于 嬌,胡 曉,楊賢慶,陳勝軍,*

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所,國家水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)中心, 農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州 510300; 2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306)

我國海洋藻類資源豐富,海水養(yǎng)殖面積達(dá)140千公頃,年產(chǎn)量高達(dá)217萬t[1],具有巨大的碳匯潛力[2]和經(jīng)濟(jì)開發(fā)價(jià)值。迄今,雖然部分海藻已實(shí)現(xiàn)工業(yè)化培育、養(yǎng)殖和采收,但海洋藻類仍舊作為初級(jí)產(chǎn)品進(jìn)入銷售市場,高新技術(shù)利用不足,精深加工產(chǎn)品較少,海洋藻類經(jīng)濟(jì)效益有待提升。藻膽蛋白(phycobiliprotein,PBP),作為一種具有良好生理功能和生物活性的海藻提取物,主要存在于紅藻、藍(lán)藻、隱藻和一些甲藻中,可根據(jù)光譜特性的差異分為藻紅蛋白(phycoerythrin,PE)、藻藍(lán)蛋白(phyeocyanin,PC)、別藻藍(lán)蛋白(allphycocyanin,APC)和藻紅藍(lán)蛋白(phycoerythrocyanin,PEC)。其中PE可根據(jù)其光譜特性的細(xì)微差異分為R-PE、C-PE、B-PE,而PC又可分為R-PC和C-PC[3],簡稱前分別冠以C-、B-、R-,這些字母用于表示不同的吸收光譜特性[4]。PBP因具有良好的生理功能和生物活性而用途廣泛,其良好的熒光特性被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)等應(yīng)用領(lǐng)域,其光敏特性可作為光敏劑應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域,其作為一種純天然、無公害的色素還可應(yīng)用于食品、化妝品和染料等工業(yè)領(lǐng)域,其抗氧化、抗炎癥和抗腫瘤等生物活性可作為保健成分應(yīng)用于保健食品和藥品行業(yè)領(lǐng)域。

PBP因具有良好的光學(xué)特性,其純度一般采用最大可見吸收峰波長處的吸光值與280 nm處的吸光值之比(Aλmax/A280)來表示。為了獲取高純度、高活性的PBP,國內(nèi)外研究者們集中于破壁方法和分離純化技術(shù)做了大量的工作。而PBP產(chǎn)品多是來自于純天然海洋生物提取,工業(yè)生產(chǎn)時(shí)常遇到來源于產(chǎn)品得率、產(chǎn)品純度和生產(chǎn)成本的挑戰(zhàn),因此市場上的PBP產(chǎn)品通常價(jià)格高昂,這就限制了其加工生產(chǎn)和推廣利用。為了達(dá)到高純度、低成本的商品化生產(chǎn)要求,PBP的提取與分離純化主要集中于合理搭配多種技術(shù)、縮減操作流程以及規(guī)?；a(chǎn)。本文主要對(duì)PBP的分離純化和應(yīng)用研究予以概述,以期為促進(jìn)海藻的開發(fā)和精深加工提供重要參考。

1 藻膽蛋白的提取

目前,國內(nèi)外提取PC的原料多為螺旋藻,而PE的提取原料多為龍須菜和紫菜。作為一種優(yōu)質(zhì)的胞內(nèi)蛋白,提取PBP的首要步驟是破碎藻體組織細(xì)胞壁。隨著生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展,新型破壁方法如液氮研磨法、酶法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法和多針-板電暈放電技術(shù)提取法等被應(yīng)用到PBP的提取過程中,與傳統(tǒng)破壁方法相比,具有純度高、成本低、穩(wěn)定性和延展性好等優(yōu)勢。

1.1 傳統(tǒng)提取方法

傳統(tǒng)提取方法如水溶液提取法、組織破碎法和反復(fù)凍融法,存在著產(chǎn)品耗時(shí)長、易變性、效率低和能耗高等缺點(diǎn),不利于PBP的推廣和使用。水溶液提取法耗時(shí)長、效率低,不適合規(guī)?；a(chǎn),而且溶液雜質(zhì)的殘留可能會(huì)影響后期的分離純化。趙麗等[5]采用水溶液提取法破碎紅藻藻體組織細(xì)胞壁提取R-PE,提取時(shí)長120 h,純度才達(dá)到0.38。組織破碎法操作簡單、省時(shí),但機(jī)械破碎時(shí)間過長易致使蛋白質(zhì)變性,需做好降溫措施。鄭江等[6]采用組織破碎法破碎紅毛藻組織細(xì)胞,10 min后測得上清液中的PE純度為0.30。反復(fù)凍融法是通過-20 ℃下冷凍,5 ℃下融解后引起冰粒的形成和鹽濃度的增加破碎藻體細(xì)胞,促進(jìn)蛋白的溶出以實(shí)現(xiàn)PBP的提取富集。反復(fù)凍融法雖操作簡單,但其耗時(shí)長,能耗高,應(yīng)用成本較高,只適合實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模生產(chǎn)。鄭蔚然[7]等采用反復(fù)凍融法提取R-PE,凍融6次,每次凍融3 h,R-PE的純度為0.42。

1.2 新型提取方法

1.2.1 液氮研磨法 液氮的溫度為-196 ℃,它不僅能使藻體組織的硬度、脆性增加,易于研磨,還能保護(hù)組織成分不被破壞和降解。通常,先用液氮處理藻體使組織細(xì)胞被完全凍結(jié),再將組織研磨成粉,置于緩沖溶液中解凍,最后高速離心濃縮粗提液[8]。Soni等[8]采用液氮冷凍藻體,研磨至粉末狀,再置于Tris-HCl緩沖液中解凍,提取的C-PC純度達(dá)0.42。與傳統(tǒng)破壁方法相比,液氮研磨法不僅能夠有效維持蛋白質(zhì)的活性,還具有操作簡單、成本低、重復(fù)性和延展性好的優(yōu)勢[9],可用于規(guī)?；扑樵弩w組織細(xì)胞。丙瀟瀟等[10]向瓷研缽中的紅藻壇紫菜粉加入液氮,反復(fù)研磨15 min,并溶于0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液中,離心后測得粗提液中的R-PE的純度為0.38。

1.2.2 酶輔助提取法 海藻細(xì)胞壁的主要成分是具有多糖類結(jié)構(gòu)的纖維素,可利用纖維素酶或果膠酶水解海藻細(xì)胞壁,減少了細(xì)胞壁和細(xì)胞間質(zhì)的傳質(zhì)阻力,有利于PBP高效的流出。趙麗等[5]用纖維素酶提取的R-PE,處理時(shí)長15 h,純度可達(dá)0.37。與傳統(tǒng)的堿提法相比,酶法反應(yīng)條件溫和,而且不易引入雜質(zhì),且能更好的維持蛋白質(zhì)的構(gòu)型、構(gòu)象和光學(xué)特性。施瑛等[11]比較了纖維素酶、果膠酶對(duì)紫菜PE的提取效果,研究發(fā)現(xiàn)纖維素酶和果膠酶的最佳酶配比為7∶3的復(fù)合酶液提取效果更好,得率可達(dá)2.26%,純度可達(dá)1.66。復(fù)合酶比單一酶在藻體組織細(xì)胞壁降解效果上更有優(yōu)勢,為PBP的規(guī)?；a(chǎn)提供了新思路。

1.2.3 超聲波輔助提取法 該法是利用超聲波產(chǎn)生的空穴、熱和機(jī)械效應(yīng)破碎藻體組織細(xì)胞壁,促使細(xì)胞內(nèi)的PBP充分溶解出來。超聲波輔助提取法一般不單獨(dú)使用,僅作為細(xì)胞破壁的輔助手段,通常與水溶液提取法聯(lián)合使用。丙瀟瀟等[10]采用超聲波法破碎法提取紅藻中的R-PE,處理時(shí)長20 min,其純度可達(dá)0.51。與傳統(tǒng)方法相比,超聲波輔助提取法引入的雜質(zhì)少,耗時(shí)短,效率高,但超聲過程中會(huì)產(chǎn)生較多熱量,因此需要及時(shí)降溫,以免藻膽蛋白變性。Benavides等[12]采用超聲輔助提取紫球藻中的B-PE,研究發(fā)現(xiàn)其提取率是水提法的5倍。為了獲得理想的溶解促進(jìn)和傳質(zhì)強(qiáng)化的效果,少數(shù)研究者采用交替雙頻逆流超聲技術(shù)提取蛋白質(zhì)。交替雙頻逆流超聲技術(shù)綜合了交替雙頻超聲技術(shù)與逆流提取技術(shù)的優(yōu)勢,既有交替雙頻超聲模式的促溶效果好、節(jié)能環(huán)保的優(yōu)點(diǎn),又有逆流超聲技術(shù)提取效率高、能量均一的好處。曲文娟等[13]采用交替雙頻逆流超聲輔助提取條斑紫菜蛋白質(zhì),獲得的蛋白得率為24.35%,明顯高于傳統(tǒng)提取方法的蛋白得率7.19%。交替雙頻逆流超聲輔助提取方法較水溶液提取法在生產(chǎn)成本上具有顯著的技術(shù)優(yōu)勢和推廣價(jià)值。

1.2.4 微波輔助提取法 微波輔助提取(microwave-assisted extraction,MAE)是一種新型的蛋白質(zhì)提取技術(shù),比常規(guī)提取方法在純度和提取時(shí)間上具有顯著的技術(shù)優(yōu)勢[14]。為了防止處理時(shí)間過長或溫度過高導(dǎo)致蛋白質(zhì)失活,需要控制好處理暴露持續(xù)時(shí)間和處理溫度。Juin[15]首次采用微波輔助提取紫球藻中的PE,研究發(fā)現(xiàn)40 ℃時(shí)PE具有熱穩(wěn)定性,并于微波照射10 s后獲得PE的純度最高可達(dá)2.2?？紤]到產(chǎn)品純度、延展性和生產(chǎn)成本,微波輔助提取法是一種非常高效的提取方法。

1.2.5 多針-板電暈放電提取法 多針-板電暈放電提取法是一種新型的藻體組織細(xì)胞壁破壁提取方法,通過多余的負(fù)離子與正離子中和放出的巨大的能量使得藻體細(xì)胞壁產(chǎn)生0.4～40 μm大小不等的空洞,從而使藻膽蛋白從空洞溶出,并且等離子體溫度較低,不會(huì)導(dǎo)致熱量過高引起蛋白質(zhì)變性。與常規(guī)提取方法相比,具有操作簡單、效率高、耗時(shí)短、成本低、環(huán)保無污染的技術(shù)優(yōu)勢,多針-板電暈放電提取法是一種非常高效的提取方法。趙麗等[5]采用多針-板電暈放電提取紅藻中的R-PE,并通過與溶脹法、反復(fù)凍融法和CaCl2破碎法相比較,研究發(fā)現(xiàn)僅用3 min就能夠達(dá)到最好的破碎效果,獲得的R-PE純度可達(dá)0.47,而且整個(gè)過程不需要添加任何化學(xué)試劑,不需要提取預(yù)冷,可在室溫下處理。以PE為例,根據(jù)以上文獻(xiàn)總結(jié)不同提取方法的優(yōu)缺點(diǎn),見表1。

表1 PE的不同提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)Table 1 Advantages and disadvantages of different extraction methods of phycoerythrin

1.3 聯(lián)合法

新型提取方法還可與傳統(tǒng)提取方法組合使用,優(yōu)勢互補(bǔ),進(jìn)而實(shí)現(xiàn)高提取率粗提液的規(guī)?；a(chǎn)。目前,常見的組合方式有酶法與水溶液提取法、超聲波輔助提取法與反復(fù)凍融法等。段杉等[16]研究發(fā)現(xiàn)纖維素酶結(jié)合水溶液提取法比水溶液提取法在蛋白質(zhì)提取率上具有更大的優(yōu)勢。白露等[17]采用超聲波輔助提取法與反復(fù)凍融法結(jié)合提取壇紫菜蛋白質(zhì),表明組合法比單一法在提取得率和含量上效果更優(yōu)。

2 藻膽蛋白的分離純化

粗提液中PBP純度低、雜質(zhì)多,需要分離和純化以除去雜蛋白、多糖和其他成分,從而提高PBP純度。國際上PBP產(chǎn)品的純度可劃分為四種級(jí)別:食品級(jí)(Aλmax/A280>0.7)、藥品級(jí)(Aλmax/A280>3.0)、反應(yīng)級(jí)(Aλmax/A280>3.9)和試劑級(jí)(Aλmax/A280>4.0)。蛋白質(zhì)純化的關(guān)鍵是根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的純化技術(shù),并可多種純化技術(shù)組合使用,以縮減操作流程、提高純度和降低成本。新型分離純化方法有利凡諾沉淀法、殼聚糖吸附沉淀法、活性碳吸附沉淀法和雙水相萃取法等。

2.1 傳統(tǒng)的分離純化方法

隨著人們對(duì)PBP的研究逐漸深入以及各種分離純化技術(shù)的不斷出現(xiàn),對(duì)于其分離提純的方法也越來越多。PBP的傳統(tǒng)分離純化方法主要有凝膠層析法、離子交換層析法、羥基磷灰石柱層析法、等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法和超濾法。凝膠層析是最簡單和最溫和的層析技術(shù),可用于藻膽蛋白的脫鹽、分離提純和濃縮,但其生產(chǎn)規(guī)模小,成本較高。Reisf等[18]利用Sephacryl S-100 HR凝膠純化PE,使其純度從0.8提高到3.5。而離子交換層析是最常用的層析方法,具有純化效果好,分析速度快等優(yōu)點(diǎn),但其離子交換層析介質(zhì)成本較高,這就限制了其工業(yè)推廣使用。馮亞非等[19]采用一步羥基磷灰石柱層析法,利用磷酸緩沖液梯度洗脫,后經(jīng)冷凍干燥,得到藥品級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的PE。等電點(diǎn)沉淀法應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)時(shí),不僅易于擴(kuò)展,也不需要復(fù)雜的操作步驟。目前,常用的等電點(diǎn)沉淀介質(zhì)是冰醋酸,Zhu等[20]采用冰醋酸作為等電點(diǎn)沉淀介質(zhì)沉淀PBP,冰醋酸溶液易揮發(fā)分離,簡化了生產(chǎn)工藝。硫酸銨沉淀法是最常用的蛋白質(zhì)沉淀方法,操作簡便,但其最大缺點(diǎn)是耗時(shí)長、蛋白質(zhì)易變性。Sorensen等[21]采用一步、二步硫酸銨沉淀提取C-PC,C-PC的純度提高到0.7和1.1。超濾是一種膜分離技術(shù),不僅能凈化粗提液,濃縮PBP,還可維持其結(jié)構(gòu)特性和光學(xué)特性,具有耗時(shí)短、產(chǎn)量高和純度高的優(yōu)點(diǎn)。

2.2 新型的分離純化方法

2.2.1 利凡諾沉淀法 利凡諾沉淀法是一種用于蛋白質(zhì)的分離純化的新型簡化方法,通過與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物使得蛋白質(zhì)與其他粗提物分離開來。利凡諾試劑可用于沉淀和消除藻類多糖等雜質(zhì),還可使用硫酸銨沉淀使目標(biāo)蛋白與雜蛋白差異分離,可獲得較高純度的目標(biāo)蛋白[22]。與傳統(tǒng)層析法相比,該法避免了透析步驟,簡化了分離純化步驟,具有簡便、成本低和可擴(kuò)展性等優(yōu)點(diǎn)。但試劑的介入帶入了雜質(zhì),可通過進(jìn)一步的凝膠過濾結(jié)合除去雜質(zhì)。Minkova等[23]采用利凡諾試劑對(duì)細(xì)胞提取液四步沉淀處理,上清液中C-PC純度增加至3.9。這種技術(shù)為PBP的分離純化提供了新思路,但該技術(shù)仍需發(fā)展成熟才能投入到工業(yè)化生產(chǎn)中去。

2.2.2 殼聚糖和活性炭吸附沉淀法 殼聚糖對(duì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)具有吸附沉淀的作用,因而可通過調(diào)節(jié)pH使得雜蛋白被吸附沉淀,從而實(shí)現(xiàn)目的蛋白的分離純化。殼聚糖吸附沉淀法不僅能避免繁雜的層析純化步驟,還具有效率高、成本低、產(chǎn)量高和延展性好的優(yōu)勢[3]。而活性炭是一種低成本且接觸面積大的疏水性吸附劑,對(duì)疏水性蛋白質(zhì)具有吸附沉淀的作用,通過吸附雜蛋白并使之沉淀實(shí)現(xiàn)藻膽蛋白的分離純化。廖曉霞等[24]研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖和活性炭結(jié)合使用可使PC純度由0.93提高至2.78,與傳統(tǒng)的鹽析法相比,殼聚糖和活性炭結(jié)合使用具有耗時(shí)短、得率高、條件溫和、縮減操作流程等優(yōu)勢。Gantar等[25]采用活性炭和殼聚糖純化C-PC,研究發(fā)現(xiàn)其純度由2.0增加到3.6。

2.2.3 雙水相萃取法 與傳統(tǒng)層析法相比較,雙水相萃取法具有低溶劑、傳質(zhì)和分相效率高、安全環(huán)保等優(yōu)勢[26]。雙水相萃取法通常作為初步使用,同時(shí)也需要與超濾、層析技術(shù)相結(jié)合使用,提升純度并除去雙水相萃取中的聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和小分子雜質(zhì)。但目前PEG的去除仍有難度,PEG的分子量越大,空間阻力就越大,雙水相體系粘度增加直接加大了分相的難度。Sorensen等[21]采用雙水相萃取法純化提取C-PC,并采用超濾法進(jìn)一步純化,研究發(fā)現(xiàn)C-PC的產(chǎn)量高達(dá)42%,純度高達(dá)4.5。雙水相萃取法不僅可單次使用,還可多次雙水相萃取以制備高純度的藻膽蛋白。Patil等[27]利用雙水相萃取法分離純化從螺旋藻中提取的C-PC,在單次萃取中C-PC的純度分別為3.23,多次萃取后C-PC的純度提高到4.02。目前,聚乙二醇(PEG)/葡聚糖/水是比較常用的雙水相成分,但由于聚合物的價(jià)格昂貴,難以應(yīng)用到PBP規(guī)?；a(chǎn)中去。因此,有待研究開發(fā)新型的相成分以促進(jìn)萃取法在藻膽蛋白工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用。

3 藻膽蛋白的應(yīng)用

3.1 天然色素

由于人工合成色素的毒性作用,人們對(duì)天然色素的需求越來越大[28],因此PBP作為天然、安全的天然色素添加劑備受食品加工業(yè)青睞[29],但其因容易受pH、溫度、光照、礦質(zhì)元素[30]等因素的影響而在應(yīng)用上有所限制。蔣保季等[31]對(duì)天然食用色素PBP進(jìn)行了大、小鼠經(jīng)口LD50,骨髓微核實(shí)驗(yàn),睪丸精母細(xì)胞染色體畸變分析,Ames實(shí)驗(yàn)以及離乳大鼠30 d喂養(yǎng)測定分析,發(fā)現(xiàn)PBP對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無明顯毒性作用,具有廣泛的發(fā)展前景。作為一種天然色素,PBP既可取代人工合成的色素[32],還可人為調(diào)配PE、PC和APC的比例達(dá)到人工染料所不能達(dá)到的效果,當(dāng)其純度大于0.7(食品級(jí))時(shí),可應(yīng)用于食品、化妝品和染料等工業(yè)領(lǐng)域。在歐美、日本等國,PBP廣泛用作食品和化妝品的天然色素,并被制成康復(fù)藥品和保健食品。Santos等[33]利用螺旋藻提取PC,并作為食品中的天然色素應(yīng)用于口香糖、乳制品產(chǎn)品和果凍中。

3.2 保健食品和醫(yī)藥

現(xiàn)代研究表明,PBP有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多種生物學(xué)功能[34],能提高人體免疫力、促進(jìn)血紅細(xì)胞生成、抑制癌細(xì)胞,從而在醫(yī)藥等行業(yè)領(lǐng)域有著非常廣闊的應(yīng)用前景,當(dāng)其純度大于3.0(藥品級(jí))可應(yīng)用于保健食品和醫(yī)藥領(lǐng)域。葉翠芳等[35]研究發(fā)現(xiàn)PBP、多糖、類菌胞素氨基酸等紫菜提取物對(duì)紫外輻射損傷有修復(fù)作用;PR等[36]研究發(fā)現(xiàn)C-PC對(duì)腦缺血損傷有明顯的保護(hù)作用,從而改善運(yùn)動(dòng)功能;Soni等[37]研究發(fā)現(xiàn)C-PE能夠劑量反應(yīng)性地降低CCl4誘發(fā)的毒性;Soni等[38]又發(fā)現(xiàn)了C-PE對(duì)糖尿病并發(fā)癥具有修護(hù)作用。此外,PBP還具有抗氧化、抗輻射和抗炎癥等功能,能有效的修復(fù)氧化損傷和輻射損傷,因此在保健食品行業(yè)具有良好的應(yīng)用前景。Gupta等[39]研究發(fā)現(xiàn)C-PC能夠有效地修復(fù)TBT誘導(dǎo)的氧化損傷;Patel[40]等發(fā)現(xiàn)PC具有良好的羥基和過氧基清除能力;Benedetti等[41]研究發(fā)現(xiàn)微藻中的PC具有抗炎癥和抗氧化的功能。

3.3 熒光探針

PBP是一類新型的熒光探針,與傳統(tǒng)化學(xué)熒光探針相比,具有靈敏度高、保存期長、無毒副作用、易交聯(lián)、選擇性和穩(wěn)定性好等優(yōu)勢,當(dāng)其純度大于4.0(試劑級(jí))時(shí)可應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)等應(yīng)用領(lǐng)域。PBP中可用于熒光探針的有PE、PC和PEC。PE熒光特性穩(wěn)定且量子產(chǎn)率高,是最為常用的熒光探針,而PEC因在藻體的含量極低,研究較少。

3.4 光敏劑

光敏劑于特定波長的激光照射下形成激發(fā)態(tài),而激發(fā)態(tài)的光敏劑通過能量傳遞形成單態(tài)氧,然后通過相鄰的生物大分子的氧化反應(yīng)殺死腫瘤細(xì)胞,從而達(dá)到治療腫瘤的目的。傳統(tǒng)的光敏劑血卟啉在紫外波段吸收較強(qiáng),而在太陽光波段吸收也容易引起較強(qiáng)的光敏反應(yīng),這就要求患者光敏治療后需要避光數(shù)周,盡可能降低毒性反應(yīng)[42]。PBP克服了傳統(tǒng)光敏劑血卟啉易引發(fā)強(qiáng)烈的皮膚光敏毒性的弱點(diǎn),在其峰吸收波長的激光輻照下引發(fā)很強(qiáng)的光敏反應(yīng),而在太陽光的照射下則吸收較弱,相應(yīng)的光敏反應(yīng)也較弱,對(duì)皮膚光敏毒性小,當(dāng)其純度大于3.0(藥品級(jí))時(shí),可應(yīng)用于到醫(yī)學(xué)治療領(lǐng)域,為光敏劑治療腫瘤開啟了新的思路。目前,已有諸多學(xué)者正在做PE、PC和APC作為光敏劑的研究。蔡春爾等[43]用大于120 μg·mL-1的PE介導(dǎo)的激光作用下處理人肝癌BEL-7402細(xì)胞,研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞存活率不到30%。李冠武等[42]研究發(fā)現(xiàn)Photofrin Ⅱ、PE、PC和APC在太陽光照射下的細(xì)胞存活率分別為39%、62%、86%、91%,PE、PC和APC的光敏毒性依次降低,并且均較傳統(tǒng)血卟啉光敏劑的日光光敏毒性弱,可用于開發(fā)成新型光敏藥物。

4 展望

PBP的生物活性和生理功能使其在工業(yè)、輕工業(yè)和醫(yī)療行業(yè)表現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用前景。隨著生物技術(shù)的持續(xù)發(fā)展,PBP的提取與純化的新型工藝已成為了研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。國內(nèi)外學(xué)者基于高收益、高效以及安全環(huán)保的規(guī)?；a(chǎn)做了大量的研究工作,新型方法與傳統(tǒng)方法相比較具有低成本、效率高、擴(kuò)展性好的優(yōu)勢,但其通常也具有產(chǎn)品易變性等缺點(diǎn)。如何將新型方法與傳統(tǒng)方法相聯(lián)合,取其利,避其弊,研究出最適合商品化生產(chǎn)的高純度PBP的提取純化工藝是當(dāng)下要解決的關(guān)鍵技術(shù)問題。

迄今,諸多學(xué)者針對(duì)于PBP的生物活性做了大量工作,并通過體外實(shí)驗(yàn)證明其具有抗氧化、抗腫瘤、提高免疫力等多種生物功能。隨著技術(shù)的飛速發(fā)展和人們保健意識(shí)的提升,PBP的制備工藝會(huì)更加成熟,應(yīng)用前景將更加廣泛,將促進(jìn)其在工業(yè)、輕工業(yè)和醫(yī)療行業(yè)領(lǐng)域的開發(fā)和利用。

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