秦永燕

(長(zhǎng)治學(xué)院 生物科學(xué)與技術(shù)系，山西 長(zhǎng)治 046011)

0 引言

蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)是以蠶豆為材料，采用細(xì)胞生物學(xué)手段，利用細(xì)胞微核率來(lái)表示材料受損傷程度的一種監(jiān)測(cè)遺傳毒物的方法.微核(micronucleus，MCN)是指位于細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立于主核、直徑為主核1/3～1/20、完全與主核分開(kāi)的圓形或橢圓形的微小核[1].微核形成頻率可反映細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷程度，而遺傳物質(zhì)損傷又是機(jī)體癌變的原因之一[2].

大蒜(AlliurnsativumL．)多年生草本，百合科蔥屬，其提取液具有抑菌、保鮮、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗癌變等作用.目前，利用蠶豆根尖微核試驗(yàn)研究大蒜提取液對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)蠶豆根尖微核的影響還未見(jiàn)報(bào)道.因此，本文利用蠶豆根尖的微核實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組和不同濃度梯度的提取液實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行微核統(tǒng)計(jì)，計(jì)算并比較微核千分率，探討大蒜提取液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的抑制作用，為大蒜的進(jìn)一步研究提供一定的科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

大蒜，白皮大蒜，購(gòu)于山西省長(zhǎng)治市博源超市.

蠶豆(松滋青皮豆)，購(gòu)于長(zhǎng)治市種子公司.

環(huán)磷酰胺溶液(山西普德藥業(yè)有限公司)：用蒸餾水與環(huán)磷酰胺固體配制0.1g/L環(huán)磷酰胺溶液，置于冰箱備用.

2 研究方法

2.1 大蒜提取液的制備

1)生食大蒜液的提取 稱取10 g去皮大蒜，加入100 mL蒸餾水，三次勻漿，過(guò)濾，離心(8 000 r/min)，取上清，定容至100 mL，使終濃度為0.1 g/mL，置于4℃保存?zhèn)溆?

2)熟食大蒜液的提取 稱取10 g去皮大蒜，加入100 mL蒸餾水，煮熟，勻漿，過(guò)濾，離心(8 000 r/min)，取上清，定容至100 mL，使終濃度為0.1 g/mL，置于4℃保存?zhèn)溆?

2.2 蠶豆根尖細(xì)胞微核率的測(cè)定

將濃度為1.0 g/mL的大蒜提取液進(jìn)行梯度稀釋，分別與環(huán)磷酰胺溶液以1∶1體積混合，使提取液終濃度分別稀釋至0.05，0.04，0.03，0.02，0.01，0.005 g/mL，環(huán)磷酰胺溶液稀釋到5 mg/mL.以蒸餾水作陰性對(duì)照，5 mg/mL環(huán)磷酰胺作陽(yáng)性對(duì)照處理蠶豆根尖.每個(gè)濃度至少檢查5個(gè)根尖，每個(gè)根尖至少觀察1 000個(gè)間期細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)觀察到的微核數(shù)，按下式計(jì)算各項(xiàng)參數(shù)：

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

3.1 生食大蒜提取液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的影響

生食大蒜提取液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的影響見(jiàn)表1，由表1可知，生食大蒜提取液均不同程度使蠶豆根尖細(xì)胞產(chǎn)生微核，且微核率均大于陰性對(duì)照(0.3‰)，小于陽(yáng)性對(duì)照(11.2‰)，當(dāng)生食大蒜提取液濃度高于0.03 g/mL時(shí)，微核指數(shù)均高于1.5[3]，因此，一定濃度的大蒜提取液處理蠶豆根尖組織會(huì)誘導(dǎo)微核的產(chǎn)生，具有致突變作用.

表1 生食大蒜提取液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的影響

3.2 生食大蒜和環(huán)磷酰胺聯(lián)合作用對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的影響

生食大蒜與環(huán)磷酰胺對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核率、微核指數(shù)和微核抑制率的影響見(jiàn)表2.由表2可知處理組生食大蒜提取液與環(huán)磷酰胺聯(lián)合處理的蠶豆根尖微核率時(shí)，隨著處理濃度的增加，微核率逐漸減少，當(dāng)生食大蒜濃度為0.05 g/mL時(shí)，微核率最低，為2.1±0.05‰，微核抑制率達(dá)到81.1%.當(dāng)生食大蒜提取液濃度高于0.01 g/mL時(shí)，微核指數(shù)均低于1.5，表明生食大蒜提取液有明顯的抗突變作用.

表2 生食大蒜和環(huán)磷酰胺對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的影響

3.3 熟食大蒜和環(huán)磷酰胺聯(lián)合作用對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的影響

熟食大蒜與環(huán)磷酰胺對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核率、微核指數(shù)和微核抑制率的影響見(jiàn)表3.由表3可知，環(huán)磷酰胺濃度為5 mg/mL時(shí)，隨著熟食大蒜濃度的增加，微核率在逐漸下降，微核抑制率逐漸上升，當(dāng)熟食大蒜濃度為0.05 g/mL時(shí)，微核率為5.2±0.41‰，高于陰性對(duì)照組，微核抑制率為53.3%，但是處理組微核指數(shù)均大于1.5.

表3 熟食大蒜和環(huán)磷酰胺對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的影響

4 討論

4.1 大蒜提取液對(duì)微核的抑制作用

生食大蒜提取液?jiǎn)为?dú)處理蠶豆根尖時(shí)，隨著處理濃度的增加，微核率逐漸增大，當(dāng)濃度高于為0.03 g/mL時(shí)，微核指數(shù)高于1.5，表明高濃度的大蒜提取液可誘導(dǎo)微核的產(chǎn)生，具有一定的致突作用.但是大蒜提取液和環(huán)磷酰胺聯(lián)合處理蠶豆根尖時(shí)，隨著處理濃度的增加，微核率逐漸減少，當(dāng)濃度為0.05 g/mL時(shí)，微核率為2.1±0.44‰，低于陰性對(duì)照(3.0‰)，微核抑制率達(dá)到81.1%，表明大蒜提取液具有一定的抗突變作用.這與大蒜具有抗癌作用[4]基本一致.

4.2 比較生食與熟食大蒜的抗微核作用

本實(shí)驗(yàn)在模擬人們?nèi)粘Ｉ钪猩澈褪焓硟煞N不同的食用方法制得大蒜提取液，分別與環(huán)磷酰胺聯(lián)合處理蠶豆根尖，結(jié)果表明，環(huán)磷酰胺濃度為5 mg/mL時(shí)，生食大蒜提取液和熟食大蒜提取液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的抑制作用不同，當(dāng)大蒜濃度為5 mg/mL時(shí)，生食大蒜的微核抑制率81.1%，而熟食大蒜的微核抑制率53.3%，微核指數(shù)為1.71，仍高于1.5.說(shuō)明，生食大蒜的抗突變作用高于熟食大蒜.大蒜中含有鈣、磷、鐵、硒、鍺等微量元素和、維生素C、硫胺素、核黃素、尼克酸等一些有機(jī)化合物質(zhì)，另外還含有SOD酶等活性蛋白質(zhì)，這些物質(zhì)的含量與狀態(tài)都可能對(duì)大蒜的抗癌作用產(chǎn)生影響.但是，在高溫條件下，制取大蒜液可能使油性揮發(fā)物質(zhì)大蒜素?fù)]發(fā)散失[5]，同時(shí)會(huì)使蛋白質(zhì)SOD酶變性而失活.有研究表明加熱烹飪處理后的大蒜SOD損失70%以上[6]，因此，高溫加熱制取的大蒜提取液的抗微核效果明顯比生食大蒜提取液效果差.在日常生活中，生食大蒜具有更好的保健價(jià)值.

4.3 過(guò)量食用大蒜的會(huì)產(chǎn)生危害

大蒜提取液處理蠶豆根尖的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，濃度過(guò)高的大蒜提取液會(huì)誘導(dǎo)蠶豆根尖細(xì)胞微核的產(chǎn)生，且在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)大蒜提取液濃度越高其微核誘變率越高，所以可初步推測(cè)大蒜過(guò)量食用會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害.傳統(tǒng)上講大蒜不可多食，食用過(guò)量的大蒜不僅沒(méi)有保健作用，而且對(duì)人體有害，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)量食用大蒜對(duì)眼睛和腸胃都有傷害[7].有研究表明，成人的安全大蒜泥劑量為12.5克/天(體重為50公斤的人)[8].