孫光明　董雪玉　廖秀冬　張麗陽(yáng)　郭艷麗*　呂　林*　羅緒剛

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所礦物元素營(yíng)養(yǎng)研究室，北京 100193)

吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone，PQQ)是20世紀(jì)60年代人類(lèi)繼煙酰胺[煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)]和核黃素[黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、黃素單核苷酸(FMN)]后發(fā)現(xiàn)的又一種氧化還原酶的輔酶[1]，PQQ廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，但動(dòng)物自身不能合成，主要依靠腸道微生物合成和外源攝入獲取，PQQ被動(dòng)物攝入后，在小腸被吸收，經(jīng)腎臟排出。外源PQQ對(duì)維持動(dòng)物機(jī)體正常生理功能至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，PQQ具有促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)和提高細(xì)菌對(duì)毒性及輻射的耐受性[2-3]、抗氧化應(yīng)激[4]、防治肝損傷[5]、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[6]等功能。目前PQQ已被歸入B族維生素，是機(jī)體必需的一種營(yíng)養(yǎng)因子，在生產(chǎn)和應(yīng)用中的主要形式是吡咯喹啉醌二鈉(pyrroloquinoline quinone disodium salt，PQQ·Na2)[7]。Ghirmay[8]在肉仔雞飼糧中添加0～0.8 mg/kg PQQ·Na2時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加0.2 mg/kg PQQ·Na2可以提高肉仔雞飼料轉(zhuǎn)化效率、42日齡屠宰性能、血漿抗氧化能力并降低血漿脂質(zhì)過(guò)氧化物含量；飼糧添加0.1 mg/kg PQQ·Na2可提高血漿溶菌酶活性。孫麗敏[9]在蛋雞飼糧中添加0、0.08、0.80和1.60 mg/kg PQQ·Na2時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適量PQQ·Na2(0.80 mg/kg)可提高產(chǎn)蛋率，增強(qiáng)產(chǎn)蛋雞和雞蛋抗氧化能力，有降低雞蛋膽固醇含量的趨勢(shì)。但是，目前PQQ·Na2的研究大多集中在改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能和提高抗氧化能力等方面，關(guān)于PQQ·Na2的安全性評(píng)價(jià)主要集中在大鼠和人上[10-11]，對(duì)肉仔雞的安全性評(píng)價(jià)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)測(cè)定肉仔雞生長(zhǎng)性能、血液生理和血漿生化指標(biāo)、器官指數(shù)和組織結(jié)構(gòu)變化，以評(píng)價(jià)玉米-豆粕型飼糧中PQQ·Na2添加水平對(duì)1～21日齡和22～49日齡肉仔雞的影響，為確定PQQ·Na2在肉仔雞飼糧中最高添加水平的安全系數(shù)提供科學(xué)依據(jù)，以確保其在肉仔雞生產(chǎn)中的安全應(yīng)用。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)材料

PQQ·Na2產(chǎn)品由上海優(yōu)佰福生物科技有限公司提供，其中PQQ·Na2有效含量達(dá)到99%以上。試驗(yàn)飼糧中添加的PQQ·Na2為0.1%的預(yù)混劑產(chǎn)品。

1.2　試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。從北京華都肉雞公司購(gòu)買(mǎi)300只健康商品代1日齡愛(ài)拔益加(AA)肉仔雞(公母各占1/2)，從中按體重和性別選取240只，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)(籠)，每個(gè)重復(fù)10只雞(公母各占1/2)。

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的生物學(xué)有效性評(píng)價(jià)研究結(jié)果，得到肉仔雞玉米-豆粕型飼糧中PQQ·Na2的適宜添加水平為0.1～0.5 mg/kg，將0.1 mg/kg看作是肉仔雞飼糧中PQQ·Na2的最低有效推薦添加水平，以及根據(jù)農(nóng)業(yè)部頒布的《飼料和飼料添加劑畜禽靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)指南(試行)》中的有關(guān)規(guī)定，共設(shè)置4個(gè)組，即不添加PQQ·Na2的對(duì)照組、PQQ·Na2最高有效添加水平組(為最低有效推薦添加水平的3倍)以及分別為最高有效添加水平組5和10倍的2個(gè)PQQ·Na2高水平添加組，即4個(gè)組的飼糧PQQ·Na2添加水平分別為0、0.3、1.5和3.0 mg/kg。試驗(yàn)期為49 d，分為2個(gè)階段：1～21日齡和22～49日齡。

1.3　試驗(yàn)飼糧

參照NRC(1994)[12]家禽營(yíng)養(yǎng)需要量中肉仔雞營(yíng)養(yǎng)建議量配制試驗(yàn)雞1～21日齡和22～49日齡的玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，并按上述試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別在各階段基礎(chǔ)飼糧中通過(guò)調(diào)整玉米淀粉的用量而配制4種試驗(yàn)飼糧。各組試驗(yàn)飼糧均以粉料形式喂給試驗(yàn)雞只。

1.4　飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)管理和常規(guī)免疫按《AA肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》進(jìn)行。雞只自由采食和飲水。試驗(yàn)期每天觀察記錄雞只健康狀況，如有雞只死亡，立即解剖，觀察分析病理死因，并結(jié)料。分別于試驗(yàn)期第21和49天以重復(fù)(籠)為單元稱雞空腹體重和剩料量，計(jì)算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、料重比(F/G)。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items含量 Content1^21日齡 1 to 21 days of age22^49日齡 22 to 49 days of age蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.90 0.72 鈣 Ca1.00 0.90 非植酸磷 NPP0.45 0.35

1)飼料級(jí) Feed grade。

2)微量成分為每千克飼糧提供 Micronutrients provided the following per kilogram of diets：1～21日齡 1 to 21 days of age，VA 15 000 IU， VD34 500 IU，VE 24 IU，VK33 mg，VB13 mg，VB29.6 mg，VB63 mg，VB120.018 mg，泛酸鈣 pantothenic acid calcium 15 mg，煙酸 niacin 39 mg，葉酸 folic acid 1.5 mg，生物素 biotin 0.15 mg，氯化膽堿 choline chloride 700 mg，Zn (as zinc sulfate) 60 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，Mn (as manganese sulfate) 110 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 40 mg，I (as potassium iodide) 0.35 mg，Se (as sodium selenite) 0.15 mg，金霉素 chlorotetracycline 50 mg；22～49日齡 22 to 49 days of age，VA 10 000 IU，VD33 000 IU，VE 16 IU，VK32 mg，VB12 mg，VB26.4 mg，VB62 mg，VB120.012 mg，泛酸鈣 pantothenic acid calcium 10mg，煙酸 niacin 26 mg，葉酸 folic acid 1 mg，生物素 biotin 0.1 mg，氯化膽堿 choline chloride 500 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，Mn (as manganese sulfate) 80 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 30 mg，Zn(as zinc sulfate)40 mg，I (as potassium iodide) 0.35 mg，Se (as sodium selenite) 0.15 mg。

3)粗蛋白質(zhì)和鈣為實(shí)測(cè)值，其余營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。CP and Ca were measured values, while the other nutrient levels were calculated values.

1.5　樣品采集與制備

于飼料配制前采集玉米、豆粕飼料原料樣品，分析粗蛋白質(zhì)和鈣含量，使配制的飼糧中上述關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)素含量與飼糧配方值盡可能接近，并在配制飼糧時(shí)現(xiàn)場(chǎng)采集樣品，四分法縮小樣品量后粉碎過(guò)200目篩，置于自封袋中低溫干燥保存，以備分析飼糧粗蛋白質(zhì)和鈣含量。

分別于試驗(yàn)雞的21和49日齡時(shí)，所有雞只禁食而不禁水過(guò)夜后，次日08:00分別稱雞只空腹個(gè)體活重，從每個(gè)重復(fù)籠中按籠平均體重選取2只雞(公母各1只)，翅靜脈采血10～15 mL。其中，取第1份抗凝血測(cè)定血液常規(guī)生理指標(biāo)；取第2份抗凝血于3 000 r/min離心10 min，分離血漿并分裝，于-20 ℃凍存，以備分析血漿生化指標(biāo)。各重復(fù)籠2只雞的全血或血漿按同等比例合并為1個(gè)樣品進(jìn)行分析。

于上述第49日齡雞只采血結(jié)束后，將所有采血雞只屠宰，摘取胸腺、法氏囊、脾臟、胰臟、心臟、肺臟、肝臟、腎臟、腺胃和肌胃，另取出十二指腸、空腸和回腸擠出其中內(nèi)容物，分別稱重，計(jì)算臟器指數(shù)；測(cè)量十二指腸、空腸、回腸長(zhǎng)度，計(jì)算小腸各段長(zhǎng)度指數(shù)；同時(shí)觀察記錄各個(gè)臟器的形態(tài)變化。

臟器指數(shù)(%)=(器官重量/活體體重)×100；
小腸各段長(zhǎng)度指數(shù)(%)=(小腸各段長(zhǎng)度/
小腸總長(zhǎng)度)×100。

各器官稱重后，每個(gè)組從其中3個(gè)重復(fù)(籠)各取1只公雞、另3個(gè)重復(fù)(籠)各取1只母雞的部分肝臟、腎臟、心臟、肺臟和脾臟，放入裝有4%福爾馬林溶液的棕色瓶中固定，以備制作切片，觀測(cè)其組織結(jié)構(gòu)。

1.6　樣品分析

1.6.1飼料原料和飼糧樣品分析

樣品經(jīng)濃硝酸和高氯酸濕法消化后，在IRIS IntrepidⅡ等離子體發(fā)射光譜儀(TE，美國(guó))上測(cè)定飼料原料和飼糧中鈣含量；用比色法[13]測(cè)定磷酸氫鈣中的總磷含量；飼糧中的粗蛋白質(zhì)含量按凱氏定氮法[14]測(cè)定。

1.6.2全血、血漿指標(biāo)分析

采用KX-21血細(xì)胞自動(dòng)分析儀(SYSMEX，日本)測(cè)定血液常規(guī)生理指標(biāo)(血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積等)；采用TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀(Toshiba，日本)測(cè)定血漿生化指標(biāo)(谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酸磷酸激酶、堿性磷酸酶活性及尿酸氮、總蛋白、白蛋白、血糖、總膽紅素、肌酐、總膽固醇和甘油三酯含量)。

注意，如果手足干裂只見(jiàn)于一只手或一只腳，伴有輕度瘙癢，有可能是手足癬（手氣、腳氣），可以在上述第二步治療時(shí)加用治療腳氣的藥膏。如果手或腳同時(shí)出現(xiàn)肥厚、粗糙的皮損，并且還經(jīng)常擴(kuò)展到手足背，伴有水皰，瘙癢明顯，很有可能是濕疹，這時(shí)應(yīng)配合內(nèi)服抗過(guò)敏藥或除濕止癢的中藥，局部加用皮質(zhì)激素類(lèi)軟膏，療效更明顯。

1.6.3組織結(jié)構(gòu)檢查

按Deng等[15]和Ashraf等[16]報(bào)道的方法進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)檢查。主要步驟為：將固定的標(biāo)本經(jīng)水洗、透明、浸蠟、包埋等處理后，制成5 μm的切片，經(jīng)蘇木精-伊紅(HE)染色后，在顯微鏡下觀察肝臟、腎臟、心臟、肺臟和脾臟組織結(jié)構(gòu)形態(tài)變化，并用圖像采集系統(tǒng)采集相應(yīng)組織圖像。

1.7　數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SAS 9.0[17]軟件中的一般線性模型(GLM)程序進(jìn)行方差分析，差異顯著者，以最小顯著差異(LSD)法比較各組間的差異顯著性。數(shù)據(jù)以平均值表示，以0.05作為本研究中各項(xiàng)數(shù)據(jù)的差異顯著性檢驗(yàn)水平。

2　結(jié)果與分析

2.1　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可見(jiàn)，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)1～21日齡、22～49日齡和1～49日齡肉仔雞ADG、ADFI、F/G均無(wú)顯著影響(P>0.05)。這表明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加不同水平PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)性能均無(wú)不良影響。

表2　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

數(shù)據(jù)表示6個(gè)重復(fù)籠(n=6)的平均值，每個(gè)重復(fù)籠10只雞(公母各占1/2)。

Values represent the mean of six replicate cages (n=6) with 10 chicks (half male and half female) per cage.

2.2　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血液生理指標(biāo)的影響

由表3可見(jiàn)，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)21、49日齡肉仔雞血液血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。這表明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加不同水平PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的血液生理指標(biāo)均無(wú)不良影響。

表3　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血液生理指標(biāo)的影響

數(shù)據(jù)表示5或6個(gè)重復(fù)籠(n=5或n=6)的平均值，每個(gè)重復(fù)籠2只雞(公母各1只)。

Values represent the mean of five or six replicate cages (n=5 orn=6) with 2 chicks (one male and one female) per cage.

2.3　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血漿生化指標(biāo)的影響

由表4可見(jiàn)，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)21、49日齡肉仔雞的各項(xiàng)血漿生化指標(biāo)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。這表明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加不同水平PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的血漿生化特性均無(wú)不良影響。

表4　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血漿生化指標(biāo)的影響

數(shù)據(jù)表示5或6個(gè)重復(fù)籠(n=5或n=6)的平均值，每個(gè)重復(fù)籠2只雞(公母各1只)。

Values represent the mean of five or six replicate cages (n=5 orn=6) with 2 chicks (one male and one female) per cage.

2.4　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞臟器指數(shù)的影響

由表5可見(jiàn)，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞各臟器指數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)，且各臟器外觀未觀測(cè)到任何異常變化。這表明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加不同水平PQQ·Na2不影響肉仔雞內(nèi)臟器官的發(fā)育。

2.5　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞主要臟器組織結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可見(jiàn)，各組49日齡肉仔雞心臟未見(jiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。各組均表現(xiàn)為心臟被膜光滑；心肌細(xì)胞呈短柱狀，排列緊密、整齊，細(xì)胞染色均勻；心肌細(xì)胞的潤(rùn)盤(pán)及橫紋間質(zhì)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于肌細(xì)胞的中央。

由圖2可見(jiàn)，各組49日齡肉仔雞肝臟未見(jiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。各組均表現(xiàn)為肝小葉呈多角棱柱體，結(jié)構(gòu)規(guī)則；肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，界限清晰，呈均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；肝索和肝竇結(jié)構(gòu)完整清晰。

由圖3可見(jiàn)，各組49日齡肉仔雞脾臟未見(jiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。各組均表現(xiàn)為脾臟結(jié)構(gòu)清晰完整，脾小結(jié)數(shù)量和直徑未見(jiàn)變化；中央動(dòng)脈直徑和周?chē)馨颓屎穸任匆?jiàn)差異。

由圖4可見(jiàn)，各組49日齡肉仔雞肺臟未見(jiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。各組肺成鮮紅色，表面覆有漿膜；三級(jí)支氣管上皮細(xì)胞無(wú)炎性滲出物，表面微絨毛粗細(xì)一致，分布均勻；肺房隔內(nèi)淋巴細(xì)胞有形成淋巴小結(jié)；呼吸毛細(xì)管徑大小均勻一致，管腔內(nèi)無(wú)異物，上皮細(xì)胞表面光滑；呼吸毛細(xì)管周?chē)?xì)血管豐富。

表5　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞臟器指數(shù)的影響

數(shù)據(jù)表示5或6個(gè)重復(fù)籠(n=5或n=6)的平均值，每個(gè)重復(fù)籠2只雞(公母各1只)。

Values represent the mean of five or six replicate cages (n=5 orn=6) with 2 chicks (one male and one female) per cage.

圖1　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞心臟組織結(jié)構(gòu)的影響

圖2　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

圖3　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞脾臟組織結(jié)構(gòu)的影響

圖4　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞肺臟組織結(jié)構(gòu)的影響

由圖5可見(jiàn)，各組49日齡肉仔雞腎臟未見(jiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。各組均表現(xiàn)為腎臟皮質(zhì)部腎小球似球體，體積適中，結(jié)構(gòu)正常，腎小球外有腎小囊包繞，囊腔清晰；腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，胞漿均質(zhì)紅染；髓質(zhì)小體的集合管上皮細(xì)胞胞漿較均質(zhì)。

以上結(jié)果表明，在本次試驗(yàn)條件下，飼糧添加PQQ·Na2的各組肉仔雞主要臟器均未觀測(cè)到其顯微結(jié)構(gòu)和形態(tài)的組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化。

圖5　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞腎臟組織結(jié)構(gòu)的影響

3　討　論

3.1　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

研究表明，PQQ具有類(lèi)維生素的作用[18]，其促生長(zhǎng)的作用可能與增強(qiáng)生物體生長(zhǎng)、發(fā)育信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的RSA基因的表達(dá)有關(guān)[19]，是動(dòng)物生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖必需的營(yíng)養(yǎng)因子。張亞男等[7]研究發(fā)現(xiàn)，給肉仔雞提供氧化鴨油、新鮮鴨油和氧化鴨油加0.4 mg/kg PQQ·Na2的3種飼糧，飼糧添加PQQ·Na2有改善氧化鴨油組肉仔雞生長(zhǎng)性能的趨勢(shì)，但無(wú)顯著影響。Wang等[20]在飼糧中添加0～0.4 mg/kg PQQ·Na2，結(jié)果表明飼糧添加PQQ·Na2對(duì)肉仔雞前、后期及全期生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。Samuel等[21]在肉仔雞飼糧中添加0～0.8 mg/kg PQQ·Na2，得出與Wang等[20]相似結(jié)果。本試驗(yàn)研究表明，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)性能均無(wú)顯著影響，與前人的研究結(jié)果相似，說(shuō)明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)無(wú)不良影響。

3.2　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血液生理指標(biāo)的影響

動(dòng)物血液中血紅蛋白含量和紅細(xì)胞壓積等血液常規(guī)指標(biāo)可作為衡量機(jī)體健康狀況的依據(jù)。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血紅蛋白含量及紅細(xì)胞壓積等血液指標(biāo)均無(wú)顯著影響。王麗云等[22]研究結(jié)果顯示，設(shè)PQQ水平高、中、低3個(gè)劑量組，分別用含3.8、7.5、15.0 mg/kg(相當(dāng)于人體推薦量300倍)受試物給小鼠灌胃給藥90 d，結(jié)果與空白對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。這表明在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加PQQ·Na2對(duì)肉仔雞血液生理指標(biāo)無(wú)不良影響。

3.3　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞血漿生化指標(biāo)的影響

血漿總蛋白和白蛋白的含量在一定程度上可以反映機(jī)體蛋白質(zhì)的合成和代謝狀況。血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是反映機(jī)體肝功能的重要指標(biāo)，當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性會(huì)升高；血漿中肌酸激酶活性能反映出心肌細(xì)胞受損的水平；堿性磷酸酶多存在于骨骼及肝臟中，可以將相應(yīng)底物去磷酸化產(chǎn)生磷酸，然后與鈣結(jié)合沉積于骨骼中，肝臟或成骨細(xì)胞出現(xiàn)損傷時(shí)，堿性磷酸酶活性會(huì)升高[23]。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶、堿性磷酸酶活性及總蛋白、肌酐、總膽紅素和葡萄糖含量等血漿生化指標(biāo)均無(wú)顯著影響，這與孫麗敏[9]和Wang等[20]研究結(jié)果相似，表明飼糧中添加PQQ·Na2對(duì)肉仔雞血漿生化指標(biāo)均無(wú)不良影響。

3.4　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)49日齡肉仔雞臟器指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)和消化器官指數(shù)是反映動(dòng)物免疫和消化功能的重要參考指標(biāo)。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)和消化器官指數(shù)均無(wú)顯著影響。Samuel等[21]的研究結(jié)果也表明，飼糧PQQ·Na2水平不影響肉仔雞的相關(guān)免疫器官指數(shù)(胸腺、脾臟和法氏囊)和溶菌酶活性。以上結(jié)果表明，飼糧添加PQQ·Na2不影響肉仔雞主要內(nèi)臟器官的發(fā)育。

3.5　飼糧PQQ·Na2添加水平對(duì)肉仔雞主要臟器組織結(jié)構(gòu)的影響

臟器的組織結(jié)構(gòu)是反映動(dòng)物機(jī)體新陳代謝的重要指標(biāo)。在本試驗(yàn)中，肉仔雞飼糧添加不同水平PQQ·Na2后，未觀測(cè)到心臟等主要內(nèi)臟器官組織顯微結(jié)構(gòu)和形態(tài)的組織結(jié)構(gòu)變化。王麗云等[22]通過(guò)給小鼠灌服高、中、低(3.8、7.5、15.0 mg/kg)3個(gè)水平的PQQ，對(duì)照組飼喂普通飼糧，灌胃容積為10 mL/kg體重，發(fā)現(xiàn)小鼠臟器出現(xiàn)輕微變化，但未發(fā)現(xiàn)明顯的組織結(jié)構(gòu)病變。趙芹[24]的研究表明，用濃度為50～400 nmol/L PQQ·Na2處理30周齡海蘭褐蛋雞肝臟細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)肝臟細(xì)胞存活率與正常對(duì)照組相比沒(méi)有顯著影響，表明50～400 nmol/L PQQ·Na2未能對(duì)體外培養(yǎng)的蛋雞原代肝細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。這與本試驗(yàn)結(jié)果基本相似，表明飼糧添加PQQ·Na2不會(huì)引起肉仔雞重要組織的結(jié)構(gòu)變化。

本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼糧添加0、0.3、1.5和3.0 mg/kg PQQ·Na2并未對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、血漿生化指標(biāo)、血液生理指標(biāo)、免疫器官及主要臟器發(fā)育造成不良影響，因此，建議肉仔雞飼糧中PQQ·Na2的最高有效添加水平為0.3 mg/kg，具有10倍的安全系數(shù)，對(duì)肉仔雞飼喂是安全的。有研究表明，PQQ作為一種生長(zhǎng)因子，可激活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖和分化有重要作用的轉(zhuǎn)錄蛋白和轉(zhuǎn)錄因子，從而引起細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活，達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物體生長(zhǎng)的目的[25]。而本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加PQQ·Na2對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)性能并沒(méi)有產(chǎn)生影響，可能因?yàn)閯?dòng)物品種和環(huán)境的差異引起，且動(dòng)物機(jī)體存在一定的耐受性，所以在本試驗(yàn)的添加水平下，PQQ·Na2未能對(duì)肉仔雞各指標(biāo)產(chǎn)生影響。

4　結(jié)　論

飼糧中添加0～3.0 mg/kg的PQQ·Na2對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、血常規(guī)指標(biāo)、血漿生化指標(biāo)和主要臟器發(fā)育均無(wú)不良影響，主要內(nèi)臟均未觀測(cè)到組織病理學(xué)變化，所有雞只均未出現(xiàn)毒性反應(yīng)。因此，建議肉仔雞飼糧中PQQ·Na2的最高有效添加水平為0.3 mg/kg，具有10倍的安全系數(shù)，對(duì)肉仔雞飼喂是安全的。