麗江市古城區(qū)七河鎮(zhèn)農業(yè)綜合服務中心 674102

和俊芳 李芒種 和云濤 和育文 云南省麗江市古城區(qū)七河鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 674102

七河鎮(zhèn)地處古城區(qū)南部，距古城22km，南與鶴慶縣交界，共有11個村民委員會，總人口為21426人、5079戶，耕地面積18929畝，耕牛3123頭。1954年確定為血吸蟲病流行區(qū)，11個村民委員會中有5個行政村流行血吸蟲病，歷史累計釘螺面積4895畝，累計查出病牛694頭，是古城區(qū)血吸蟲病的重流行區(qū)。

1 家畜（牛）檢測的范圍

七河鎮(zhèn)血吸蟲病流行的行政村包括五峰行政村、三義行政村、七河行政村、新民行政村和共和行政村。

2 病原學診斷（糞便毛蚴孵化法）

（1）材料準備。pH為6.8～7.2無水蟲和無化學物質污染（包括氯氣）的澄清水，否則需作如下處理：有氯氣的自來水應在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水蟲的水加溫至60℃，冷卻后再用?；蛟?0L水中加含30%有效氯的漂白粉350mg，攪勻，放置20h，待氯氣逸盡；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸鈉0.2～0.4g脫氯0.5h后再用。對渾濁的水，于每50L水中加明礬3～5g，充分攪拌，待水澄清后用。

器材、試劑。竹筷、40～80目的銅篩濾杯、260目的尼龍篩兜、500mL量杯、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、水溫計、盆、水缸、水桶、剪刀、鬧鐘、天平、300～500L長頸平底燒瓶或 200～250mL三角燒瓶、脫脂棉。

送糞卡。包括村名、組名、飼養(yǎng)員或畜主姓名、畜別、畜名或畜號、性別、年齡、有無孕、采糞日期。

孵育室 （箱）。室溫低于20℃時需要有設備保持20～25℃的環(huán)境條件，如有溫箱或有取暖設備的房間。

（2）操作方法。采糞和送檢。采糞季節(jié)宜于春秋兩季，其次是夏季，不宜于冬季。采糞最好于清晨從家畜直腸中采取，或新排出的糞便。采糞量為牛、馬屬200g，豬 100g，羊和犬糞（農家）40g，每份糞樣需附上填好的送糞卡，于采糞當天送到檢驗室。

①洗糞和孵化。將每頭家畜的糞便分成3份，每份糞量牛、馬50g，豬 20g，羊、犬 10g，然后根據實際情況選用下列一種方法進一步操作。

②尼龍兜淘洗孵化法。糞便在40目銅篩和量杯中用清水淘洗，細糞渣存于500mL量杯中，待沉淀后去上清液，沉渣倒入尼龍兜用水淘洗，把尼龍兜中的糞渣裝入三角燒瓶或長頸平底燒瓶中加25℃清水，為了便于觀察毛蚴，在瓶頸下1/2處加一塊2～3cm厚的脫脂棉，再加清水至瓶口。

③塑料杯頂管法。置糞于銅篩量杯中加水充分淘洗，棄去糞篩量杯中的上層水，倒去2/3，加25℃清水，蓋上中間有孔的塑料蓋再加滿25℃清水，再將盛滿水的試管口塞一塊2～3cm厚的脫脂棉，倒插入塑料蓋孔中。

④孵育。將上述兩種方法裝好的三角燒瓶、長頸燒瓶或塑料杯放于20～25℃的箱（室）中，在一定的光照（日光或燈光）條件下進行孵育。從孵育開始到1、3、5h后各觀察一次，尾蚴多數在水面下2mm范圍內呈直線運動。發(fā)現血吸蟲毛蚴即判定為陽性。血吸蟲毛蚴肉眼觀察為針尖大小、灰白色、梭形、折光強和水中其他小蟲不同之處是在近水面作水平或斜向直線運動。當用肉眼觀察難與水中的其他小蟲相區(qū)別時，可用滴管將毛蚴吸出，置顯微鏡下可見毛蚴前部寬，前段中間有個頂突，兩側對稱，后漸窄，周身有纖毛則可判為血吸蟲毛蚴。在一個樣品中有1～5個毛蚴為+，6～10個毛蚴為++，11～20個毛蚴為+++，21個毛蚴以上為++++。以判斷、統計血吸蟲病感染的強度。

3 家畜血吸蟲病血清學診斷（間接血凝試驗）

（1）材料準備。器材。V型微孔有機玻璃血凝板（孔底角 90°），25μl定量移液器、滴管、可插針頭的滴管或1～2mL注射器、12號針頭；生理鹽水、蒸餾水；診斷液和陰、陽性血清，按說明書處理和保藏。

（2）操作方法。用滴管滴4滴生理鹽水于血凝板左邊第1孔內，用同一滴管加入被檢血清1滴，使血清成5倍稀釋。用帶12號針頭滴管或移液管在左邊第2、3孔中各加生理鹽水1滴（25μl）。用移液器將第1孔血清混勻，混勻方法是反復吸吹3次，然后吸25μl已混勻液加入右邊鄰孔中，此孔血清成1∶10稀釋。用移液器混勻第2孔血清，吸取25μl加入第3孔中，此時該孔血清成1∶20稀釋。用移液器混勻第3孔血清，吸取25μl丟棄。每份被檢血清和陽、陰性血清按同樣方法用3個孔，也可不用陰性血清而設生理鹽水對照孔，此時另取2個孔各加25μl生理鹽水作空白對照。用帶12號針頭的滴管或移液管加入1∶10、1∶20血清稀釋孔及空白對照孔各1滴診斷液，使診斷液和血清混勻，置20～37℃條件下 1～2h，等空白或陰性血清對照孔中血球全部沉于孔底中央，呈一圓形紅點，且陽性血清兩孔中血球沒有全部沉入孔底中央，即無圓形紅點或僅有很小的圓形紅點即可判定結果。

（3）判定標準。紅血球全部下沉到孔底中央，形成緊密紅色圓點，周緣整齊為陰性（-）；紅血球少量沉于孔底中央，形成一較陰性小的紅色圓點，周圍有少量凝集紅血球為弱陽性（+）；紅血球約半數沉于孔底中央，形成一更小紅色圓點，周圍有一層淡紅色凝集紅血球為陽性（++）；紅血球均勻地分散于孔底，形成一淡紅色薄層為強陽性（+++）。

（4）結果判定。以血清10倍和20倍稀釋孔出現凝集現象時被檢血清判為陽性。如陰性或生理鹽水對照孔2h后紅細胞沉淀圖像不標準，說明生理鹽水質量不合標準或血凝板孔未洗凈，需檢查原因重新操作。

4 檢測結果

5年來對古城區(qū)七河鎮(zhèn)5個血吸蟲病流行行政村的家畜血吸蟲病監(jiān)測工作以村為單位，整村推進，100%檢疫的策略進行，共采集600頭耕牛血進行血檢，均未發(fā)現陽性。共采集6000頭耕牛進行糞檢，均未發(fā)現陽性病牛。

表1 家畜防治及監(jiān)測情況

5 討論

七河鎮(zhèn)于大理洲鶴慶縣耕地交錯分布，交通便利，雙邊經濟貿易互為密切，畜牧交易頻繁，七河鎮(zhèn)5個血吸蟲病流行的行政村都有釘螺殘存點的存在，將使七河鎮(zhèn)面臨著血吸蟲病疫情反彈的潛在威脅。2008年七河鎮(zhèn)達到血吸蟲病傳播阻斷的標準，雖然傳播源被切斷，但是由于受防治技術水平的制約，客觀上存在的包括人畜和野生動物中少量傳染源和殘存釘螺，可能一時難于查出，它們還會逐漸發(fā)展和蔓延，導致疫情回升。在周邊地區(qū)血吸蟲病尚未完全控制和消滅的情況下，病人病畜等外來傳染源和外來釘螺又輸入到已經消滅血吸蟲病地區(qū)的可能性，雖然七河鎮(zhèn)已達到血吸蟲病傳播阻斷的標準，還必須提高警惕，進行長時期的監(jiān)測和鞏固工作。否則，血吸蟲病在一定范圍內有可能將不可避免地再次發(fā)生。

6 存在的問題

（1）經費投入不足。要建立動物防疫經費投入機制，動物防疫、監(jiān)測和治療等經費還沒有列入各級財政預算，特別是受政府主管領導對這項工作重視程度的影響，七河鎮(zhèn)家畜血吸蟲監(jiān)測查治工作時斷時續(xù)。

（2）血防力量薄弱，血吸蟲病查治技術有待進一步提高。我鎮(zhèn)的動物防疫力量特別薄弱，而其他重大動物疫病防治形勢又十分嚴峻，牽制了大量人力、物力。同時因機構改革等原因，各地人員變動頻繁，血防專業(yè)隊伍基本上是線斷、網破、人散，現有血防人員的血吸蟲病查治技術亟待進一步提高。

7 建議

（1）加強領導。進一步鞏固和完善政府統一領導、部門協同配合、群眾積極參與的血防工作機制，做到領導到位、責任到位、投入到位、工作到位。

（2）積極開展血吸蟲病傳播控制達標風險評估。做好家畜血防資料、野糞與家畜感染率調查達標風險評估工作的具體實施、技術指導、業(yè)務培訓、質量控制和資料匯總分析。

（3）加大技術培訓，提高防控水平。當前農業(yè)血防工作任務艱巨，強化機構隊伍建設，充實基層血防力量，開展理論學習和現場操作相結合的培訓，提高農業(yè)血防專干查治技術水平，規(guī)范操作程序，提高實際操作能力，切實做好家畜血吸蟲病查治工作。

（4）要大力推行家畜舍飼圈養(yǎng)。通過改造畜圈、種草養(yǎng)畜或者鼓勵發(fā)展圈養(yǎng)基地等措施，逐步改變疫區(qū)家畜放牧的飼養(yǎng)方式，杜絕患病家畜對有螺環(huán)境的污染。

[1]全國血吸蟲病監(jiān)測點家畜病情監(jiān)測及查病技術.

[2]麗江市古城區(qū)血吸蟲病防治史志.