金延飛 范靜靜 宋德文 徐增良

(膠州市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，山東 膠州 266300)

腦卒中患者常在術(shù)后出現(xiàn)昏迷或意識(shí)障礙，大腦及神經(jīng)功能受損，嚴(yán)重影響預(yù)后〔1〕。Apelin-13蛋白首次于牛胃分泌物中提取，在人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)中分布廣泛〔2〕。據(jù)報(bào)道〔3〕，Apelin-13蛋白水平與缺血所致的大腦損傷存在相關(guān)性。此外，由于腦卒中患者在血供恢復(fù)后會(huì)誘導(dǎo)體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)。異前列腺素(8-iso-PG)F2α為近年來發(fā)現(xiàn)的新的氧化應(yīng)激反應(yīng)因子，能夠反映體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)水平〔4〕。為進(jìn)一步探討腦得康口服液恢復(fù)神經(jīng)功能的機(jī)制，本研究對(duì)不同組腦卒中患者治療前后血清8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平進(jìn)行監(jiān)測，旨在為臨床治療提供參考。

1 對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象 選取2014年8月至2016年8月在膠州市人民醫(yī)院就診的腦卒中后昏迷患者102例，其中男 58例,女 44例，平均年齡(53.5 ±11.4)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1996年中華神經(jīng)學(xué)會(huì)和中華神經(jīng)外科學(xué)會(huì)制定的《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)》〔5〕：(1)首次出現(xiàn)腦卒中；(2)從發(fā)病至入院治療時(shí)間不超過10 h；(3)術(shù)后患者間清醒后再次昏迷，或昏迷不醒；(4)無言語能力或言語不清；(5)大小便失禁；(6)腦卒中量表(NIHSS)評(píng)分為4～11分，格拉斯哥昏迷量表(GCS)評(píng)分為5～11分；(7)對(duì)本研究知情，且自愿簽署知情同意書。開始試驗(yàn)前對(duì)患者一般生命體征等進(jìn)行檢查，排除有嚴(yán)重顱內(nèi)出血、有惡性腫瘤、嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病、感染性疾病、心力衰竭以及重大手術(shù)史患者。

采用隨機(jī)分組方法將患者分為觀察組與對(duì)照組，每組患者51例。對(duì)照組男29例，女 22 例； 年齡41～76 歲，平均(52.7 ± 7.1) 歲；NIHSS 評(píng)分(13.7 ± 1.1)分，GCS 評(píng)分(9.3 ± 2.7)分。觀察組男30例，女21 例； 年齡42 ～ 74歲，平均(54.8 ± 8.4) 歲；NIHSS 評(píng)分(13.5 ± 1.3)分，GCS 評(píng)分(9.5 ± 2.4)分。各組中性別、年齡、NIHSS 評(píng)分、GCS 評(píng)分等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。以上研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2研究方法 兩組患者均采用術(shù)后基礎(chǔ)治療，主要以控制病情發(fā)展，改善腦血管循環(huán)、預(yù)防術(shù)后感染為治療目的。對(duì)照組在手術(shù)后24 h內(nèi)，基礎(chǔ)治療外，靜脈滴注濃度為16 mg/L的鹽酸納洛酮注射液(廠家：北京華素制藥股份有限公司，批號(hào)：090021)。配置方法為：一支4.0 mg鹽酸納洛酮注射液溶解至250 ml 5%葡萄糖溶液內(nèi)。1次/d，以7 d為1個(gè)療程，在患者接受4個(gè)療程治療后對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行檢測。

觀察組患者在基礎(chǔ)治療上采用院內(nèi)自制腦得康口服液進(jìn)行治療。該方組成：生地30 g，黃連15 g，夏枯草15 g，赤芍30 g，當(dāng)歸15 g，地龍10 g，川芎15 g，人參10 g，鉤藤15 g，石菖蒲15 g，伸筋草15 g，僵蠶15 g，冰片0.3 g。患者每日一劑，水煎至200 ml，每次服用100 ml，2次/d。以7 d為1個(gè)療程，在患者接受4個(gè)療程治療后對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行檢測。

1.3評(píng)價(jià)方法 對(duì)所有患者入院時(shí)及治療4個(gè)療程后以下各指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

(1)腦卒中治療及昏迷情況評(píng)價(jià)：采用NIHSS進(jìn)行評(píng)分。主要對(duì)患者神經(jīng)功能包括意識(shí)水平、凝視、面癱、上下肢體運(yùn)動(dòng)等的15個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行考察，并記錄各組患者不同時(shí)間段NIHSS評(píng)分情況?；杳郧闆r包括神經(jīng)功能和意識(shí)損傷程度采用GCS評(píng)分評(píng)價(jià)。

(2)運(yùn)動(dòng)能力評(píng)價(jià)：采用 Fugl-Meyer(FMA)法〔6〕對(duì)患者治療前以的運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)估，滿分100分，對(duì)各部位運(yùn)動(dòng)能力進(jìn)行打分，患者對(duì)測評(píng)的運(yùn)動(dòng)完成情況越好分值越高，上肢最高占總分66%，下肢占總分34%，其中上肢的評(píng)價(jià)包括對(duì)患者上肢反射活動(dòng)、屈肌共同運(yùn)動(dòng)、伸肌共同運(yùn)動(dòng)、分離運(yùn)動(dòng)以及手觸腰椎運(yùn)動(dòng)等評(píng)價(jià)，下肢評(píng)價(jià)則是對(duì)患者膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)等進(jìn)行下肢反射活動(dòng)、屈肌共同運(yùn)動(dòng)、伸肌共同運(yùn)動(dòng)、分離運(yùn)動(dòng)等評(píng)價(jià)。

(3)血清指標(biāo)檢測：于患者晨醒10 min取3 ml靜脈血，3 000 r/min，離心15 min，離心半徑10 cm，獲得血清，采用ELISA法測定8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白。8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白試劑盒購置于上海凱基生物科技有限公司。具體操作步驟依照說明書進(jìn)行：96孔空白微孔板，加入濃度為0.8 μg/ml 的8-iso-PGF2α包被抗體(或Apelin-13蛋白)包被過夜后用0.1% PBS洗液洗滌3次；加入1% BSA封閉液封閉1 h后再用PBS清洗3次。加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品血清，37℃孵育30 min，PBS清洗酶標(biāo)板；加入0.4 μg/ml 8-iso-PGF2α(或Apelin-13蛋白)檢測抗體,37℃孵育120 min，PBS清洗液清洗3次后，加入1∶200稀釋的鏈酶親和素的辣根過氧化物酶，37℃孵育30 min，PBS清洗液清洗3次；用四甲基聯(lián)苯胺室溫避光顯色20 min后，采用1 mol/L的硫酸終止液終止反應(yīng)；于酶標(biāo)儀450 nm下檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組NIHSS及GCS評(píng)分比較 治療前兩組患者NIHSS及GCS評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組患者NIHSS評(píng)分明顯下降，GCS評(píng)分明顯升高，與治療前相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。觀察組NIHSS評(píng)分明顯低于對(duì)照組，GCS評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組NIHSS及GCS評(píng)分比較分,n=51)

2.2兩組患者各階段運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分比較 治療前兩組患者上下肢運(yùn)動(dòng)能力評(píng)分指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組患者上下肢運(yùn)動(dòng)能力評(píng)分均明顯提高，與治療前相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。觀察組上下肢運(yùn)動(dòng)能力評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者各階段運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分比較分，n=51)

2.3患者治療前后8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白變化 治療前，兩組患者血清中8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，經(jīng)不同方法治療后，兩組8-iso-PGF2α較治療前顯著降低(P<0.05)，Apelin-13蛋白水平較治療前顯著升高(P<0.05)，且觀察組8-iso-PGF2α水平明顯低于對(duì)照組，Apelin-13蛋白水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白變化比較

3 討 論

本研究中采用的腦得康口服液中生地為君藥，有清熱涼血、生津養(yǎng)陰之功效?！肚Ы鹨健分性赋?，“內(nèi)有瘀血”者應(yīng)以生地水煎，分三次服用。此外，方劑中川芎、僵蠶與地龍又能息風(fēng)止痙，祛風(fēng)止痛，行血中之氣。血通則脈通，三者合用進(jìn)而提高藥材活血補(bǔ)氣療效〔7〕。當(dāng)歸可補(bǔ)血活血，與川芎、僵蠶、地龍的行血中之氣相輔相成。夏枯草、鉤藤主治肝火上升或肝陽所致的頭暈?zāi)垦?，二者合用可協(xié)同作用治療肝陽上亢及血熱上涌。此外，黃連的瀉火解毒、苦寒泄降之效更能有助于祛除肝火。石菖蒲主化痰濕、開竅閉，對(duì)因痰濕引起的蒙閉心竅癥效果顯著。人參為滋補(bǔ)藥材，除了可以安神益智，還能夠提高人體免疫力，對(duì)患者具有補(bǔ)氣補(bǔ)中之功效。故腦得康口服液全方諸藥合用，共奏活血行氣，止痙定驚，平息肝陽，開竅醒腦之效。本研究提示觀察組患者治療后腦部神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)能力及昏迷程度較治療前明顯改善，且改善程度明顯高于對(duì)照組。

進(jìn)一步探討腦得康口服液作用機(jī)制后發(fā)現(xiàn)，腦得康口服液可能通過下調(diào)8-iso-PGF2α水平，上調(diào)Apelin-13蛋白水平發(fā)揮療效。由于8-iso-PGF2α為評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激狀態(tài)指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)系統(tǒng)受到激發(fā)時(shí)，體內(nèi)8-iso-PGF2α水平就會(huì)隨之上升〔8〕。而腦卒中患者恢復(fù)血供時(shí)，其體內(nèi)氧化應(yīng)激系統(tǒng)得到激活，進(jìn)而觸發(fā)了8-iso-PGF2α的生成，破壞腦部神經(jīng)細(xì)胞。人參中人參皂苷能夠有效清除氧化自由基，抑制高氧化狀態(tài)及氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而發(fā)揮降低8-iso-PGF2α水平的作用，有效改善腦部神經(jīng)〔9〕。Apelin-13蛋白與缺血性腦卒中的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。據(jù)報(bào)道〔10〕，動(dòng)脈閉塞的小鼠腦室內(nèi)注射不同劑量Apelin-13蛋白，小鼠腦梗死面積降低程度不同，其中腦梗死面積隨著注射劑量的提高而降低。說明Apelin-13蛋白有助于緩解腦梗死面積。Yang等〔11〕發(fā)現(xiàn)，腦卒中患者體內(nèi)Apelin-13蛋白水平影響患者預(yù)后。Apelin-13蛋白能夠?qū)δX卒中患者的腦部神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用；Apelin-13蛋白水平高，患者預(yù)后好。本研究顯示，自制的腦得康口服液有提高Apelin-13蛋白水平的作用。進(jìn)一步證實(shí)腦得康口服液中地黃、人參、川芎中成分能夠上調(diào)室旁核小細(xì)胞Apelin受體mRNA表達(dá)，進(jìn)而提高體內(nèi)Apelin-13蛋白水平，發(fā)揮腦神經(jīng)保護(hù)作用〔12〕。