檢測，測定養(yǎng)殖場整體抗體水平高低不均勻，確定雞群整體存在發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，從而為養(yǎng)殖場新城疫的防控提供參考。

關(guān)鍵詞：新城疫；RT-PCR；抗體

2017年3月9日山西省晉中地區(qū)某養(yǎng)雞場150日齡的蛋雞發(fā)生疾病，此養(yǎng)雞場存欄雞8000只，近期部分雞發(fā)生疾病。整群精神狀態(tài)差，采食量和飲水量均下降。場主攜帶3只發(fā)病雞（2只活雞，1只死雞）來筆者研究室進(jìn)行診斷。

1臨床癥狀

病雞精神沉郁、垂頭縮頸、翅翼下垂、雞冠、肉髯發(fā)紫呈暗紅色、呆立、狀似昏睡、食欲減少。主要癥狀表現(xiàn)在呼吸道，包括咳嗽、張口呼吸、呼吸時(shí)偶爾會(huì)伴有拉長的怪叫聲。嗉囊內(nèi)積有液狀內(nèi)容物，倒提時(shí)常從口角流出大量酸臭的暗灰色液體。排黃綠色或黃白色水樣稀便，有時(shí)混有少量血液。雞產(chǎn)蛋下降或停產(chǎn)，蛋殼質(zhì)量變差；

2病理變化

病變主要集中在消化道，腺胃、小腸和盲腸病變最為明顯。腺胃乳頭腫脹、出血或潰瘍，尤其是在與食道或腺胃交界處最明顯。十二指腸黏膜及小腸黏膜出血或潰瘍，有的可見到“棗核狀潰瘍灶”，表面有黃色或灰綠色纖維素膜覆蓋。盲腸扁桃體腫大、出血和壞死。呼吸道以卡他性炎癥和氣管充血、出血為主。鼻道、喉、氣管中有漿液性或卡他性滲出物。

3 PCR鑒定

從發(fā)病雞的肺臟、肝臟、脾臟等器官取樣19，剪碎混勻后取0.05g研磨，8000rpm離心后取上清液，使用新城疫病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒檢測NDV，取已處理的樣品，加入裂解液600 μ L，充分顛倒混勻，室溫靜置3～5min。將液體吸入吸附柱中，13000rpm離心30s。棄去收集管中的液體，加入600μL洗液，13000rpm離心30s。重復(fù)上一步。棄去收集管中液體，13000rpm空柱離心2min，以除去殘留的洗滌液。將吸附柱移入新的1.5mL離心管中，向柱中央加入洗脫液50μL，室溫靜置1min，13000rpm離心30s，離心管中液體即為模板RNA。反轉(zhuǎn)錄條件為：42℃45min，94℃3min；PCR反應(yīng)條件為：94℃30s，55℃30s，72℃30s，共循環(huán)35次，72℃延伸7min。使用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增結(jié)果，結(jié)果見圖1。

由圖1結(jié)果可見，擴(kuò)增出明顯的條帶，與試劑盒里設(shè)定的擴(kuò)增片段大小相符。

4診斷

通過臨床癥狀、剖檢病理變化和PCR鑒定，確定病雞感染新城疫。

5抗體檢測

采用農(nóng)業(yè)部1999年頒布的14種動(dòng)物疫病檢測方法中的紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（ Hl），微量法[1]檢測被檢血清Hl抗體效價(jià)。對(duì)全雞場雞群進(jìn)行抗體檢測，按照0.5%的比例抽樣。按照比例抽檢出39份樣品，檢測結(jié)果見表1。

由表1可知，該養(yǎng)殖場的抗體效價(jià)分布從3到8都有，可見分布極為不均勻。

6防治

針對(duì)試驗(yàn)結(jié)果，在飲水中添加安普霉素防止大腸桿菌感染，肌內(nèi)注射新城疫I系疫苗[2]，同時(shí)淘汰處理已發(fā)病的病雞。養(yǎng)殖場加強(qiáng)通風(fēng)、清掃和消毒工作。經(jīng)使用治療方案5天后，雞群整體精神恢復(fù)正常，無死亡。

7討論

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastledisease virus，NDv）引起的危害多種家禽特別是陸生禽類的最主要傳染病之一。一些發(fā)達(dá)國家采用強(qiáng)制撲殺強(qiáng)毒感染禽群為主的方法，已基本控制了本病[3]。由于整體飼養(yǎng)管理水平的限制和強(qiáng)毒感染的普遍存在，免疫接種目前仍是我國控制新城疫的主要辦法[4]。

雞群建立快速的黏膜免疫和在組織、血液中產(chǎn)生持久高水平的循環(huán)抗體，在強(qiáng)毒感染情況下的臨床保護(hù)和有效降低排毒率方面更好[5]。而且新城疫的保護(hù)力與抗體的平均水平[6]和抗體結(jié)果的離散度[7]具有相關(guān)性。本例雞場的抗體檢測結(jié)果可見抗體分布不均勻，根據(jù)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，抗體水平低于4 log2即沒有保護(hù)力，缺乏保護(hù)力的雞數(shù)量較多，由于目前已經(jīng)有雞發(fā)生新城疫，這樣的抗體水平很難抵抗新城疫病毒的攻擊而導(dǎo)致群體暴發(fā)新城疫。

本例雞場出現(xiàn)抗體水平的不均勻與養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理水平相關(guān)，經(jīng)與場主溝通，雞場的免疫主要由飼養(yǎng)員來做，由于飼養(yǎng)員對(duì)疫苗的運(yùn)輸、保存、使用等方面的技術(shù)水平有限，而且免疫后不做抗體檢測，不關(guān)注免疫效果，此次抗體檢測的結(jié)果可見抗體水平高低不均勻，很多雞的抗體水平過低，不具有保護(hù)力。此次發(fā)病應(yīng)為抗體水平過低的雞最先感染新城疫引起的發(fā)病。

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