曹力凡，毋柳柳，孟　麗

（河南科技學(xué)院生命科技學(xué)院　453003）

杏鮑菇含有較高的營(yíng)養(yǎng)，其中包含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及鈣、鎂、銅、鋅等礦物質(zhì)成分，不僅可以提高人體對(duì)外界的免疫功能，而且對(duì)人體具有抗癌、降血脂、潤(rùn)腸胃以及美容等多種作用[1]。杏鮑菇菌肉肥厚，質(zhì)地脆嫩，特別是菌柄組織致密、結(jié)實(shí)、乳白，可全部食用，且菌柄比菌蓋更脆滑、爽口，被稱為“平菇王”、“干貝菇”[2]。并且具有杏仁香味和如鮑魚的口感，適合保鮮、加工，深得廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)。杏鮑菇是近幾年來(lái)開發(fā)并栽培成功的集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌新品種[3]。通過(guò)對(duì)杏鮑菇進(jìn)行母種組織塊分離試驗(yàn)，采用了胡蘿卜、香菇根培養(yǎng)基配方進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，目的是選擇出適合杏鮑菇母種分離和菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基[4]，以保證該培養(yǎng)基在菌種純化、菌種生產(chǎn)、菌種保藏及其它領(lǐng)域的科學(xué)應(yīng)用[5]。

1　試驗(yàn)材料

1.1　供試菌株

杏鮑菇3號(hào),經(jīng)組織分離獲得母種；由河南科技學(xué)院食用菌實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2　供試材料

馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂條、胡蘿卜、香菇根。

1.3　試驗(yàn)器材

準(zhǔn)備階段工具：恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、電磁爐、三角瓶、棉塞、75%酒精。接種工具：接種鏟、培養(yǎng)皿、酒精燈、封口膜、酒精棉。[1]

2　試驗(yàn)方法

2.1　試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)主要研究在杏鮑菇的培養(yǎng)中，不同添加物對(duì)其生長(zhǎng)的影響。在培養(yǎng)基配制過(guò)程中，培養(yǎng)基中添加胡蘿卜的A組，添加香菇根的B組以及只有培養(yǎng)基的對(duì)照組。接種后，放在適宜的條件下培養(yǎng)，保持溫度、光照和濕度等外界條件相同。每天觀察1次，測(cè)量并記錄菌絲的生長(zhǎng)量。

2.2　培養(yǎng)基配制

馬鈴薯（PDA）培養(yǎng)基：1000mL水，250g馬鈴薯，20g葡萄糖，20g瓊脂。準(zhǔn)確稱量所需要的物質(zhì)，先加水把瓊脂熬成液體再加入其他物質(zhì)。在PDA培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上分別加入 20g、40g、60g、80g 和 100g 的胡蘿卜和香菇根[6]，其他物質(zhì)保持一致，配制好的培養(yǎng)基要及時(shí)塞上棉塞。分裝后做好標(biāo)記，等待滅菌。

2.3　接種與滅菌[7-8]

2.3.1倒平板。把滅過(guò)菌的培養(yǎng)基放入無(wú)菌操作臺(tái)，無(wú)菌操作臺(tái)提前用紫外燈照射30min。然后打開風(fēng)扇和白熾燈，把滅過(guò)菌的培養(yǎng)基分成10份把熬制好的胡蘿卜汁和香菇根汁按一定的比例分別加入10份培養(yǎng)基中，用玻璃棒攪勻。然后把滅過(guò)菌的平板打開，依次把攪拌好的每個(gè)培養(yǎng)基倒在6個(gè)重復(fù)的平板上，并給每組平板貼上標(biāo)簽。然后把倒過(guò)的平板依次放好等待其凝固，并把超凈臺(tái)打掃干凈。把接種所需要的工具放入超凈臺(tái)內(nèi)，最后把燈和風(fēng)扇關(guān)掉——把紫外燈再打開殺菌。

2.3.2接種。接種前準(zhǔn)備，把培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)菌株、接種工具放在超凈工作臺(tái)上，打開紫外燈照射25min，然后通風(fēng)5min。接種前要帶上塑料手套并按規(guī)定消毒。把酒精燈點(diǎn)燃，用接種鏟把菌種分割成0.1cm2的小塊。右手拿接種鏟挑去1塊，左手拿培養(yǎng)皿在酒精燈火焰上方進(jìn)行接種。接種時(shí)菌種帶的培養(yǎng)基不要過(guò)厚，接種前接種鏟要在火焰上灼燒等接種鏟冷卻后，每進(jìn)行挑取菌種，以免接種鏟溫度過(guò)高燙死菌種。接種過(guò)的培養(yǎng)皿要用封口膜進(jìn)行封口，以免染菌。

2.3.3采用高壓滅菌鍋滅菌。把準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿放入滅菌筐中，把滅菌筐放入滅菌鍋中，在放入之前先觀察滅菌鍋的水位是否處于高水位狀態(tài)，如果不是高水位要往里面加水，不然容易損壞滅菌鍋。在確保有水情況下蓋好蓋子，設(shè)置溫度為121℃，設(shè)置時(shí)間為20 min。讓滅菌鍋開始工作，排氣閥先不要關(guān)閉，等溫度上升到100℃時(shí)再進(jìn)行關(guān)閉，這樣才能把鍋內(nèi)的冷空氣排凈，不會(huì)造成滅菌不徹底。如果不排除鍋內(nèi)冷空氣或排除不徹底就會(huì)造成假壓，也就是壓強(qiáng)上去了可溫度卻上不去，這樣就達(dá)不到滅菌的目的。滅菌完成后要打開排氣閥門，使里面的蒸汽排盡后，壓力表的指數(shù)為零時(shí)再打開鍋蓋。打開鍋蓋時(shí)一定要用濕抹布?jí)|手，以免被高溫的鍋蓋燙傷。接種完畢以后放在恒溫培養(yǎng)箱里（25℃）培養(yǎng)。

2.3.4培養(yǎng)并隔天進(jìn)行記錄數(shù)據(jù)。把接種過(guò)的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并每隔1天記錄1次數(shù)據(jù)。把培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱中取出，取出之前要用75%的酒精擦拭雙手進(jìn)行消毒（以減少培養(yǎng)基染菌的機(jī)率）。然后再取出要測(cè)量的培養(yǎng)基，觀察菌絲的生長(zhǎng)情況，并用記號(hào)筆對(duì)菌絲往外擴(kuò)增的距離做1個(gè)記號(hào)。以接種點(diǎn)為圓心用直尺測(cè)量出接種點(diǎn)到標(biāo)記點(diǎn)之間的距離，并用簽字筆記錄下數(shù)據(jù)。依照此方法依次測(cè)量每個(gè)培養(yǎng)基菌絲的生長(zhǎng)距離并進(jìn)行記錄。

3　結(jié)果與分析

3.1　胡蘿卜生長(zhǎng)期間各時(shí)期污染數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析

胡蘿卜分別加入 20g、40g、60g、80g 和 100g 與對(duì)照感染數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)情況，每1個(gè)有8個(gè)重復(fù)，如下：

表1　胡蘿卜生長(zhǎng)期間各時(shí)期污染數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)　單位：個(gè)

3.2　胡蘿卜對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

表2　胡蘿卜含量梯度增加杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)情況　單位：cm

圖1　胡蘿卜含量梯度增加杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)情況

如表1、圖1所示，培養(yǎng)基中胡蘿卜對(duì)母種菌絲生長(zhǎng)的影響，每1個(gè)含量設(shè)置8個(gè)重復(fù)。胡蘿卜20g的時(shí)候，與CK相比，CK菌絲長(zhǎng)勢(shì)在12月30日之前明顯發(fā)育比胡蘿卜快，在12月30日差距不太明顯，且菌絲潔白、濃密、長(zhǎng)勢(shì)良好，邊緣整齊無(wú)感染；胡蘿卜40g時(shí)，與CK長(zhǎng)勢(shì)相比，CK菌絲長(zhǎng)勢(shì)依然比胡蘿卜快，但相較于胡蘿卜20g時(shí)，差距有所減小，且菌絲濃白，長(zhǎng)勢(shì)良好，但出現(xiàn)一個(gè)感染；胡蘿卜60g時(shí)，與40g基本相似，但出現(xiàn)2個(gè)感染；胡蘿卜含量在80g時(shí)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)好于CK，且菌絲濃白，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，邊緣整齊，出現(xiàn)感染2個(gè)；胡蘿卜含量在100g時(shí)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)與CK基本重合，且感染率加大，出現(xiàn)3個(gè)感染。由此得出：胡蘿卜菌絲長(zhǎng)勢(shì)由大到小排列為80g＞100g＞CK＞60g＞40g＞20g，其感染情況由多到少為100g＞80g=60g＞40g＞20g。綜合菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)可以看出,杏鮑菇原種菌絲生長(zhǎng)最適是胡蘿卜含量80g最為適宜。說(shuō)明低濃度含量的加入不能滿足杏鮑菇對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，所以，沒(méi)有CK長(zhǎng)得快，但隨著含量的加大，其整體生長(zhǎng)呈現(xiàn)優(yōu)勢(shì)，超越CK生長(zhǎng)勢(shì)，但當(dāng)達(dá)到一定值時(shí)，生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)又呈現(xiàn)下滑趨勢(shì)，雖然沒(méi)有低于CK，但基本持平。綜上所述，胡蘿卜含量在80g最適宜杏鮑菇生長(zhǎng)。

3.3　香菇根生長(zhǎng)期間各時(shí)期污染數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析

從表3可知：香菇根感染率高，同時(shí)，必須做好酒精消毒，同樣，含量低不易感染，含量高易感染。實(shí)驗(yàn)情況感染率高，意味著生產(chǎn)使用中更容易感染。香菇根感染以青霉、綠霉、細(xì)菌為主，有的甚至3種情況都有。

3.4　香菇根對(duì)杏鮑菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響

表3　香菇根生長(zhǎng)期間各時(shí)期污染數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)　單位：個(gè)

培養(yǎng)基中添加不同香菇根含量對(duì)母種菌絲的影響，每1個(gè)含量設(shè)置8個(gè)重復(fù)。香菇根含量在20g時(shí)，其長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)度略低于CK，菌絲潔白、濃密、長(zhǎng)勢(shì)良好，出現(xiàn)1個(gè)感染；香菇根含量在40g時(shí)，香菇根長(zhǎng)勢(shì)明顯低于CK，但菌絲潔白、邊緣整齊，最終出現(xiàn)3個(gè)感染；香菇根含量在60g時(shí)，香菇根長(zhǎng)勢(shì)雖然沒(méi)有CK長(zhǎng)勢(shì)好，

表4　香菇根含量梯度增加杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)情況　單位：cm

但是，相較于香菇根含量在40g時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)較好，出現(xiàn)3個(gè)感染；香菇根含量在80g時(shí)，香菇根長(zhǎng)勢(shì)依舊沒(méi)有CK長(zhǎng)勢(shì)好，但菌絲潔白、濃密、長(zhǎng)勢(shì)良好、邊緣整齊，出現(xiàn)3個(gè)感染；香菇根含量在100g時(shí)，香菇根長(zhǎng)勢(shì)相較于香菇根含量80g時(shí)，差距有所縮小，但感染數(shù)量達(dá)到5個(gè)。由此得出:香菇根菌絲長(zhǎng)勢(shì)由大到小排列為CK＞20g＞100g＞80g＞60g＞40g，其感染情況由多到少為：100g＞80g=60g=40g＞20g。綜合菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)可以看出,杏鮑菇原種菌絲生長(zhǎng)最適為對(duì)照CK。香菇根加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其整體生長(zhǎng)情況長(zhǎng)勢(shì)不如CK，但隨著含量的增大，其差距逐漸縮小，但其感染率卻增加了。所以，繼續(xù)增加其含量，不能采用。

4　小結(jié)與討論

4.1　胡蘿卜、香菇根含量越大越容易感染

試驗(yàn)結(jié)果表明，香菇根不適于采用，其感染率高，并且長(zhǎng)勢(shì)無(wú)CK長(zhǎng)勢(shì)好；胡蘿卜含量在80g最適于杏鮑菇生長(zhǎng)，且長(zhǎng)勢(shì)比CK好，感染率低，而胡蘿卜相較于香菇根長(zhǎng)勢(shì)快，提前3d長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿。

實(shí)踐表明，杏鮑菇生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求比較嚴(yán)格，對(duì)不同材料、含量要求各不相同，而且菌絲生長(zhǎng)速度快長(zhǎng)勢(shì)好，并不一定獲得高產(chǎn)，但菌絲生長(zhǎng)良好是食用菌獲得高產(chǎn)的基礎(chǔ)。所以，必須考慮其長(zhǎng)勢(shì)及感染率。期間，對(duì)杏鮑菇母種菌絲的管理極為關(guān)鍵，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)不正常現(xiàn)象，及時(shí)處理。

4.2　胡蘿卜80g對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)明顯

胡蘿卜菌絲長(zhǎng)勢(shì)由大到小排列為80g＞100g＞CK＞60g＞40g＞20g，綜合菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)可以看出,杏鮑菇原種菌絲生長(zhǎng)最適為胡蘿卜含量為80g最為適宜。說(shuō)明低濃度含量的加入不能滿足杏鮑菇對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，所以沒(méi)有CK長(zhǎng)的快，但隨著含量的加大，其整體生長(zhǎng)呈現(xiàn)優(yōu)勢(shì)，超越CK生長(zhǎng)勢(shì)，但當(dāng)達(dá)到一定值時(shí)，生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)又呈現(xiàn)下滑趨勢(shì)，雖然沒(méi)有低于CK，但基本持平。說(shuō)明含量達(dá)到飽和，綜上所述，胡蘿卜含量在80g最適宜杏鮑菇生長(zhǎng)。

4.3　香菇根對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)不明顯

香菇根菌絲長(zhǎng)勢(shì)由大到小排列為CK＞20g＞100g＞80g＞60g＞40g，綜合菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)可以看出，杏鮑菇原種菌絲生長(zhǎng)最適為CK。香菇根加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其整體生長(zhǎng)情況長(zhǎng)勢(shì)不如CK長(zhǎng)勢(shì)好。即得出：香菇根對(duì)杏鮑菇的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)弱。

圖2　香菇根含量梯度增加杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)情況