陳杰，劉建東，王小龍，趙建軍※，閆喜軍※

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所，長春 130112；2.黃島出入境檢驗檢疫局，山東 黃島 266555）

水貂易感病毒的相關(guān)研究中，血液是必不可少的分析材料，其涉及到淋巴細胞的分離、中和抗體滴度的測定、血液中病毒抗原的檢測，這些試驗均需要大量且高質(zhì)量的血液樣本[1～3]。水貂全身被毛、體型較小、行動靈活，捕捉和固定都比較困難，采血更是難以進行。臨床上多采用剪趾甲或者心臟采血的方法。剪趾甲采血方法是緊貼腳趾肉墊剪掉無名指或中指的指甲，待有血液流出后，用容器接取，采血結(jié)束后用高錳酸鉀止血消毒。心臟采血則是先用手指感觸水貂的心跳處，見針管有回血，緩慢抽出血液，然后止血消毒[4]。這2種方法都有很多弊端，剪趾甲采血不能保證無菌，心臟采血對心臟損傷較大，也易傷及其他臟器，容易造成內(nèi)臟出血，影響正常生長，通常因針頭刺破心臟和肝臟導致出血過多而死，并且這2種方法都不能連續(xù)多次采血。近年來，很多研究學者將采血的部位鎖定在了水貂的靜脈，國內(nèi)、外均見有對不同靜脈的報道，如：尾靜脈[3]、后肢趾間靜脈[5]，但這些靜脈僅能滿足少量血液的需要，考慮到科研時需要用到較大量的血液，頸靜脈和前腔靜脈成為備選[6]，因頸靜脈在實際操作中不好定位，故選擇前腔靜脈采血法來替代現(xiàn)有水貂的采血方法。

1 材料

雌性水貂（吉林中特農(nóng)業(yè)科技有限公司）；舒泰（法國維克有限公司）；靜脈血樣采集針（濟寧市恒泰醫(yī)療用品有限公司）；靜脈真空血樣采集管（瀏陽市三力醫(yī)用科技發(fā)展有限公司）；1mL注射器（圣光醫(yī)用制品有限公司）。

2 方法

2.1 試驗分組

隨機選取10只47日齡水貂（分別編號為1～10）進行前腔靜脈采血，每只水貂采血1.5mL，測定采血時間。

對于同一批水貂分別于47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡時隨機選取16只，分別采血8mL；在47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡時分別隨機選取16只水貂作為對照，不做采血處理。觀察水貂采血后的體征和計算存活率。

2.2 保定和麻醉

將水貂適應(yīng)性飼養(yǎng)2d～3d后進行采血。水貂俯臥放置，按10mg/kg～15mg/kg臀部肌肉注射舒泰，達到呼吸平穩(wěn)、全身肌肉松弛、鉗夾皮膚反應(yīng)消失的最適麻醉指征。

2.3 定位和穿刺

將胸骨柄及其周圍洗干凈、擦干，再用酒精棉球由內(nèi)而外進行消毒。食指和中指在胸骨柄末端的兩側(cè)，輕輕按壓，靜脈血樣采集針以胸骨柄的末端為基準點，與胸骨板成30°～45°，體正中線稍向右向心方向穿刺進針，待血液沿著軟質(zhì)硅膠管流出（圖1），靜脈真空血樣采集管接住，待血流穩(wěn)定后，用手掌輕輕擠壓心臟部位，有利血液流出。采血完畢，消毒止血，血止后將水貂俯臥放置回籠子，待其蘇醒（圖2）。

圖2 水貂采血部位示意圖Fig.2 The Schematic diagram of blood sampling site in mink

3 結(jié)果

3.1 前腔靜脈采血結(jié)果和所需時間

水貂臀部肌肉注射舒泰，2min～3min后即進入麻醉狀態(tài)，麻醉持續(xù)時間為30min～45min。每只水貂采集1.5mL血液所需時間為0.4min～0.6min，這種方法簡便易行，采血時間短，可以滿足科研試驗對于血液的需求。水貂前腔靜脈采血的采血量和采血時間如表1所示。

表1 水貂前腔靜脈采血的采血量和采血時間Table 1 The volume and time of collecting blood from anterior vena in minks

3.2 不同日齡水貂采血結(jié)果

47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡水貂采血8mL。47日齡、54日齡水貂均出現(xiàn)不適癥狀，存活率分別為68.75%和93.75%，表明47日齡、54日齡水貂不適宜采集8mL的血液；61日齡水貂出現(xiàn)不適的癥狀，采食量減少，活動遲緩；75日齡、89日齡水貂未出現(xiàn)明顯的不適感，存活率均為100%，表明在采集8mL血量的情況下，75日齡以上為最佳。不同日齡水貂采血結(jié)果如表2所示。

表2 不同日齡水貂采血結(jié)果Table 2 The results of blood sampling at different age for minks

4 討論

臨床上多采用剪趾甲或心臟采血的方法采集水貂血液。剪趾甲采血方法在采血過程中血液暴露于空氣中，極易造成血液污染，影響血液指標的檢測和分析，而且剪趾甲人為造成動物創(chuàng)傷，使動物疼痛，增加感染機率，動物較長時間才能恢復(fù)。與此同時，若需血液量較大，采集時間會很長，這樣長時間的保定對動物會產(chǎn)生極大的刺激，不利于動物健康。心臟采血避免血液造成污染的可能，而且血流速度快，但心臟采血極易照成內(nèi)臟損傷而出血，易造成采血水貂死亡，且不可循環(huán)采血。

由于前兩種采血方法存在很多問題，且尾靜脈、后肢趾間靜脈等小靜脈不能滿足大量血液的需求，頸靜脈又不好定位。參考文獻[6，7，8]提出了前腔靜脈真空采血法。前腔靜脈真空采血法有以下幾點優(yōu)勢[9，10]：血液采集過程中基本上處于無菌的環(huán)境中；采血針采血易于固定；可縮短血液收集時間，保證檢測和分析結(jié)果穩(wěn)定；易操作，整個采血過程可以標準化進行；采血量大、創(chuàng)口小，短時間內(nèi)可重復(fù)采血。本試驗對10只水貂麻醉后采血，采血后水貂無明顯影響，表明前腔靜脈真空采血法完全可以替代現(xiàn)有水貂采血的方法。

本試驗對不同日齡水貂進行了采血，75日齡以上水貂采血8mL最佳，對水貂無明顯影響，這可以為血液的采集提供借鑒。

為減少實驗動物的痛苦并保持安靜，需要對動物進行麻醉，待動物已進入麻醉狀態(tài)[11]時，方可進行試驗。同時考慮到動物種屬間的差異等情況，不同動物應(yīng)采用不同的麻醉方法和麻醉劑[12]。本試驗采用舒泰麻醉藥對水貂進行臀部肌肉注射，在其麻醉的狀態(tài)下采血，避免了動物的應(yīng)激反應(yīng)。

本試驗建立的前腔靜脈采血方法符合1988年頒布的《實驗動物管理條例》第六章第29條中“從事實驗動物工作的人員對實驗動物必須保護，不得戲弄或虐待”的規(guī)定[13]。這不僅達到“3R”原則[14]的要求，降低了血液浪費，減少了實驗動物的損傷，而且節(jié)約了動物資源；同時在科學原則的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了實驗程序和實驗技術(shù)，減輕了給動物造成的與實驗無關(guān)的疼痛和緊張不安的情緒。