白曉蘇 黎智森

[摘要] 目的 研究高表達AQP7的 3T3-L1 脂肪細胞的脂代謝變化。 方法 構(gòu)建高表達的AQP7的 3T3-L1 脂肪細胞，測定AQP7mRNA和AQP7蛋白表達的變化，以及脂代謝指標甘油和脂肪酸的變化。 結(jié)果 與對照組比較AQP7mRNA和AQP7蛋白表達明顯增加差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），培養(yǎng)基中甘油的水平也升高差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），脂肪酸的水平無變化差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結(jié)論 高表達的AQP7蛋白，可顯著減少脂肪細胞內(nèi)甘油，減少脂肪細胞體積，減輕胰島素抵抗。

[關鍵詞] 脂肪細胞；水通道蛋白7；甘油

[中圖分類號] R58 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2018）01（b）-0025-02

隨著生活環(huán)境的改變，2 型糖尿病的（T2DM）的發(fā)生逐漸增加，T2DM是心腦血管疾病的獨立危險因素。肥胖與T2DM的發(fā)生密不可分，胰島素抵抗是二者的共同土壤，脂肪細胞的體積肥大和脂肪細胞數(shù)量的增加是引起體內(nèi)脂肪蓄積及代謝異常的重要誘因[1-2]。脂肪細胞內(nèi)的與甘油轉(zhuǎn)運的的水通道蛋白7（AQP7）表達的下降，與肥胖、胰島素抵抗和2型糖尿病的形成有關。該文將探討高表達AQP7的3T3-L1 脂肪細胞的脂代謝的變化。

1 材料與方法

1.1 材料

pMD18T載體；Lipofectamine 2000及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)染試劑盒；3T3脂肪細胞。PCR儀，熒光定量儀。RNA 提取及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自TaKaRa 公司；抗AQP7 抗體購自艾博抗貿(mào)易有限公司，甘油含量酶法測定試劑盒購自普利萊基因有限公司； 游離脂肪酸測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，其余試劑為市售分析純。

1.2 方法

高表達APQ7的3T3脂肪細胞的建立對合成ap2的-63bp/5.4-4.9kb的啟動調(diào)節(jié)區(qū)和AQP7基因的CDS區(qū)全序列進行分析，構(gòu)建載體 ap2-AQP7。 構(gòu)建的腺病毒表達載體ap2-AQP7經(jīng)Pac I消化后Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染293A細胞，包裝病毒，收集病毒原液，并采用免疫法檢測腺病毒滴度，以不含ap2-AQP7的空載腺病毒作為陰性對照。轉(zhuǎn)染載體ap2-AQP7的3T3-L1 脂肪細胞培養(yǎng)至生長狀態(tài)良好后，進行誘導分化。病毒感染3T3脂肪細胞后48 h收集細胞，行RT-Q-PCR檢測，估算目的基因含量，建立高表達的APQ7的3T3脂肪細胞模型。

測定脂肪細胞的AQP7的蛋白水平以及甘油、FFA 的含量的測定用試劑盒檢測AQP7的蛋白水平，以及測定培養(yǎng)基的甘油、游離脂肪酸的含量。

1.3 統(tǒng)計方法

采用 SPSS 18.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料用平均數(shù)±標準差（x±s）表示行t檢驗，組間比較采用單因素方差分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 3T3脂肪細胞的AQP7mRNA以及蛋白的表達的變化與對照組比較

試驗組的AQP7mRNA和AQP7蛋白的表達明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。見圖1。

2.2 培養(yǎng)基的甘油、脂肪酸的測定

測定培養(yǎng)基上清的甘油含量，發(fā)現(xiàn)甘油含量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05 ）。脂肪酸的含量無變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05 ）。見圖1。

3 討論

糖脂代謝的異常形成和加重了糖尿病胰島素抵抗。葡萄糖進入脂肪組織可以轉(zhuǎn)化為甘油三酯，而脂肪組織可釋放游離脂肪酸參加氧化供能。因此，游離脂肪酸、甘油三酯、葡萄糖構(gòu)成極其復雜的能量代謝網(wǎng)絡，這一網(wǎng)絡的某些環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題將導致肥胖、胰島素抵抗、糖尿病、血脂紊亂、動脈粥樣硬化、泡沫細胞形成等病理變化[3]。迄今為止，在哺乳動物體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)13種水通道蛋白亞型[4]。脂肪組織只表達AQP7，尤其是在內(nèi)臟脂肪組織[5]。該課題組[6]利用只在成熟脂肪細胞表達的aP2基因，將其與AQP 7cDNA連接，轉(zhuǎn)入在脂肪組織內(nèi)并特異性高表達，與對照組比較，試驗組的AQP7mRNA和AQP7蛋白的表達明顯增加。高表達AQP7的3T3脂肪細胞株的培養(yǎng)基中，甘油含量明顯高于對照組，亦進一步證明，AQP7蛋白的表達增加可促進甘油向脂肪細胞外進行排泄，為肥大的脂肪細胞減負[7]。在該實驗中，脂肪酸的含量無變化。MaedaN 等[8]對AQP7缺陷小鼠血漿中的甘油測定發(fā)現(xiàn)，其濃度明顯降低，但游離脂肪酸的濃度無顯著變化，這說明脂肪細胞膜上的AQP7只選擇性介導了甘油從細胞中的釋放而不運輸脂肪酸。這將利于維持組織液和血漿中中的游離脂肪酸穩(wěn)定，不僅限制了脂肪酸的再次酯化，而且也防止了高游離脂肪酸水平抑制葡萄糖氧化，加重胰島素抵抗[9]，加重肥胖。

綜上所述，構(gòu)建的含有ap2-AQP7的脂肪細胞可高表達的AQP7mRNA和AQP7蛋白，脂肪細胞內(nèi)高表達的AQP7可顯著減少了脂肪細胞內(nèi)的甘油含量，將甘油向細胞外轉(zhuǎn)運，進而縮小了脂肪細胞的體積，同時游離脂肪酸的水平的穩(wěn)定，不加重胰島素抵抗所帶來的對機體的損壞。

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（收稿日期：2017-10-24）