陳德文，陳梅蘭，王正林，龔越飛，王國棟，龔旭東

（1.國家日用小商品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，浙江 義烏 322000；2.浙江樹人大學(xué) 生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江 杭州 310015）

亞硝胺是一類具有廣譜而強(qiáng)烈致癌性的物質(zhì)，可以誘發(fā)不同種屬動(dòng)物器官的腫瘤[1-3]。1993年，歐洲經(jīng)濟(jì)共同體頒布93/11/EEC的委員會(huì)指示，規(guī)定了嬰兒奶嘴及撫慰品中亞硝胺的遷移量不超過10 μg·kg-1，亞硝基化物質(zhì)的可遷移量不超過100 μg·kg-1。1999年，歐盟頒布了嬰兒乳膠奶嘴及撫慰品中亞硝胺及可亞硝基化物質(zhì)遷移量的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法[4]。

目前，制品中的亞硝胺類物質(zhì)測(cè)定方法有氣相色譜法、液相色譜法、固相萃取-氣相色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法和氣相色譜-正化學(xué)電離質(zhì)譜法等[5-8]，但關(guān)于奶嘴中亞硝胺類物質(zhì)的研究較少。

亞硝胺類物質(zhì)檢測(cè)樣品前處理方法多為固相萃取和加速溶劑萃取。而固相萃取方法比較費(fèi)時(shí)，裝置價(jià)格較昂貴，萃取頭使用壽命短，多次使用存在交叉污染的問題；加速溶劑萃取需要在高溫和加壓的條件下進(jìn)行，而萃取溫度過高可能使亞硝胺分解使回收率降低。

本工作建立液液萃取奶嘴中亞硝胺類物質(zhì)的氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)方法，并對(duì)中國市場(chǎng)上不同品牌的硅橡膠、乳膠奶嘴中亞硝胺物質(zhì)的遷移量進(jìn)行檢測(cè)分析。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑

二氯甲烷（色譜純）和甲醇（色譜純），美國TEDIA有限公司產(chǎn)品；12種亞硝胺混和標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度為50 mg·L-1，德國BEPURE公司產(chǎn)品；碳酸氫鈉、氯化鈉、碳酸鉀、亞硝酸鈉、氫氧化鈉和鹽酸，分析純，市售品。

1.2 測(cè)試儀器

6890N Network型氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用儀，美國安捷倫公司產(chǎn)品；KQ-300GVD型三頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；BS-224S型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 人工唾液鹽溶液的配制

稱取4.2 g碳酸氫鈉、0.5 g氯化鈉、0.2 g碳酸鉀和30 mg亞硝酸鈉溶于l L水中，用濃度為0.1 mol·L-1的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為9。

1.3.2 浸提

準(zhǔn)確稱取5 g（質(zhì)量精確至0.1 mg）剪碎的樣品，置于50 mL錐形瓶中，用移液管加入40 mL人工唾液鹽溶液。用玻璃塞塞住錐形瓶，小心搖動(dòng)使人工唾液浸沒樣品，在40 ℃恒溫水浴中放置（24±0.5） h。

1.3.3 浸提液的處理

先將4 mL浸提液倒入50 mL具塞容量瓶進(jìn)行浸潤，再將其余浸提液全部轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用人工唾液定容，混勻。然后取8 mL浸提液于具塞比色管中，加入0.2 mL氫氧化鈉溶液，再加入4 mL二氯甲烷，用渦漩混合器振蕩至少1 min。靜置5 min，待完全分層后，用潔凈的膠頭滴管吸取上層清液（膠頭滴管需經(jīng)過超聲儀超聲30 min后，晾干）。重復(fù)此操作3次。待溶液萃取完全后，用約0.4 mL的二氯甲烷洗滌容器內(nèi)壁，合并試液，用氮吹儀將試液濃縮至約1 mL，備用。

1.4 GC-MS條件

DB-35MS色 譜 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），進(jìn)樣口溫度 250 ℃；起始溫度為60 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1速率升溫至120 ℃，保持3 min，再以15 ℃·min-1速率升溫至200 ℃，保持10 min，最后以30 ℃·min-1速率升溫至270 ℃，保持2 min；進(jìn)樣方式 不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量 1 μL；載氣 氦氣（純度大于99.999%），流速 1.0 mL·min-1；傳輸線溫度 280 ℃；電子轟擊電離源（EI），電子能量 70 eV；采集模式 SCAN/SIM 同時(shí)采集；質(zhì)譜掃描范圍（質(zhì)核比） 35～300；溶劑延遲時(shí)間 3.0 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 GC-MS條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜柱

分別考察了不同極性的色譜柱對(duì)12種待測(cè)N-亞硝胺類物質(zhì)的分離效果。結(jié)果表明：選用非極性柱時(shí)，部分N-亞硝胺類物質(zhì)的色譜峰與溶劑峰分不開，且峰形不好；選用強(qiáng)極性柱時(shí)，各待測(cè)物質(zhì)色譜響應(yīng)值低，峰形不好；而選用弱極性柱時(shí)，能獲得較好的峰形和分離效果。因此，選擇DB-35MS柱作為色譜分離柱。

2.1.2 程序升溫條件

考察了起始升溫速率對(duì)出峰時(shí)間接近的3種物質(zhì)（N-亞硝基-N-乙基苯胺、N-亞硝基二乙丁胺、N-亞硝基嗎啉）的分離效果，當(dāng)起始升溫速率為10 ℃·min-1時(shí)，3種物質(zhì)的色譜峰無法分離；當(dāng)起始升溫速率降至2 ℃·min-1時(shí)，12種待測(cè)物質(zhì)均有較好的分離效果。因此，確定程序升溫條件如下：起始溫度60 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1速率升溫至120 ℃，保持3 min，再以15 ℃·min-1速率升溫至200 ℃，保持10 min，最后以30 ℃·min-1速率升溫至270 ℃，保持2 min。按上述優(yōu)化條件，對(duì)質(zhì)量濃度為2 mg·L-1的12種N-亞硝胺進(jìn)行分析，目標(biāo)物質(zhì)的具體信息見表1，總離子流圖見圖1。

圖1 12種N-亞硝胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖

表1 12種N-亞硝胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的GC-MS信息

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

用甲醇將12種亞硝胺類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液稀釋至質(zhì)量濃度為0.2，0.5，1.0，2.0和5.0 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，從濃度由低到高依次進(jìn)行測(cè)定（每個(gè)樣品測(cè)定7次），以目標(biāo)物的峰面積（y）對(duì)其質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行回歸分析，并以10倍的信噪比為方法的檢出限，得到各組分的線性回歸方程、相關(guān)因數(shù)和方法的檢出限，結(jié)果見表2。

表2 12種N-亞硝胺的線性回歸方程、相關(guān)因數(shù)和檢出限

2.3 方法的回收率和精密度

用本方法對(duì)3號(hào)樣品進(jìn)行測(cè)試分析，未檢出N-亞硝胺目標(biāo)物質(zhì)。以該樣品為本底，添加質(zhì)量濃度為2 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照優(yōu)化的試驗(yàn)件平行測(cè)定7次。結(jié)果表明，12種N-亞硝胺的回收率為87%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.25%～8.31%，滿足定量分析的要求，具體結(jié)果見表3。

表3 方法的回收率和精密度（n=7）

2.4 實(shí)際樣品的測(cè)定

對(duì)國內(nèi)外21個(gè)品牌的奶嘴樣品按上述方法處理后進(jìn)行測(cè)定，有16個(gè)品牌的奶嘴樣品含有N-亞硝胺類物質(zhì)。除二乙基亞硝胺、N-亞硝基二乙丁胺、N-亞硝基嗎啉、N-亞硝基哌啶和硝基-N-乙基苯胺5種物質(zhì)未檢出外，其他7種物質(zhì)均有檢出，遷移出的總亞硝胺含量集中在0.04～0.68 μg·kg-1，其中檢出最多的物質(zhì)是N-亞硝基-N-甲基苯胺，在15個(gè)樣品中均含有。

3 結(jié)論

以人工唾液鹽浸提奶嘴中的N-亞硝胺類物質(zhì)，二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，建立了嬰幼兒奶嘴中12種N-亞硝胺遷移量的分析方法。該方法測(cè)定12種N-亞硝胺的回收率為87%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.25%～8.31%，符合定量分析的要求。