劉 虹 ，李素玲 ，董淑英 ，楊 杰 ，許 晶 ，郭福貴

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西太原 030031；2.忻州市科技局，山西忻州 034000；3.寧武縣農(nóng)業(yè)委員會(huì)，山西寧武 036700）

白水皮是山西管涔山地區(qū)出產(chǎn)的一種白色、個(gè)體較小的特產(chǎn)蘑菇，每年夏、秋2季在華北云杉（Picea wilsonii Mast）和華北落葉松（紅杄）（Larix principis-rupprechtii Mayr）林內(nèi)草地上生長，散生或群生，有時(shí)形成蘑菇圈，當(dāng)?shù)匕傩詹墒巢⒆鳛橥撂禺a(chǎn)品出售已有數(shù)百年的歷史。當(dāng)?shù)匕傩胀ǔ０压襟w肥大、香味濃郁的野蘑菇叫銀盤，而將菌肉較薄、香味較淡的種類叫水皮，白水皮即是當(dāng)?shù)囟喾N水皮蘑菇之一。2017年秋季，當(dāng)?shù)匕傩盏仡^出售鮮品價(jià)格約每千克20元人民幣左右，是價(jià)格較低的當(dāng)?shù)匾吧秤镁弧?/p>

由于白水皮在當(dāng)?shù)胤植己軓V，出產(chǎn)周期長（從夏季入伏到秋季均產(chǎn)），而且產(chǎn)量較大，因而被廣泛采收，是當(dāng)?shù)匾吧秤镁畛Ｒ姷钠贩N之一。在此之前的相關(guān)文獻(xiàn)中[1-10]，沒有發(fā)現(xiàn)確切的山西管涔山白水皮蘑菇對(duì)應(yīng)的學(xué)術(shù)名稱。

本研究首次采用ITS-DNA分子方法，對(duì)2017年采自山西管涔山林區(qū)的白水皮蘑菇進(jìn)行了鑒定分析，結(jié)合子實(shí)體形態(tài)特征分析，確認(rèn)其科學(xué)名稱為落葉杯傘（Clitocybe phyllophila（Pers.）Kumm.），該研究結(jié)果將為山西省野生食用菌資源的研究和開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

本研究依據(jù)的擔(dān)子果樣本于2017年7—8月采自山西省中北部管涔山一帶的華北落葉松（Larix principis-rupprechtii Mayr） 和 華 北 云 杉（Picea wilsonii Mast）林中草地上，其具體樣本信息列于表1。新鮮的擔(dān)子果標(biāo)本經(jīng)45℃烘干后保存于山西農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所和首都師范大學(xué)標(biāo)本館（BJTC）。

表1 研究用白水皮蘑菇樣本信息

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)方法 對(duì)擔(dān)子果的宏觀特征在手持放大鏡和體視顯微鏡下進(jìn)行觀察和描述，主要包括擔(dān)子果的形狀、大小、顏色、菌褶及菌柄特征等。

擔(dān)子果顯微結(jié)構(gòu)特征觀察在山西省農(nóng)科院食用菌研究所微生物實(shí)驗(yàn)室光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行。首先采用手術(shù)刀進(jìn)行徒手切片，以蒸餾水、3%KOH作為浮載劑制作水封片。用棉蘭（cotton blue）和梅氏試劑（Melzer）檢驗(yàn)擔(dān)孢子壁有無喜蘭和淀粉質(zhì)反應(yīng)。

1.2.2 分子方法 DNA分子研究在北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。用于本研究的樣本DNA提取、PCR以及測序方法等完全采用FAN等[11-12]研究塊菌屬物種所使用的方法。其他用于本研究比對(duì)的DNA序列下載自NCBI數(shù)據(jù)庫，本研究成功提取和測序的nrDNA-ITS序列采用BLAST軟件在NCBI上進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果中相似性高于97%的序列用于本研究分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA-ITS比對(duì)結(jié)果

表2 白水皮蘑菇樣本間ITS比對(duì)結(jié)果（BLAST） %

表3 白水皮蘑菇樣本（LH0702）ITS在NCBI上BLAST結(jié)果

本研究選用2017年7—8月間由作者及團(tuán)隊(duì)成員采自管涔山的樣本4份用于提取和測序ITS-DNA片段。將上述結(jié)果在NCBI上用BLAST工具比對(duì)，結(jié)果列于表2，3。

從表2可以看出，本研究4份樣本之間ITS相似性均高于99%，可以確認(rèn)這4份樣本屬于同一分類學(xué)物種。

2.2 分類學(xué)結(jié)果

依據(jù)采自管涔山地區(qū)4份樣本的形態(tài)學(xué)特征觀察，結(jié)合上述ITS分子比對(duì)結(jié)果，將這些樣本定名為落葉杯傘。以下描述依據(jù)本次自行采集的、產(chǎn)于山西省呂梁山脈北部管涔山段的樣本。

落葉杯傘為 Clitocybe phyllophila（Pers.）P.Kumm.，F(xiàn)ühr.Pilzk.（Zerbst）：122（1871）；其同物異名 有 ：Agaricus phyllophilus Pers.，Syn.meth.fung.（G?ttingen）2：457（1801）；Agaricus phyllophilus var.fuliginatus Pers.，Mycol.eur. （Erlanga）3：72（1828）；Clitocybe phyllophila f. difformis（Schumach.）Raithelh.，Metrodiana 1（1）：13（1970）；Omphalia phyllophila（Pers.）Quél.，Enchir.fung.（Paris）：22（1886）var.phyllophila；Omphalia phyllophila var.pithyophila（Secr.ex Fr.）Quél.，Enchir.fung.（Paris）：22（1886）；Omphalia phyllophila （Pers.） Quél.，Enchir.fung.（Paris）：22（1886）；Lepista phyllophila（Pers.） Harmaja，Karstenia 15：15 （1976）；Clitocybe phyllophila var.pseudonebularis （Raithelh.）Raithelh.，Metrodiana 1 （1）：12 （1970）；Clitocybe phyllophila var.tenuis Harmaja，Karstenia 10：88 （1969）；Clitocybe phyllophila var.fusispora Raithelh.，Metrodiana 1（1）：11（1970）；Clitocybe phyllophila f.sericea Raithelh.，Metrodiana 1（1）：13（1970）；Agaricus cerussatus Fr.，Syst.mycol.（Lundae）1：92（1821）；Agaricus cerussatus var.difformis（Schumach.）Fr.，Syst.mycol.（Lundae）1：93 （1821）；Clitocybe cerussata （Fr.） P.Kumm.，F(xiàn)ühr.Pilzk. （Zerbst）：122（1871）；Clitocybe cerussata var.difformis （Schumach.）P.Karst.，Bidr.K?nn.Finl.Nat.Folk 32：64（1879）；Clitocybe cerussata var.pithyophila（Fr.）J.E.Lange,Fl.Agaric.Danic.1：79 （1935）；Omphalia cerussata （Fr.） Quél.，Enchir.fung.（Paris）：22（1886）；Agaricus cerussatus var.obtextus（Lasch）Fr.，Epicr.syst.mycol.（Upsaliae）：62 （1838）；Omphalia cerussatavar.obtexta（Lasch）Quél.，Enchir.fung. （Paris）：22（1886）；A－garicus difformis Schumach.,Enum.pl.（Kjbenhavn）2：335 （1803）；Clitocybe difformis （Schumach.）Sacc.，Syll.fung.（Abellini） 5：154（1887）；Agaricus dilatatus Pers.，Mycol.eur. （Erlanga）3：115（1828）；Clitocybe dilatata P.Karst.，Hedwigia 28：363（1889）；Agaricus monstrosus Sowerby，Col.fig.Engl.Fung.Mushr.（London）3：tab.283（1800）；Clitocybe monstrosa Cooke，F(xiàn)orsch.PflKr.，Tokyo：53（1883）；Agaricus obtextus Lasch，Linnaea 3：378（1828）；Clitocybe obtexta （Lasch）Sacc.，Syll.fung. （Abellini）5：154（1887）；Agaricus pithyophilus Fr.，Epicr.syst.mycol.（Upsaliae）：62 （1838）；Clitocybe pithyophila（Fr.）Gillet，Hyménomycètes（Alen?on）：152（1874）

2.3 形態(tài)學(xué)結(jié)果

擔(dān)子果為小到中型（圖1），菌蓋初期扁半球形，光滑，無毛，邊緣稍內(nèi)卷，后漸平展，中部平或稍下凹，邊緣整齊，老熟后或稍波浪狀，無條紋，干燥，純白色，中央部位顏色有時(shí)有點(diǎn)非常淡的淺黃褐色，直徑2～6 cm；菌肉白色，較?。痪薨咨?，干后肉褐色或米褐色，不等長，較密，直生或近延生；菌柄較細(xì)，圓柱狀或向下漸漸變細(xì)，2～8 cm長，0.3～0.8 cm粗，白色，常常水漬狀，表面近平滑，常見白底色和水漬色相間形成的縱向條紋，初期中實(shí)，后中空；擔(dān)孢子橢圓形，5～7 μm×3～4.5 μm，無色，表面光滑，非淀粉質(zhì)。

3 討論

從本次采集的產(chǎn)于山西管涔山的白水皮蘑菇提取的ITS-DNA片段在NCBI上用BLAST比對(duì)結(jié)果顯示，與本研究樣本相似度高于97%（同時(shí)滿足查詢覆蓋值大于90%），并且有具體物種名稱的序列有15條，涉及杯傘屬Clitocybe和香蘑屬Lepista共8個(gè)物種名稱。從現(xiàn)代DNA分子系統(tǒng)學(xué)角度分析，這15條序列應(yīng)該是同一分類學(xué)物種。這8個(gè)物種名稱中，香蘑屬Lepista名下有Lepista sordida，Lepista irinoides和Lepista irina var.motana等3個(gè)名稱。將這3個(gè)名稱基于的幾條序列與有關(guān)專業(yè)論述中所引證的上述物種（或其近緣物種）序列用BLAST比對(duì)，結(jié)果顯示，ITS相似度均低于94%，明顯不是同種或近緣物種；從形態(tài)上看，盡管或多或少有點(diǎn)相似，管涔山的白水皮蘑菇與這3個(gè)物種的形態(tài)學(xué)特征明顯不同[2，10，13]，由此可以推斷，這 3 個(gè)名稱在這里的出現(xiàn)可能源于所依據(jù)樣本的錯(cuò)誤鑒定。其他5個(gè)物種名稱均為杯傘屬Clitocybe，包括Clitocybe cerussata，Clitocybe phyllophila，Clitocybe odora，Clitocybe subditopoda 和 Clitocybe fragrans，其中，Clitocybe cerussata是 Clitocybe phyllophila的異名[13]。在這些序列中，4條Clitocybe cerussata和Clitocybe phyllophila名下的序列源自最近的專業(yè)研究分析Clitocybe，Lepista以及相關(guān)類群系統(tǒng)分類的論文[13-14]。因此，有理由相信，這4條歐洲序列來自真正的Clitocybe phyllophila。在此基礎(chǔ)上，可以反推 Clitocybe odora，Clitocybe subditopoda 和 Clitocybe fragrans或源于錯(cuò)誤的樣本鑒定，或可能與Clitocybe phyllophila為同一物種。從形態(tài)學(xué)特征來分析，管涔山白水皮最為接近的種類就是Clitocybe phyllophila。

綜上所述，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和DNA分子分析，認(rèn)定產(chǎn)于山西省管涔山的白水皮蘑菇學(xué)名為最早報(bào)道于歐洲的落葉杯傘[10]，以前也叫白杯傘[2]，其拉丁學(xué)名為 Clitocybe phyllophila（Pers.）P.Kumm.。本研究結(jié)果是山西省第1次記錄該物種。我國已有記載的分布區(qū)有吉林、內(nèi)蒙古、青海、四川、云南，但是NCBI中沒有該種名下中國序列，然而，3條在Lepista sordida名下來自中國但沒有表明具體產(chǎn)地的序列（JQ293095，JQ293096，LT716070）應(yīng)該源于本種。

然而，盡管DNA分子和形態(tài)學(xué)分析支持山西管涔山白水皮蘑菇與歐洲落葉杯傘為同一分類學(xué)物種，但是存在于山西北部管涔山地區(qū)的白水皮蘑菇與文獻(xiàn)中該物種記載的最大不同是：白水皮蘑菇是管涔山一帶百姓采集食用了至少上百年的傳統(tǒng)野生食用菌，從未有過食用后中毒報(bào)告，而落葉杯傘在作者查閱的歐美和我國文獻(xiàn)中均記載為毒菌[2，10，15-18]。已有報(bào)道顯示，從落葉杯傘子實(shí)體中提取到了毒蠅堿（muscarin）[16-17]，國外也有中毒案例的報(bào)道，主要表現(xiàn)為毒蠅堿綜合癥[16]。而我國有關(guān)文獻(xiàn)中雖然將其列為毒菌，但沒有看到中毒報(bào)告或案例[18]。

管涔山當(dāng)?shù)匕傩帐秤蒙缴系乃蟹N類的野蘑菇之前，都要用開水煮沸幾分鐘，這也許是去除某些蘑菇毒性的有效方法之一。但是據(jù)有關(guān)報(bào)道，加熱煮食不會(huì)影響毒蠅堿的活性[18]，因此，目前尚無法解釋這個(gè)在世界其他地區(qū)公認(rèn)為有毒的蘑菇在管涔山地區(qū)為什么沒有毒性反應(yīng)，或者這種蘑菇在管涔山地區(qū)已經(jīng)演化成落葉杯傘Clitocybe phyllophila的一個(gè)無毒的區(qū)域種群（local population），很顯然，關(guān)于這個(gè)神秘的蘑菇還有很多謎團(tuán)有待解開。

志謝：曹晉忠博士對(duì)本文提供有價(jià)值的意見，首都師范大學(xué)研究生閆向遠(yuǎn)、黃凱兵、陳萌、李婷、徐語言參加標(biāo)本采集及部分實(shí)驗(yàn)工作，在此一并感謝。