裴元元 冉健 李高馳 魏鳳香

(深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院，廣東 深圳 518172)

α-地中海貧血是由于α-珠蛋白基因的缺失型或非缺失型突變引起的，根據(jù)臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度一般分為靜止型、輕型、中間型、重型四個(gè)類(lèi)型。α-地中海貧血的臨床表型取決于α-珠蛋白基因缺陷的基因型，即表型的嚴(yán)重程度與基因的劑量密切相關(guān)。當(dāng)一個(gè)α-珠蛋白基因突變時(shí)其雜合子還保留有3個(gè)α-基因(-α/αα、αTα/αα)，通常表現(xiàn)為靜止型α-地中海貧血。-α/αα攜帶者通常無(wú)血液學(xué)異常表現(xiàn)，可以沒(méi)有任何臨床癥狀，需要通過(guò)基因分析確診。部分αTα/αα攜帶者(αCSα/αα、αQSα/αα)可表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素[1]。靜止型α-地中海貧血的確診，可有效指導(dǎo)中間型α-地貧患兒的早期診斷。本文中，我們對(duì)比分析了不同年齡組靜止型α-地貧的基因型及血液表型，以期能為有效篩查靜止型α-地中海貧血提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 299例基因型為-α/ αα或ααT/ αα的靜止型α-地中海貧血基因攜帶者。成人組267例，年齡21～44歲，兒童組32例，年齡9個(gè)月至3歲。

1.2 方法

1.2.1 MCV、MCH檢測(cè) 取靜脈血2ml, EDTA-K2抗凝,東亞SYSMEX血細(xì)胞分析儀分析平均紅細(xì)胞體積(MCV)及平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)。 MCV<82fl、 MCH<27pg定義為血細(xì)胞指標(biāo)陽(yáng)性。

1.2.2 血紅蛋白電泳分析 使用Sebia全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白電泳，分析血紅蛋白組分及其百分比。

1.2.3 地貧基因檢測(cè) 采用全血基因提取試劑盒提取外周血基因組DNA，基因診斷試劑盒診斷α-地貧的3種缺失型突變(gap-PCR技術(shù))和3種點(diǎn)突變(PCR結(jié)合寡核苷酸探針?lè)聪蛴≯E雜交法)。

2 結(jié)果

2.1 基因型分析 299例靜止型α-地中海貧血基因攜帶者中-α3.7/αα 158例、-α4.2/αα 61例、αCSα/αα 46例、αWSα/αα 24例、αQSα/αα 10例，缺失型占73.2%，具體基因型見(jiàn)表1。

表1 兩個(gè)年齡組靜止型α-地中海貧血的基因型及MCV、MCH統(tǒng)計(jì)

2.2 MCV、MCH分析

2.2.1 MCV、MCH單指標(biāo)篩查靜止型α-地中海貧血結(jié)果分析 如表2所示，單獨(dú)以MCV<82fl作為地貧篩查陽(yáng)性指標(biāo)時(shí)，成人組會(huì)有151例基因突變攜帶者遺漏，篩查漏診率為56.6%(151/267)，兒童組有2例遺漏，篩查漏診率為6.3%(2/32)；以MCH<27pg為篩查陽(yáng)性指標(biāo)時(shí)，成人組會(huì)有136例遺漏，篩查漏診率為50.9%(136/267)，兒童組有1例遺漏，篩查漏診率為3.1%(1/32)。MCH的篩查靈敏度略高于MCV。

表2 MCV、MCH單指標(biāo)篩查靜止型α-地中海貧血結(jié)果分析(例)

注： MCV(-)指MCV≥82fl，MCH(-)指MCH≥27pg

2.2.2 MCV、MCH聯(lián)合篩查靜止型α-地中海貧血結(jié)果分析 如表3所示，MCV、MCH聯(lián)合篩查靜止型α-地中海貧血時(shí)，成人組267例基因突變攜帶者有145例MCV、MCH一項(xiàng)或雙項(xiàng)檢測(cè)值異常，但仍有122例MCV與MCH檢測(cè)值均正常(-α3.7/αα 69例、-α4.2/αα 21例、αCSα/αα 21例、αWSα/αα 11例)，篩查漏診率為45.7%(122/267)。兒童組32例基因突變攜帶者有1例-α4.2/αα無(wú)法篩出，篩查漏診率為3.1%(1/32)。

表3 MCV、MCH聯(lián)合篩查靜止型α-地中海貧血結(jié)果分析(例)

注：(-) 指檢測(cè)指標(biāo)在正常值范圍，(+) 指檢測(cè)指標(biāo)在正常值范圍之外

2.2.3 兩個(gè)年齡組靜止型α-地中海貧血MCV、MCH對(duì)比分析 如表1所示，兒童組不同基因型靜止型α-地中海貧血的MCV、MCH明顯低于成人組，如表4所示，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4 兩個(gè)年齡組靜止型α-地中海貧血MCV、MCH對(duì)比分析

3 討論

地中海貧血是最早在分子水平上闡明了發(fā)病機(jī)制的人類(lèi)遺傳病之一，α-地中海貧血的分子基礎(chǔ)是α2和α1基因的缺失或點(diǎn)突變，使α-珠蛋白產(chǎn)量下降，導(dǎo)致無(wú)效造血或紅細(xì)胞被破壞。地中海貧血屬于常染色體隱性遺傳病，單個(gè)珠蛋白等位基因的突變(基因突變攜帶者)不會(huì)導(dǎo)致個(gè)體出現(xiàn)臨床癥狀，只有突變純合子才會(huì)發(fā)病[1，2]。靜止型α-地中海貧血自身雖不發(fā)病，卻可將突變基因傳遞給下一代，在地中海貧血高發(fā)的廣東，為了有效指導(dǎo)中間型α-地中海貧血的早期診斷，大規(guī)模靜止型α-地中海貧血的篩查診斷是必要的預(yù)防措施。

目前，MCV、MCH、Hb A2廣泛應(yīng)用于地貧篩查[3，4]，Hb A2篩查β-地中海貧血的靈敏度和特異度均很高，篩查α-地中海貧血，尤其是靜止型與輕型α-地中海貧血的靈敏度和特異度較差[3,5，6]。本文研究了299例基因型為-α/ αα或ααT/ αα的靜止型α-地中海貧血基因突變攜帶者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)-α3.7/ αα與-α4.2/αα合占所有突變基因型的73.2%。將研究對(duì)象分為成人組與兒童組分析各組的血液參數(shù)發(fā)現(xiàn)，在成人組，MCV、MCH單指標(biāo)篩查靜止型α-地中海貧血的漏診率高達(dá)50%以上，MCV、MCH聯(lián)合篩查的漏診率也有45.7%，122例MCV與MCH均陰性的患者中有25例Hb A2大于2.6%，無(wú)法通過(guò)血紅蛋白電泳篩出，詳細(xì)分析該25例靜止型α-地中海貧血的血液學(xué)參數(shù)發(fā)現(xiàn)，1例紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)升高，2例平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)降低，8例血紅蛋白濃度降低，12例紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，11例所有血細(xì)胞參數(shù)均正常，即仍有部分靜止型α-地中海貧血無(wú)法通過(guò)血液學(xué)分析篩出。分析32例兒童組數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，僅有1例患兒無(wú)法通過(guò)MCV、MCH篩出，但該患兒的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白濃度均降低。對(duì)比成人組與兒童組各突變基因型的MCV、MCH，兒童組不同基因型的MCV、MCH均明顯低于成人組，且組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MCV、MCH篩查學(xué)齡前兒童的靜止型α-地中海貧血靈敏度遠(yuǎn)高于成人。

檢索文獻(xiàn)顯示，不同課題組就靜止型α-地中海貧血已做過(guò)充分分析[7-9]。本研究小組將靜止型α-地中海貧血按年齡分組，得出可將學(xué)齡前血參數(shù)作為篩查靜止型α-地中海貧血依據(jù)的結(jié)論。鑒于兒童組現(xiàn)有數(shù)據(jù)量較少，我們會(huì)進(jìn)一步收集該部分?jǐn)?shù)據(jù)，以期為臨床地中海貧血遺傳咨詢(xún)提供更準(zhǔn)確的理論依據(jù)。

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