袁曉峰 ，俞銀江，趙 博，邵焱焱 ，曾獻(xiàn)存

（1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.新疆塔城165團(tuán)畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔城 834609）

作為下丘腦分泌的一種多肽類(lèi)物質(zhì)，生長(zhǎng)激素釋放激素 （GHRH）能正向調(diào)控垂體生長(zhǎng)激素（GH）的合成與分泌，從而調(diào)控動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[1]。在草食家畜GHRH基因的研究方面，有關(guān)牛GHRH基因的多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析的研究相對(duì)較多[2-4]，而在綿羊上的研究相對(duì)較少。王金玲等[5]克隆了草地藏系綿羊生長(zhǎng)激素釋放激素基因部分cDNA，并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。馬志杰等[6]利用HaeⅢ內(nèi)切酶分析了歐拉型藏羊GHRH基因內(nèi)含子2部分序列的多態(tài)性。生長(zhǎng)性狀是衡量畜牧生產(chǎn)效益的重要經(jīng)濟(jì)性狀。近年來(lái)，利用引進(jìn)的優(yōu)良肉羊品種對(duì)新疆地方綿羊品種進(jìn)行雜交改良已逐漸成為該地區(qū)肉羊養(yǎng)殖業(yè)提高養(yǎng)殖效率和提升養(yǎng)殖效益的重要途徑。該研究以薩?？搜蚺c哈薩克羊雜交母羊（以下簡(jiǎn)稱(chēng)薩×哈雜交母羊）為研究對(duì)象，對(duì)GHRH基因的rs400079090和rs419322328位點(diǎn)多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，以確定2個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)薩×哈雜交母羊生長(zhǎng)性狀的影響，旨在尋找能夠應(yīng)用于綿羊雜交后代生長(zhǎng)性狀標(biāo)記輔助選擇的SNP，以期加快新疆地方肉用綿羊品種的雜交改良進(jìn)展。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

血樣采自新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)農(nóng)九師165團(tuán)養(yǎng)殖的薩×哈雜交成年母羊（n=180），所有羊只在相同環(huán)境下飼養(yǎng)。采用血液基因組DNA提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司）提取雜交羊的血液基因組DNA，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 生長(zhǎng)性狀指標(biāo)測(cè)定：利用常規(guī)方法對(duì)雜交羊的生長(zhǎng)性狀指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定的指標(biāo)包括體斜長(zhǎng)、體高、胸圍、胸寬和臀寬。

1.2.2GHRH基因SNP檢測(cè)：提取的血液基因組DNA送康普森公司進(jìn)行MassARRAYSNP檢測(cè)。經(jīng)核酸蛋白分析儀及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)符合要求的基因組DNA，調(diào)整基因組DNA濃度大于50 ng/mL。根據(jù)SNP位點(diǎn)序列信息，使用Sequenom公司的引物設(shè)計(jì)軟件Assay design 3.1設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)和單堿基擴(kuò)展引物 （見(jiàn)表1），進(jìn)行rs400079090和rs419322328位點(diǎn)的基因分型檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2個(gè)SNP位點(diǎn)的分型數(shù)據(jù)和生長(zhǎng)性狀數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)分析采用SPSS 17.0軟件中的一般線性模型方法[7]：Y=μ+基因型+隨機(jī)誤差，其中，Y 為性狀觀察值，μ為平均數(shù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。利用Excel軟件計(jì)算等位基因頻率、基因型頻率、群體雜合度（He）、多態(tài)信息含量（PIC），并進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 群體遺傳參數(shù)

2個(gè)SNP的基因型頻率、等位基因頻率及部分遺傳特征參數(shù)見(jiàn)表2。由表2可知，rs400079090位點(diǎn)檢測(cè)到3個(gè)基因型，rs419322328位點(diǎn)TT基因型缺失。群體雜合度（He）和多態(tài)信息含量（PIC）是評(píng)價(jià)群體內(nèi)遺傳多樣性的重要指標(biāo)，薩×哈雜交母羊的rs400079090和rs419322328位點(diǎn)屬于中度多態(tài)（0.25＜PIC＜0.5）。 rs400079090 偏離哈代—溫伯格平衡（P＜0.05），rs419322328 符合哈代—溫伯格平衡（P＞0.05）。

表1 GHRH基因2個(gè)SNP位點(diǎn)的引物信息

表2 GHRH基因2個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型頻率、等位基因頻率及遺傳特征參數(shù)

表3 rs419322328位點(diǎn)不同基因型對(duì)薩×哈雜交母羊生長(zhǎng)性狀的影響

2.2 關(guān)聯(lián)分析

對(duì)薩×哈雜交母羊GHRH基因2個(gè)SNP位點(diǎn)的不同基因型與5個(gè)生長(zhǎng)性狀指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，rs419322328位點(diǎn)不同基因型對(duì)體斜長(zhǎng)、胸寬有顯著影響：GG基因型個(gè)體的體斜長(zhǎng)極顯著小于GT基因型個(gè)體 （P＜0.01），胸寬顯著大于GT基因型個(gè)體 （P＜0.05）。rs400079090位點(diǎn)不同基因型對(duì)薩×哈雜交母羊生長(zhǎng)性狀影響不顯著（數(shù)據(jù)略）。

3 討論

作為垂體生長(zhǎng)激素的正向調(diào)控因子，GHRH基因在調(diào)控動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要作用。程穩(wěn)中等[8]研究表明，通過(guò)肌肉注射GHRH表達(dá)質(zhì)粒能提高羊的生長(zhǎng)速度、促進(jìn)體重增加，這與Meng等[9]的研究結(jié)果相一致。該研究首次對(duì)薩×哈雜交母羊GHRH基因的rs400079090和rs419322328位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行研究，這2個(gè)SNP位點(diǎn)位于GHRH基因5′UTR區(qū)域。成年雜交母羊生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，rs419322328位點(diǎn)GG基因型個(gè)體胸寬顯著大于GT基因型個(gè)體 （P＜0.05），但是體斜長(zhǎng)極顯著小于GT基因型個(gè)體（P＜0.01），這可能與雜交優(yōu)勢(shì)或試驗(yàn)樣本數(shù)較少有關(guān)。研究結(jié)果為將rs400079090和rs419322328位點(diǎn)應(yīng)用于綿羊雜交后代生長(zhǎng)性狀標(biāo)記輔助選擇奠定了基礎(chǔ)，在后續(xù)的研究中需要進(jìn)一步擴(kuò)大GHRH基因SNP選擇范圍，擴(kuò)大試驗(yàn)樣本數(shù)量，并在回交群體中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

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