楊 義，袁 玖,*，楊喜喜，王珍霞，趙海碧，王彥乾，趙海文，霍潤(rùn)明，劉學(xué)偉，萬(wàn)欣杰

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.蘭州聯(lián)邦飼料有限公司)

飼料間組合效應(yīng)(associative effective,AE)是指來(lái)自不同飼料來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)間互作的整體效應(yīng)。當(dāng)飼料的整體互作使飼糧內(nèi)某養(yǎng)分的利用率或采食量指標(biāo)高于各個(gè)飼料原料數(shù)值的加權(quán)值時(shí)，為“正AE”；若低于加權(quán)值，為“負(fù)AE”；若二者相等，為“零AE”。研究AE的方法分為體外試驗(yàn)、體內(nèi)消化代謝試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)3種。自Menke等發(fā)現(xiàn)由于氣體產(chǎn)量同有機(jī)物消化率高度相關(guān)以來(lái)，體外產(chǎn)氣法被應(yīng)用于不同種類(lèi)的飼料間組合AE研究。在中國(guó)，各種秸稈可收集利用總量為68 595×104t, 平均可收集系數(shù)為0.81；殘留田間和收集過(guò)程中浪費(fèi)的秸稈占19%。其中，適宜加工飼喂的秸稈為58 764×104t，占85.67%。農(nóng)作物秸稈都存在著含氮量低、采食量少、消化性差、可利用能低等缺陷，單獨(dú)飼喂僅可作維持用能量飼料。為此，研究人員提出給農(nóng)作物秸稈補(bǔ)飼優(yōu)質(zhì)牧草苜蓿以提高其利用率。蕎麥、大豆等在我國(guó)種植面積很廣，但其副產(chǎn)品蕎麥秸稈、大豆秸稈及冰草等卻沒(méi)有被更科學(xué)地利用起來(lái)。本試驗(yàn)在精粗比30∶70下，運(yùn)用體外產(chǎn)氣法研究不同水平苜蓿配比蕎麥秸稈、大豆秸稈、冰草后對(duì)綿羊飼糧AE的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

蕎麥秸稈、大豆秸稈、冰草、苜蓿干草均采樣于甘肅省臨洮縣。精料補(bǔ)充料配方組成：玉米84.87%，豆粕7.32%%，棉籽粕3.66%，食鹽1.71%，預(yù)混料2.44%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

精粗比(concentrate∶roughage, C∶R)為30∶70，精料補(bǔ)充料占40%，某種農(nóng)作物秸稈、苜蓿干草占60%。具體為：精料補(bǔ)充料:某秸稈:苜蓿(Concentrate: Straw: Alfalfa)分別為30∶70∶0、30∶60∶10、30∶50∶20、30∶40∶30、30∶30∶40、30∶:20∶50、30∶10∶60、30∶0∶70共24種組合，蕎麥秸稈、大豆秸稈、冰草、苜蓿、精料補(bǔ)充料5種飼料單獨(dú)培養(yǎng)，共29種飼糧組合。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 瘤胃液供體動(dòng)物及其飼養(yǎng) 試驗(yàn)動(dòng)物為3只裝有永久性瘤胃瘺管的青年小尾寒羊，體重30±5 kg。飼喂飼糧精粗比為30∶70，即小麥秸稈700 g/d和精料補(bǔ)充料300 g/d。每天喂料兩次(8:00和16:30)，自由飲水。在早飼前抽取3只瘺管羊的瘤胃液，混合后經(jīng)4層紗布過(guò)濾至預(yù)熱處理過(guò)的收集瓶，置于39℃恒溫水浴箱中保存，連續(xù)通入CO2，待用。

1.3.2 體外培養(yǎng)體系 按Menke和Steingass方法配制人工唾液，A、B、C、D、E各溶液配方及人工唾液配方見(jiàn)表1。

表1 人工唾液配方組成及其配制方法

1.3.3 體外培養(yǎng)程序 準(zhǔn)確稱(chēng)取待測(cè)飼料樣品約200 mg(干物質(zhì)基礎(chǔ))，置于注射器(體外產(chǎn)氣管)中，加入始終用CO2氣體飽和的微生物培養(yǎng)液30 mL，排出注射器中氣體，用膠管和夾子封住注射器前端，記錄下產(chǎn)氣管活塞的初始刻度讀數(shù)(mL)。在39℃恒溫水浴鍋上放上自制72孔有機(jī)玻璃支架，將注射器頭朝下插入支架孔中培養(yǎng)，分別培養(yǎng)各飼料組合和5種飼料原料2、4、6、9、12、24、36、48、72、96 h。每個(gè)飼料組合3個(gè)重復(fù)。每批樣品培養(yǎng)時(shí)做3個(gè)空白樣，記錄注射器位置讀數(shù)(mL)，并記錄培養(yǎng)過(guò)程中空白管以上10個(gè)時(shí)間點(diǎn)的產(chǎn)氣量(gas production,GP)。某時(shí)間點(diǎn)的GP(mL)=該段時(shí)間樣品GP-對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)空白管GP。嚴(yán)格按照程序和記錄操作。

1.4 測(cè)定項(xiàng)目和方法

1.4.1 飼料常規(guī)營(yíng)養(yǎng)水平 常規(guī)法測(cè)定蕎麥秸稈、大豆秸稈、冰草、苜蓿、精料補(bǔ)充料的干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、粗灰分(Ash)，中性洗滌纖維(NDF)含量。

1.4.2 體外GP 測(cè)定2，4，6，9，12，24，36，48，72，96 h的GP。 GPt=200×(Vt-V0) /W 式中，t，發(fā)酵開(kāi)始后的某一時(shí)間(h)；GPt，樣品在t時(shí)刻的產(chǎn)氣量(mL)；Vt，樣品發(fā)酵t小時(shí)后培養(yǎng)管刻度讀數(shù)(mL)；V0，樣品在開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)空白培養(yǎng)管刻度讀數(shù)(mL)；W，樣品干物質(zhì)重(mg)。

1.4.3 產(chǎn)氣參數(shù)計(jì)算 利用'fit curve'軟件(MLP；Lawes Agricultural Trust)，根據(jù)Фrskov和McDonald的產(chǎn)氣模型公式將各種樣品在2，4，6，9，12，24，36，48，72，96 h時(shí)間點(diǎn)的GP代入，計(jì)算消化動(dòng)力參數(shù)。模型公式為：GP= a+b(l-exp-ct) 式中，t，發(fā)酵開(kāi)始后的某一時(shí)間(h)；a，快速產(chǎn)氣部分(mL)；b，緩慢產(chǎn)氣部分(mL)；c，b的產(chǎn)氣速度常數(shù)；a+b，潛在產(chǎn)氣量(mL)。

1.4.4 組合效應(yīng)的估算 組合效應(yīng)=(實(shí)測(cè)值-加權(quán)估算值)×100/加權(quán)估算值，式中，實(shí)測(cè)值為實(shí)際測(cè)定的樣品產(chǎn)氣量(mL)，加權(quán)估算值=某秸稈實(shí)測(cè)值×某秸稈配比(%)+精料補(bǔ)充料實(shí)測(cè)值×精料補(bǔ)充料配比(%)+苜蓿實(shí)測(cè)值×苜蓿配比(%)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件，采用ANOVA對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析，差異顯著時(shí)采用Tukey法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，P>0.05為差異不顯著，0.05

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料營(yíng)養(yǎng)水平及產(chǎn)氣參數(shù)

由表2可見(jiàn)，冰草的粗蛋白質(zhì)含量大于蕎麥秸稈和大豆秸稈。對(duì)于中性洗滌纖維，冰草低于苜蓿，蕎麥秸稈和大豆秸稈高于苜蓿。6種原料的快速產(chǎn)氣部分a值，冰草為正值，其余4種均為負(fù)值，說(shuō)明這4種飼料均不同程度地存在產(chǎn)氣滯后效應(yīng)。

表2 飼料營(yíng)養(yǎng)水平及產(chǎn)氣參數(shù)(風(fēng)干基礎(chǔ))

*各飼料的營(yíng)養(yǎng)水平均為實(shí)測(cè)值。

2.2 各飼糧組合產(chǎn)氣參數(shù)及組合效應(yīng)

由表3可見(jiàn)，蕎麥秸稈各組a、b、c、(a + b)、GP24h、AE均無(wú)顯著差異(P>0.05)。但從產(chǎn)氣參數(shù)b、(a + b)、GP24h、AE結(jié)果均表明，60蕎麥秸稈組AE最優(yōu)(31.55%)，其次是40、30、20組。

表3 蕎麥秸稈補(bǔ)飼苜蓿體外培養(yǎng)后的產(chǎn)氣參數(shù)及24 h產(chǎn)氣量上的組合效應(yīng) mL

同列無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)。下同。

由表4可見(jiàn)，大豆秸稈各組a、b、c、(a + b)、AE均無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組GP24h，70大豆秸稈組顯著大于0組(P<0.05)，70組有大于20組的趨勢(shì)(P=0.090)，50組有大于0組的趨勢(shì)(P=0.083)。因此，大豆秸稈∶苜蓿為10∶60組，AE最優(yōu)。

表4 大豆秸稈補(bǔ)飼苜蓿體外培養(yǎng)后的產(chǎn)氣參數(shù)及24 h產(chǎn)氣量上的組合效應(yīng)

由表5可見(jiàn)，冰草各組a、b、(a + b)、AE均無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組c值，10組極顯著大于70、40組(P<0.01)，顯著大于30、60組(P<0.05)；0組c值顯著大于70組(P<0.05)。各組GP24h，10組極顯著大于40組(P<0.01)，顯著大于50、60、70組(P<0.05)。各組AE，除了50組為-0.65%、0組為1.65%外，其他各組AE分布在32.49%～49.93%。因此，70、60、40、30、20、10冰草組AE均較好，尤以70組最優(yōu)。

表5 冰草補(bǔ)飼苜蓿體外培養(yǎng)后的產(chǎn)氣參數(shù)及24 h產(chǎn)氣量上的組合效應(yīng)

3 討論

本試驗(yàn)中，蕎麥秸稈∶苜蓿以60∶10組AE最優(yōu)。大豆秸稈∶苜蓿為10∶60組AE最優(yōu)。冰草:苜蓿以70∶0、60∶10、40∶30、30∶40、20∶50、10∶60組AE均較好，尤以70∶0組最優(yōu)。表明：冰草與苜蓿配比更易實(shí)現(xiàn)高的AE效果，不加苜蓿，以精料補(bǔ)充料:冰草為30∶70即可獲得高的AE值；蕎麥秸稈效果比冰草稍差，除了70∶0和10∶60組為負(fù)AE外，其他均為正值，尤以60∶10組AE最優(yōu)，表明高比例蕎麥秸稈低比例苜蓿能產(chǎn)生較好的AE；大豆秸稈組，以10∶60組AE最優(yōu)，0∶70組次之，其他各組AE為負(fù)值，表明：大豆秸稈與苜蓿配比不易呈現(xiàn)較好的AE，以低比例大豆秸稈和高比例苜蓿配合AE較好。分析原因主要是冰草的CP含量高于苜蓿、蕎麥秸稈、大豆秸稈，NDF含量低于苜蓿、蕎麥秸稈、大豆秸稈，故70、60、40、30、20、10冰草組AE均較好，尤以70組最優(yōu)。蕎麥秸稈的CP含量高于大豆秸稈，NDF含量低于大豆秸稈，且蕎麥秸稈的b和(a+b)等產(chǎn)氣參數(shù)的值與冰草接近，二者均高于大豆秸稈。故蕎麥秸稈:苜蓿為60∶10組、大豆秸稈:苜蓿為10∶60組AE最優(yōu)。

袁翠林等將花生秧、豆秸、青貯玉米秸分別以0∶100、20∶80、40∶60、60:40、80∶20、100∶0兩兩組合，發(fā)現(xiàn)豆秸與花生秧、青貯玉米秸均以20∶80，花生秧與青貯玉米秸以60∶40時(shí)MFAEI達(dá)到最大。王志軍等對(duì)幾種飼草間AE研究發(fā)現(xiàn)，苜蓿∶沙打旺∶狼尾草為40∶40∶20時(shí)和苜?！蒙炒蛲酶叩げ轂?0∶40∶20時(shí)的組合效應(yīng)綜合指數(shù)(MFAEI)分別為1.13和1.21。孟梅娟等采用體外產(chǎn)氣法將小麥秸與橘子皮、大豆皮、噴漿玉米皮、蘋(píng)果渣分別按0∶100、25∶75、50∶50、75∶25、100∶0組合48 h發(fā)酵發(fā)現(xiàn)，小麥秸與噴漿玉米皮、大豆皮、蘋(píng)果渣、橘子皮的最優(yōu)組合依次是75∶25、75∶25、50∶50、50∶50。張勇等通過(guò)體外產(chǎn)氣法發(fā)現(xiàn)油菜稈∶玉米∶豆粕為55∶30∶15為最優(yōu)組合，瘤胃發(fā)酵效率最高，正AE值最大。孟梅娟等將小麥秸稈與米糠粕按100∶0、75∶25、50∶50、25∶75、0∶100組合發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)氣量AE、干物質(zhì)降解率AE均以75∶25組合最優(yōu)，纖維降解率AE以25∶75組合最優(yōu)。以上研究表明，各種粗飼料需要搭配適量的精料補(bǔ)充料，才能達(dá)到最優(yōu)的AE。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

4 結(jié)論

蕎麥秸稈∶苜蓿為60∶10組AE最優(yōu)；大豆秸稈∶苜蓿為10∶60組AE最優(yōu)；冰草∶苜蓿以70∶0、60∶10、40∶30、30∶40、20∶50、10∶60組AE均較好，尤以70∶0組AE最優(yōu)。

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