俞寅 蔣梅峰 馬宏偉

【摘要】建立了小麥中11種有機磷農(nóng)藥殘留的高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測定法。樣品經(jīng)乙腈提取，用環(huán)乙烷一乙酸乙酯（1+1）稀釋后經(jīng)GPC凈化，采用電化學(xué)噴霧離子源在正離子模式下測定。結(jié)果表明11種有機磷農(nóng)藥殘留的線性關(guān)系良好，在低、中、高3個添加水平下的加標(biāo)回收率在65.0%～120.0%之間，RSDs為0.24%～8.34%。該方法快速、簡便、準(zhǔn)確，可用于原糧中有機磷農(nóng)藥的多成分測定。

【關(guān)鍵詞】小麥（原糧）；有機磷農(nóng)藥；HPLC-MS/MS

我國生產(chǎn)的有機磷農(nóng)藥絕大多數(shù)為殺蟲劑。有機磷類農(nóng)藥對人的危害作用從劇毒到低毒不等。有機磷農(nóng)藥可經(jīng)消化道、呼吸道及完整的皮膚和粘膜進入人體。職業(yè)性農(nóng)藥中毒主要由皮膚污染引起。吸收的有機磷農(nóng)藥在體內(nèi)分布于各器官，其中以肝臟含量最大，腦內(nèi)含量則取決于農(nóng)藥穿透血腦屏障的能力。

目前分析食品中的農(nóng)殘國標(biāo)方法主要以氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用等方法為主，這些方法根據(jù)不同種類的農(nóng)藥性質(zhì)而選擇不同儀器設(shè)備及處理方法。隨著各種高精尖儀器的成功應(yīng)用，以及各國對環(huán)保、健康以及經(jīng)濟成本的注重，快速篩查技術(shù)、高通量的檢測技術(shù)，即專屬、高效、經(jīng)濟、快速的前處理手段，多成分同時分析的檢測手段以及成功避免假陽性的技術(shù)已成為未來檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法能有效地檢測出糧食中有機磷農(nóng)藥殘留含量，檢測方法靈敏度高。前處理采用凝膠滲透色譜技術(shù)具有凈化效果好、重現(xiàn)性好、可循環(huán)使用、自動化程度高等優(yōu)點，該項技術(shù)在農(nóng)殘分析的應(yīng)用上也日漸廣泛。本項目采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合凝膠滲透色譜法對糧食中的有機磷農(nóng)藥殘留進行了分析檢測。建立了適用范圍廣、操作簡便的糧食中有機磷農(nóng)藥殘留檢測分析方法。

1材料與方法

1.1材料與試劑

無水硫酸鈉、乙腈（農(nóng)殘級）、環(huán)乙烷一乙酸乙酯（1+1）（色譜純）、甲醇（色譜純）、0.1%甲酸溶液。

1.2儀器與設(shè)備

液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國Thermo；60057-60030液相色譜-TSQ-40500三重串聯(lián)四級質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）；凝膠滲透色譜儀：LabTechGPC；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器RE-52系列；氮氣吹干儀：北京斯珀特SPT-16；電子天平：奧豪斯儀器scoutSE。

1.3樣品處理

1.3.1提取

準(zhǔn)確稱取10g樣品，放入盛有15g無水硫酸鈉的離心管中，加入35mL乙腈，均值提取1min，3800r/min離心5min，上清液通過裝有無水硫酸鈉的筒形漏斗，收集濾液置于梨形瓶中；殘渣再用30mL乙腈提取一次，合并提取液，將收集提取液通過40℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至約0.5mL。

1.3.2凈化

用10mL環(huán)乙烷一乙酸乙酯（1+1）溶解梨形瓶中的濃縮液，吸取5mL于凝膠滲透色譜儀上凈化，收集12～24min的溶液，于60℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至約0.5mL，用氮吹儀吹干。

1.3.3定容

用lmL乙腈+水（3+2）將其溶解，用0.22μm濾膜過濾，供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.4液相色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱：hypersil GOLD-C18，1.9μm，100x2.1mm；柱溫：40%；流速：200μL/min；進樣量：40μL。

以三重四級桿質(zhì)譜儀作為檢測器，電化學(xué)噴霧離子源（ESI）；霧化氣：氮氣；離子噴霧電壓：3 500V；離子傳輸管溫度：350；鞘氣壓力：45個單位；輔助氣壓力15個單位。

2結(jié)果與分析

2.1有機磷農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)

11種有機磷農(nóng)藥為正離子采集模式，各化合物質(zhì)譜參數(shù)見表1，色譜圖見圖1。

2.2線性回歸分析

將有機磷標(biāo)準(zhǔn)品配置成標(biāo)準(zhǔn)工作液做線性回歸分析，以峰面積v為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)，同時以空白基質(zhì)測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（測定次數(shù)為20次）計算方法檢出限，試驗結(jié)果（見表2）。各農(nóng)藥對照品在0.01～1.0μg.mE-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2≥0.99，方法檢出限為0.000 4～0.0141μg·mL-1。

2.3回收率試驗

以小麥空白基質(zhì)進行加標(biāo)回收試驗，添加量主要參照食品中農(nóng)藥最大殘留限量（MRL）進行添加，添加水平為0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL，考察方法的準(zhǔn)確度和精密度。

準(zhǔn)確稱取10.0g若干份小麥樣品，按3個添加水平分別加入相應(yīng)量的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，做加標(biāo)回收試驗，每個添加水平為6組平行試驗。按照試驗方法進行提取、凈化和檢測，計算平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果（見表3）。

由表3可知，小麥樣品中添加11種有機磷農(nóng)藥的平均回收率為65.0%～120.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.24%～8.34%。結(jié)果表明，該方法測定小麥中有機磷農(nóng)藥的準(zhǔn)確度和精密度良好，符合有機磷農(nóng)藥的分析測定要求。

3結(jié)論

本文初步分析了GPC凈化技術(shù)及LC-MS/MS分析技術(shù)在谷物中有機磷農(nóng)藥殘留的應(yīng)用，建立了小麥中11種有機磷農(nóng)藥的分析方法，方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、加標(biāo)回收率、方法檢出限等均滿足檢測要求。本方法定性可靠、定量準(zhǔn)確、靈敏度高，可應(yīng)用于谷物中同時分析多種有機磷農(nóng)藥殘留的檢測工作。