吳曉燕，王芳，孫倩，高原，楊文

(連云港市第一人民醫(yī)院，江蘇連云港222002)

宮頸癌是常見的且致死率最高的婦科惡性腫瘤，全球每年約有20萬新發(fā)病例和12萬死亡病例[1]，嚴重威脅女性的生命健康。全球宮頸癌患者的5年總生存率低于50%[2]。為了提高宮頸癌的早期診斷率、開展新治療和改善患者預后，臨床上亟需尋找新的宮頸癌相關的靶向分子。微小RNAs(microRNAs)是18～25個核苷酸組成的非編碼RNA，通過調控基因表達，進而參與調節(jié)多種細胞生理過程，如細胞增值、分化、凋亡等[3]。大量研究證實，microRNAs異常表達與多種疾病緊密相關，如炎癥性疾病[4]、惡性腫瘤等[5]。已有研究證實，miR-124在非小細胞肺癌[6]等多種惡性腫瘤中呈低表達狀態(tài)，且與乳腺癌等腫瘤形成和惡性進展相關[7]；miR-124-5p是miR-124家族的一員，在淋巴轉移型胃癌等腫瘤中表達降低[8]，然而關于miR-124、miR-124-5p在宮頸癌中的表達變化及其臨床意義相關研究甚少。本研究觀察了miR-124、miR-124-5p在宮頸癌組織中的表達變化，探討miR-124、miR-124-5p表達變化與宮頸癌臨床病理參數(shù)和預后的關系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2015年12月我院收治的80例宮頸癌患者為觀察組。納入標準：宮頸癌根治術后病理或宮頸癌活檢病理檢查診斷為宮頸癌；未接受放化療；具備完整的病例和隨訪資料等。排除標準：嚴重肝腎等重要器官功能不全；合并全身感染性疾??；合并其他惡性腫瘤。入組患者年齡27～70歲，其中≤50歲者46例，>50歲者34例；有HPV感染患者74例，無HPV感染患者6例 ；病理分級G1級23例，G2級29例，G3級28例；有淋巴結轉移患者32例，無淋巴結轉移患者48例；臨床分期Ⅰ+Ⅱ期患者53例，Ⅲ+Ⅳ期患者27例。選擇同期于我院因子宮肌瘤行全子宮切除且宮頸正常的50例患者為對照組，年齡23～68歲。兩組患者年齡相比，P>0.05。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準，入組者均簽署知情同意書。

1.2 miR-124、miR-124-5p檢測方法 采用實時熒光定量PCR法。取適量(約20～30 mg)組織樣本，Trizol法提取組織總RNA，反轉錄試劑盒將RNA反轉錄為cDNA，參照SYBR Premix ExTaq Ⅱ試劑盒的反應體系和反應條件，進行實時熒光定量PCR。Real-time PCR引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。miR-124正向引物5′-GCTAAGGCACGCGGTG-3′，miR-124反向引物5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；miR-124-5p正向引物5′-CATAGCCCGTGAAACATACACG-3′，miR-124-5p反向引物5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；內參照U6正向引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，U6反向引物5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。采用2-ΔΔCT表示miR-124、miR-124-5p相對表達量。miR-124、miR-124-5p相對表達量低于均值者為低表達。

2 結果

2.1 兩組宮頸組織miR-124、miR-124-5p表達比較 觀察組、對照組宮頸組織miR-124相對表達量分別為0.32±0.06、1.13±0.14，miR-124-5p相對表達量分別為0.41±0.05、1.24±0.29，兩組相比，P均<0.05。

2.2 宮頸癌組織miR-124、miR-124-5p表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關系 以均值為界，觀察組宮頸癌組織中miR-124低表達38例、miR-124-5p低表達40例。宮頸癌組織中miR-124低表達與患者年齡、是否HPV感染和腫瘤病理分級均不相關(P均>0.05)，而與有無淋巴結轉移、TNM分期相關(P均<0.05)。宮頸癌組織中miR-124-5p低表達與患者年齡、是否HPV感染、腫瘤病理分級和TNM分期均不相關(P>0.05)，而與淋巴結轉移相關(P<0.05)。詳見表1。

2.3 宮頸癌組織miR-124、miR-124-5p表達與患者預后的關系 miR-124低表達、高表達宮頸癌患者的術后5年總生存率分別為65.79%(25/38)、88.10%(37/42)，二者術后5年總生存率相比，P<0.05。miR-124-5p低表達、高表達宮頸癌患者的術后5年總生存率分別為65.00%(26/40)、90.00%(36/40)，二者術后5年總生存率相比，P<0.05。

3 討論

microRNAs通過與靶基因信使RNA(mRNA)3′-非編碼區(qū)(3′-UTR)結合，在轉錄后水平調控靶基因表達[9]。microRNAs異常表達與多種疾病關系密切，microRNAs具有作為疾病治療靶向分子的潛能，如miR-34家族成員(miR-34a、miR-34b和miR-34c)是心血管系統(tǒng)疾病的治療靶向分子[10]，miR-625-3p可作為結直腸癌的治療靶向分子[11]，miR-630可作為宮頸癌的治療靶向分子[12]。

表1 宮頸癌組織miR-124、miR-124-5p低表達與患者臨床病理參數(shù)的關系

正常情況下，miR-124在腦組織中表達水平較高，且具有促進神經(jīng)干細胞增殖和分化的功能[13]，此外，有研究證實，miR-124是免疫系統(tǒng)的重要調節(jié)因子[14]。近年來，miR-124與惡性腫瘤的關系引起了較多關注，如miR-124在骨肉瘤中通過抑制Snail 2表達，發(fā)揮抑癌基因功能[15]，miR-124可抑制黑色素瘤細胞增殖和侵襲遷移[16]。本研究結果顯示，宮頸癌組織中miR-124呈低表達狀態(tài)，提示miR-124在宮頸細胞癌變過程中發(fā)揮抑制作用，miR-124低表達促進了宮頸癌腫瘤形成。本研究結果顯示與無淋巴結轉移、Ⅰ期+Ⅱ期宮頸癌相比，宮頸癌組織miR-124在有淋巴結轉移、Ⅲ+Ⅳ期宮頸癌組織中的低表達率更高，提示miR-124可能參與調控了宮頸癌細胞的上皮間質轉化(EMT)、淋巴結轉移過程，且miR-124低表達與宮頸癌患者較差臨床病例特征緊密相關。Li等[17]研究結果證實，miR-124參與調節(jié)肺癌細胞的侵襲遷移過程，Yuan等[18]在宮頸癌中的研究結果表明，miR-124可通過調節(jié)程序死亡蛋白6(PDCD6)表達，抑制細胞侵襲、誘導細胞凋亡，發(fā)揮抑癌基因功能，本研究結果與其一致。Sun等[19]發(fā)現(xiàn)miR-124低表達與胰腺癌患者不良預后相關，本研究發(fā)現(xiàn)miR-124低表達與宮頸癌患者較低術后5年總生率緊密相關，miR-124可作為宮頸癌預后預測的靶分子。

有研究結果表明，miR-124-5p在膠質瘤中低表達，且是通過參與LAMB基因的轉錄后調控，抑制腫瘤生長[20]。目前，關于miR-124-5p與宮頸癌的相關研究甚少，本研究結果顯示，與癌旁正常組織相比，miR-124-5p在宮頸癌組織中的表達水平降低，由此推測，miR-124-5p可能具有抑制宮頸癌發(fā)生的作用，miR-124-5p低表達是宮頸癌腫瘤發(fā)生的誘因之一。此外，本研究發(fā)現(xiàn)miR-124-5p表達與宮頸癌腫瘤分期呈負相關，提示檢測宮頸癌患者手術前的宮頸活檢組織中miR-124-5p表達水平，有助于臨床醫(yī)師評估患者病情，進而采取相應的治療措施改善患者預后。Takafumi等[21]發(fā)現(xiàn)，miR-124-5p在結直腸癌組織中呈低表達，且與腫瘤淋巴結轉移呈負相關，與本研究結果相一致。本研究結果顯示，miR-124-5p表達水平與宮頸癌患者預后有關，宮頸組織miR-124-5p表達水平越高，患者的預后越好，與Takafumi等[21]的研究結果相似，進一步提示了檢測宮頸癌患者腫瘤組織miR-124-5p表達水平的臨床意義。

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