劉云昊，荊湞豈

（陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712000）

癌癥是目前全世界死亡的主要原因之一，而胃癌是癌癥中一種常見的消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，是第三大腫瘤類型[1]。研究表明，RAP1B的作用機(jī)制已經(jīng)證明與引起血管生成，內(nèi)皮細(xì)胞遷移以及細(xì)胞增殖等有著密切的關(guān)系及影響，RAP1B還可以影響RAS-MAPK通路，使其信號通路的功能受阻[2]。本文針對RAP1B在胃癌中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步了解胃癌的發(fā)生、浸潤以及轉(zhuǎn)移機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般材料

收集陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院以及西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院自2008年1月～2009年12月之間進(jìn)行外科根治手術(shù)并由病理明確診斷為胃癌的患者，收集他們的固體石蠟塊標(biāo)本100例以及30例距胃癌組織5 cm以上的癌旁正常組織。兩組的性別、年齡及腫瘤大小均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 試劑與方法

圖1 RAP1B在胃癌組織中高表達(dá)（①：SP×40、②SP×100、③SP×200）

將患者對應(yīng)的蠟塊放置于冰上進(jìn)行20～30 min的預(yù)冷后，使用輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片（厚度為4～6 um）。按說明書用二甲苯脫蠟2次，梯度酒精水化，檸檬酸微波抗原修復(fù)，山羊血清封閉，滴加使用PBS稀釋的一抗RAP1B（1:200），4℃過夜，第2天常規(guī)二抗孵育，DAB（proteintech生物公司）顯色。

1.3 免疫組化評分

RAP1B的表達(dá)，大部分定位于細(xì)胞質(zhì)，少數(shù)可出現(xiàn)于細(xì)胞核中；免疫組化的染色結(jié)果分別請兩位參加工作年限超過5年的病理科老師進(jìn)行免疫組化的閱片工作，對制作好的片子運(yùn)用免疫反應(yīng)積分打分法（IRS）分別進(jìn)行評分，記平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本文采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。運(yùn)用x2檢驗(yàn)分析。

2 結(jié) 果

2.1 RAP1B在胃癌組織與癌旁組織的表達(dá)

RAP1B主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，少部分也可在細(xì)胞核中表達(dá)（圖1）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示（表1）：在100例胃癌組織中，RAP1B高表達(dá)的病例有72.0例，高表達(dá)率為72%，有28例為低表達(dá)，低表達(dá)率為28.0%。在30例胃癌癌旁正常組織中，高表達(dá)的病例有6例，高表達(dá)率為20.0%。

表1 RAP1B在胃癌組織與癌旁組織的表達(dá) [n（%）]

3 討 論

RAP1B是一種小型的Ras相關(guān)的（Ras-related protein）GTP酶類蛋白，是RAP1的一種亞型[3]，RAP1是Ras樣GTP酶超級家族的進(jìn)化保守蛋白。RAP1通過鳥嘌呤交換因子和GTP酶活化蛋白的作用下在與GTP結(jié)合的活性形式和與GDP結(jié)合的非活性形式之間循環(huán)作用。

RAP1B能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。最早的研究顯示RAP1B具有促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂的生物學(xué)特性，正常的小鼠細(xì)胞在過表達(dá)RAP1B之后細(xì)胞倍增的時(shí)間能夠明顯的被縮短，隨之在裸鼠中發(fā)展成為腫瘤。馬明銘等人在2015年的研究也通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了RAP1B在非小細(xì)胞肺癌的組織中可能發(fā)揮著類似癌基因的功效[4]。近些年的研究表明RAP1B與許多消化系統(tǒng)的腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移也存在密不可分的關(guān)聯(lián)[5]。

[1]Fitzmaurice C,Dicker D,Pain A,et al.The Global Burden of Cancer 2013 Global Burden of Disease Cancer Collaboration [J].Jama the Journal of the American Medical Association,2015,1(4):505-527.

[2]Dow L E,Elsum I A,King C L,et al.Loss of human Scribble cooperates with H-Ras to promote cell invasion through deregulation of MAPK signalling [J].Oncogene,2008,27(46):5988.