周麗霞 曹紅星

摘要：【目的】研究低溫脅迫下WRKY轉錄因子基因表達特性，并分析其與油棕抗寒性的相關性，為闡明WRKY轉錄因子在油棕生長和低溫響應機制中的功能和作用提供理論參考?！痉椒ā恳杂妥仄贩NXJS30和SJ64為材料，對其進行低溫馴化處理（0 h、1 d和7 d）及冷處理（10 ℃ 4 h、8 ℃ 4 h、6 ℃ 4 h、4 ℃ 4 h和2 ℃ 4 h），利用實時熒光定量PCR（qPCR）檢測不同處理時間的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因表達特性，并分析其與油棕抗寒性的相關性。【結果】WRKY1和WRKY7基因在低溫馴化結束時的表達量較冷處理結束時高，說明其在低溫馴化過程中對XJS30的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用。WRKY22、WRKY40和WRKY55基因均在XJS30冷處理中表達量最高，說明其在冷處理過程中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。WRKY1基因在低溫馴化結束時的表達量較冷處理結束時低，說明其在冷處理過程中對SJ64的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。WRKY7基因在低溫馴化結束時的相對表達量較冷處理結束時高，說明其在低溫馴化過程中對SJ64的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用。【結論】油棕的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因均屬于低溫應激反應型基因。

關鍵字： 油棕；WRKY轉錄因子；低溫脅迫；實時熒光定量PCR（qPCR）；表達特性

中圖分類號： S565.9 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2018）08-1490-08

0 引言

【研究意義】油棕（Elaeis guineensis Jacq.）屬棕櫚科單子葉多年生木本油料作物，是世界上產(chǎn)油率最高的油料植物之一（Basri et al.，2005），在我國海南、廣東、廣西及云南等?。▍^(qū)）均有種植。其喜高溫，在月平均溫度21 ℃以上的環(huán)境下才能正常生長，最適生長溫度25～28 ℃（Verheye，2010），當氣溫低于18 ℃時，其生長緩慢，生殖器官發(fā)育受阻，產(chǎn)油量嚴重減少（來自于中國氣候資源數(shù)據(jù)庫）?？梢姡蜏厥菦Q定油棕產(chǎn)油量及品質(zhì)的非生物因素之一。研究發(fā)現(xiàn)，WRKY是植物最大的轉錄因子家族之一，其C端有一個鋅指結構，N端有一個由約60個氨基酸殘基組成的WRKYGQK結構域（謝政文等，2016），參與調(diào)控多種植物的生長發(fā)育、應激反應、生物及非生物脅迫等（余迪求等，2006；李元元等，2017；王秋穎等，2017）。因此，研究油棕WRKY基因在低溫脅迫下的表達特性，對揭示其功能具有重要意義。【前人研究進展】自Ishiguro和Nakamura于1994年首次從馬鈴薯中克隆獲得WRKY基因以來，又陸續(xù)從擬南芥（Pater et al.，1996）、油菜（Deyholos et al.，2009）、甘薯（王連軍等，2013）、蒺藜苜蓿（宋輝和南志標，2014）、辣椒（刁衛(wèi)平等，2015）、冬小麥（王明芳等，2015）、谷子（邢國芳等，2016）、桃（谷彥冰等，2016）、玉米（決登偉等，2017a）、桑樹（劉潮等，2017）和櫻桃（徐麗等，2018）等克隆獲得WRKY基因。研究表明，WRKY轉錄因子廣泛參與植物多種生理生化過程，如白梨的103個PbWRKY基因中，有44個PbWRKY在干旱脅迫下表達上調(diào)（Huang et al.，2008）；擬南芥AtWRKY25、AtWRKY26和AtWRKY33基因在低溫和高鹽誘導下表達明顯上調(diào)（付乾堂和余迪求，2010）；陸地棉GhWRKY4基因在鹽和干旱脅迫下誘導表達，GhWRKY5在干旱脅迫下誘導表達（張娜等，2012）；水稻OsWRKY基因在高鹽、干旱、低溫脅迫和脫落酸信號響應下具有重疊表達的特性，說明其在非生物逆境中具有功能多效性及相互間具有協(xié)同調(diào)控作用（孫利軍等，2014；劉夢佳和李海峰，2016）；香蕉MaWRKY11在冷脅迫誘導下表達上調(diào)，說明其與早期應答蛋白MaERD相互作用以調(diào)控香蕉的冷脅迫抗性（徐群剛等，2015）；橡膠樹HbWRKY27基因在割膠和乙烯等調(diào)控膠乳代謝中發(fā)揮重要作用，且可能與橡膠樹死皮病的發(fā)生相關（閆棟等，2016）；高粱中有10個PmWRKY基因表達受干旱脅迫誘導，16個PmWRKY基因表達受低溫脅迫誘導（Yue et al.，2016）；玉米中ZmWRKY22-like、ZmWRKY55-like和ZmWRKY74-like基因在果實發(fā)育過程中發(fā)揮作用，其中ZmWRKY55-like和ZmWRKY74-like基因分別參與玉米對鹽和低溫脅迫的響應（決登偉等，2017b，2017c）。綜上，WRKY轉錄因子在植物生長發(fā)育和逆境脅迫響應中均發(fā)揮非常重要的作用?！颈狙芯壳腥朦c】目前，鮮見有關油棕WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因在低溫協(xié)迫下表達特性的研究報道?！緮M解決的關鍵問題】以兩個抗寒能力差異較大的油棕品種XJS30和SJ64為材料，運用生物信息學方法從其基因組中得到WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55基因序列，通過實時熒光定量PCR（qPCR）分析其在低溫脅迫下的表達情況，為揭示油棕WRKY基因在響應逆境脅迫中的表達特性提供理論參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試油棕品種為XJS30和SJ64，分別采集于我國云南省保山市和海南省文昌市，其中XJS30是由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院椰子研究所油棕種質(zhì)資源圃經(jīng)過多年的引種試種選育出抗寒性較強的油棕品種，其抗寒性較SJ64弱。主要試劑：RNA提取試劑盒購自海南海道森科技有限公司，Prime Script RT試劑盒和SYBR Green熒光定量PCR試劑盒購自寶生物工程（大連）有限公司，其他試劑購自?？诃偵饺R客（海南）科技服務中心。主要儀器設備：三色光培養(yǎng)箱（LED-30HL1，美國），超速冷凍離心機（Eppendorf Centrifuge 5810 R型，德國）和實時熒光定量PCR儀（安捷倫Mx 3000P，美國）等。

1. 2 樣品處理及采集

選取同一時期培育，植株粗細、大小相近，無病蟲害，高約75 cm，地徑35～40 cm的半年生實生油棕幼苗進行盆栽，每盆栽1株，每個品種各栽3株，共6株，將其置于可控植物三色光培養(yǎng)箱。首先，對油棕幼苗進行低溫馴化處理（晝17 ℃/夜12 ℃），分別在0 h、1 d和7 d 3個時間點進行取樣，待低溫馴化處理7 d后進行冷處理，并在對應的處理時間點進行取樣，具體處理及取樣時間見表1。

1. 3 總RNA提取及cDNA第一鏈合成

采用植物RNA提取試劑盒提取油棕葉片的總RNA，然后參照Prime Script RT試劑盒說明反轉錄合成cDNA第一鏈。

1. 4 引物設計及合成

從NCBI搜索獲得油棕基因組序列，從Arabidopsis Information Resource（TAIR）數(shù)據(jù)庫搜索獲得WRKY基因，并與油棕基因組序列進行比對，找出同源基因。通過蛋白氨基酸序列比對，將存在WRKY保守結構域的蛋白編碼基因判定為油棕WRKY基因。利用Primer 5.0設計油棕WRKY基因的qPCR引物，以Actin為內(nèi)參基因，引物序列見表2，由北京六合華大基因科技股份有限公司合成。

1. 5 WRKY基因的qPCR檢測

qPCR反應體系25.0 ?L：2×SYBR Green Master Mix 12.5 ?L，10 ?mol/L的正、反向引物各1.0 ?L，40 ?mol/L cDNA模板2.0 ?L，ddH2O補足至25.0 ?L。擴增程序：94 ℃預變性5 min；94 ℃ 10 s，58 ℃ 25 s，72 ℃ 30 s（延伸階段采集信號），進行30個循環(huán)后作溶解曲線（95～65 ℃，0.1 ℃/s）。每個樣品重復3次，結果采用2-ΔΔCt法計算基因的相對表達量。當基因表達量上調(diào)或下調(diào)大于2倍時判定為存在表達差異。

2 結果與分析

2. 1 低溫協(xié)迫下WRKY1基因的表達情況

如圖1-A所示，8個處理下XJS30的WRKY1基因表達量為0.21～2.30；與處理1相比，WRKY1基因在處理3、處理4、處理5和處理6中的表達量均顯著上升（P<0.05，下同），在處理2和處理8中的表達量均顯著降低，在處理7中的表達量略降低，但未達顯著水平（P>0.05，下同），且WRKY1基因在冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）降幅較大，推測WRKY1基因在低溫馴化過程中對XJS30的抗寒性構成中發(fā)揮調(diào)控作用。如圖1-B所示，8個處理下SJ64的WRKY1表達量為2.61～50.30；與處理1相比，WRKY1基因在處理2、處理5、處理6、處理7和處理8中的表達量均顯著上升，在處理4中的表達量略上升，但未達顯著水平，在處理3中的表達量顯著降低，且WRKY1基因在冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）升幅較大，且在處理8中的表達量達最大值，推測WRKY1基因在冷處理過程中在SJ64的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。由圖1-C可知，在處理1中XJS30相對于SJ64的WRKY1基因表達量為7.50，除處理3中XJS30相對于SJ64的WRKY1基因表達量較處理1顯著上升外，其他處理中的WRKY1基因表達量較處理1均顯著降低，XJS30相對于SJ64的WRKY1基因表達量在低溫馴化結束時（處理3）達最大值，進一步證實WRKY1基因在低溫馴化過程中對XJS30的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用，在冷處理過程中對SJ64的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。

2. 2 低溫協(xié)迫下WRKY7基因的表達情況

如圖2-A所示，8個處理下XJS30的WRKY7基因表達量為0.15～1.10；與處理1相比，WRKY7基因在處理2的表達量無顯著變化，在處理3～處理8中的表達量均顯著降低，尤其是處理3、處理7和處理8的降幅較大，且WRKY7基因在冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）低，推測WRKY7基因在低溫馴化過程中對XJS30的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用。由圖2-B可知，8個處理下SJ64的WRKY7基因表達量為0.40～5.80；除WRKY7基因在處理6中的表達量較處理1顯著降低外，在其他處理中的表達量均顯著上升，且WRKY7基因在SJ64冷處理結束時（處理8）的相對表達量較低溫馴化結束時（處理3）低，推測WRKY7基因在低溫馴化過程中對SJ64的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用。由圖2-C可知，在處理1中XJS30相對于SJ64的WRKY7基因表達量為3.20，除在處理6中XJS30相對于SJ64的WRKY7基因表達量較處理1顯著上升至最大值外，在其他處理中的表達量均顯著降低，表明WRKY7基因受低溫誘導明顯，對XJS30和SJ64的抗寒性均發(fā)揮調(diào)控作用。

2. 3 低溫協(xié)迫下WRKY22基因的表達情況

如圖3-A所示，8個處理下XJS30的WRKY22基因表達量為0.20～3.33；與處理1相比，WRKY22基因在處理2和處理4中的表達量顯著上升，但在處理3、處理5、處理6和處理8中的表達量顯著降低，在處理7中的表達量略降低，未達顯著水平，且WRKY22基因在XJS30冷處理結束時（處理8）的相對表達量較低溫馴化結束時（處理3）變幅小，推測WRKY22基因在低溫馴化中對XJS30抗寒性未發(fā)揮明顯的調(diào)控作用。由圖3-B可知，SJ64的WRKY22基因表達量為0.23～15.30；除處理5中的WRKY22基因表達量較處理1顯著降低外，其他處理中WRKY22基因表達量均顯著上升，其中以處理2升幅最大；WRKY22基因在SJ64冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）降幅較大，可推測WRKY22基因在低溫馴化過程中對SJ64抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。由圖3-C可知，在處理4和處理5中XJS30相對于SJ64的WRKY22基因表達量較處理1顯著升高，但在其他處理的表達量顯著降低；XJS30相對于SJ64的WRKY22基因表達量在處理4中達最大，且較處理1升幅較大，表明WRKY22基因受冷誘導明顯，其在冷處理過程中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。

2. 4 低溫協(xié)迫下WRKY40基因的表達情況

由圖4-A可知，8個處理下XJS30的WRKY40基因表達量為0.60～18.70；與處理1相比，WRKY40基因在處理3和處理7中的表達量顯著下降，在處理6和處理8中的表達量略上升，但未達顯著水平，WRKY40基因在處理2、處理4和處理5中的表達量顯著上升，其中以處理4的表達量升幅最大，推測WRKY40基因在冷處理中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。由圖4-B可知，SJ64的WRKY40基因表達量為0.78～3.81；與處理1相比，在處理2、處理3、處理6和處理7中的表達量顯著上升，其中以處理2的表達量升幅最大，在處理4中的表達量顯著降低，且WRKY40基因在SJ64冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）變幅較小，推測WRKY40基因在低溫馴化和冷處理中對SJ64的抗寒性無明顯調(diào)控作用。由圖4-C可知，在處理1中XJS30相對于SJ64的WRKY40基因表達量為0.31，除處理4中XJS30相對于SJ64的表達量較處理1顯著上升外，其他處理的表達量降低或無顯著上升，表明WRKY40基因受低溫誘導明顯，其在低溫冷處理過程中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。

2. 5 低溫協(xié)迫下WRKY55基因的表達情況

由圖5-A所示，8個處理下XJS30的WRKY55基因表達量為0.13～13.40；WRKY55基因在低溫馴化中（處理1～處理3）的表達量呈顯著降低趨勢，在處理4中的表達量顯著上升至最大值，隨后，在處理5、處理7和處理8中的表達量較處理1顯著上升，僅在處理6中的表達量為顯著降低，推測WRKY55基因在冷處理過程中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。由圖5-B可知，SJ64的WRKY55基因表達量為0.32～1.58；WRKY55基因在低溫馴化中（處理1～處理3）的表達量呈顯著降低趨勢，在處理4中的表達量顯著上升至最大值，隨后，處理5和處理8中的表達量較處理1顯著降低，其他處理中的表達量與處理1無顯著差異；WRKY55基因在SJ64冷處理結束時（處理8）的表達量較低溫馴化結束時（處理3）變幅小，且冷處理過程中的表達量總體上較處理1變幅小，推測WRKY55基因?qū)J64的抗寒性無明顯的調(diào)控作用。由圖5-C可知，處理1中XJS30相對于SJ64的WRKY55基因表達量為0.03；與處理1相比，XJS30相對于SJ64的WRKY55表達量在處理4、處理5和處理8中均顯著上升，以處理5中的表達量最大，在處理2、處理3、處理6和處理7中均下降，但除處理6外均未達顯著水平，表明WRKY55基因受低溫誘導明顯，其在低溫冷處理過程中對XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。

3 討論

近年來，WRKY轉錄因子基因家族已成為研究熱點，在植物的生長發(fā)育及生物和非生物脅迫抗性中均發(fā)揮重要的調(diào)控作用（顏君等，2015）。谷彥冰等（2015）通過對蘋果的42個WRKY基因進行表達分析，發(fā)現(xiàn)不同基因在各組織中的表達量存在差異，其中有7個WRKY基因在各組織中均不表達，有2個基因（MdWRKY1和MdWRKY110）僅在根中表達，有1個基因（MdWRKY16）僅在花中表達。向小華等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，普通煙草的164個WRKY基因中，大部分可在根、莖和葉中表達，但不同基因的表達模式不同，其中NtWRKY26、NtWRKY30和NtWRKY32基因的表達模式受黑脛病病原菌誘導?？拙S龍等（2017）研究表明，甜菜在熱脅迫條件下其BvWRKY16、BvWRKY21、BvWRKY20、BvWRKY22、BvWRKY32、BvWRKY33和BvWRKY34均上調(diào)表達；鹽脅迫條件下其BvWRKY1、BvWRKY6、BvWRKY19、BvWRKY31和BvWRKY33均上調(diào)表達，表明BvWRKY33對熱脅迫和鹽脅迫均有明顯響應。本研究結果表明，冷處理下兩個油棕品種XJS30和SJ64的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40和WRKY55的表達量存在明顯差異，WRKY1基因在XJS30低溫馴化結束時的表達量比冷處理結束時的表達量高，推測WRKY1基因在低溫馴化中對XJS30的抗寒性構成發(fā)揮調(diào)控作用；WRKY1基因在SJ64低溫馴化結束時的表達量比冷處理結束的表達量低，且在冷處理結束時的表達量達最大值，推測WRKY1基因在冷處理過程中對SJ64的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用；WRKY7基因的表達量分別在XJS30冷處理和SJ64低溫訓化中達最大值，推測WRKY7對兩個油棕品種的抗寒性均發(fā)揮調(diào)控作用，進一步證實Xu等（2014）的研究結果即WRKY7基因受低溫誘導表達，并參與信號轉導途徑中的早期基因調(diào)控；WRKY22、WRKY40和WRKY55基因均在XJS30冷處理中表達量最高，其中WRKY22基因及WRKY40基因在XJS30相對于SJ64中的表達量達最大（處理4），WRKY55基因在XJS30相對于SJ64中的表達量達最高（處理5），且與處理1相比升幅較大，與王明芳等（2015）研究報道的冬小麥WRKY40和WRKY55基因的表達模式相似，即在低溫脅迫下表達顯著上調(diào)，推測WRKY22、WRKY40和WRKY55在XJS30的抗寒性發(fā)揮調(diào)控作用。

4 結論

油棕的WRKY1、WRKY7、WRKY22、WRKY40及WRKY55基因均屬于低溫應激反應型基因，其中WRKY22、WRKY40和WRKY55在不同冷處理下表達差異顯著，對XJS30的抗寒性發(fā)揮重要的調(diào)控作用。

參考文獻：

刁衛(wèi)平，王述彬，劉金兵，潘寶貴. 2015. 辣椒全基因組WRKY轉錄因子的分析[J]. 園藝學報，42（11）：2183-2196. [Diao W P，Wang S B，Liu J B，Pan B G. 2015. Genome-wide analysis of the WRKY transcription factor family in pepper[J]. Acta Horticulturae Sinica，42（11）：2183-2196.]

付乾堂，余迪求. 2010. 擬南芥AtWRKY25、AtWRKY26和AtWRKY33在非生物脅迫條件下的表達分析[J]. 遺傳，32（8）：848-856. [Fu Q T，Yu D Q. 2010. Expression profiles of AtWRKY25，AtWRKY26 and AtWRKY33 under abio-tic stresses[J]. Hereditas，32（8）：848-856.]

谷彥冰，冀志蕊，遲福梅，喬壯，徐成楠，張俊祥，董慶龍，周宗山. 2015. 蘋果WRKY基因家族生物信息學及表達分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學，16（18）：3221-3238. [Gu Y B，Ji Z R，Chi F M，Qiao Z，Xu C N，Zhang J X，Dong Q L，Zhou Z S. 2015. Bioinformatics and expression analysis of the WRKY gene family in apple[J]. Scientia Agricultura Sinica，16（18）：3221-3238.]

谷彥冰，冀志蕊，遲福梅，喬壯，徐成楠. 2016. 桃WRKY基因家族全基因組鑒定和表達分析[J]. 遺傳，38（3）：254-270. [Gu Y B，Ji Z R，Chi F M，Qiao Z，Xu C N. 2016. Genome-wide identification and expression analysis of the WRKY gene family in peach[J]. Hereditas，38（3）：254-270.]

決登偉，桑雪蓮，舒波，劉麗琴，石勝友. 2017a. 玉米ZmWRKY53-like與ZmWRKY67-like基因在非生物脅迫下的表達[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學，45（6）：15-20. [Jue D W，Sang X L，Su B，Liu L Q，Shi S Y. 2017a. Expression of maize ZmWRKY53-like and ZmWRKY67-like gene under abiotic stresses[J]. Guizhou Agricultural Sciences，45（6）：15-20.]

決登偉，桑雪蓮，舒波，劉麗琴，王一承，石勝友. 2017b. 玉米WRKY基因功能分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報，48（6）：945-951. [Jue D W，Sang X L，Shu B，Liu L Q，Wang Y C，Shi S Y. 2017b. Functional analysis for maize WRKY gene[J]. Journal of Southern Agriculture，48（6）：945-951.]

決登偉，桑雪蓮，舒波，劉麗琴，王一承，石勝友. 2017c. 玉米WRKY轉錄因子非生物脅迫的表達分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學，44（1）：15-22. [Jue D W，Sang X L，Shu B，Liu L Q，Wang Y C，Shi S Y. 2017c. Expression analysis of maize WRKY transcription factor genes under abiotic stress[J]. Guangdong Agricultural Sciences，44（1）：15-22.]

孔維龍，于坤，但乃震，楊紹宗，包滿珠，黃向榮，傅小鵬. 2017. 甜菜WRKY轉錄因子全基因組鑒定及其在非生物脅迫下的表達分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學，17（10）：3259-3273. [Kong W L，Yu K，Dan N Z，Yang S Z，Bao M Z，Huang X R，F(xiàn)u X P. 2017. Genome-wide identification and expression analysis of WRKY transcription factor under abiotic stress in Beta vulgaris[J]. Scientia Agricultura Sinica，17（10）：3259-3273.]

李元元，高志強，曹清河. 2017. 甘薯SPF1轉錄因子的生物信息學分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報，33（4）：760-767. [Li Y Y，Gao Z Q，Cao Q H. 2017. Bioinformatics analysis of transcription factors from sweet potato[Ipomoea batatas（L.） Lam][J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，33（4）：760-767.]

劉潮，韓利紅，宋培兵，王德琴. 2017. 桑樹WRKY轉錄因子的全基因組鑒定及生物信息學分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報，48（9）：1691-1699. [Liu C，Han L H，Song P B，Wang D Q. 2017. Genome-wide identification and bioinformatics ana-lysis for mulberry WRKY transcription factors[J]. Journal of Southern Agriculture，48（9）：1691-1699.]

劉夢佳，李海峰. 2016. 水稻W(wǎng)RKY 轉錄因子家族研究進展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學，45（3）：1-8. Liu M J，Li H F. 2016.Research progresses on WRKY transcritption factors family in rice（Oryza sativa）[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，45（3）：1-8.]

宋輝，南志標. 2014. 蒺藜苜蓿全基因組中WRKY轉錄因子的鑒定與分析[J]. 遺傳，36（2）：152-168. [Song H，Nan Z B. 2014. Genome-wide identification and analysis of WRKY transcription factors in Medicago truncatula[J]. Hereditas，36（2）：152-168.]

孫利軍，黃磊，李大勇，張慧娟，宋鳳鳴. 2014. 水稻OsWRKY轉錄因子對非生物脅迫響應的重疊表達特性分析[J]. 植物生理學報，50（11）：1651-1658. [Sun L J，Huang L，Li D Y，Zhang H J，Song F M. 2014. Comprehensive expression analysis suggests overlapping of rice OsWRKY transcription factor genes during abiotic stress responses[J]. Plant Physiology Journal，50（11）：1651-1658.]

王連軍，雷劍，蘇文瑾，楊新筍. 2013. 甘薯WRKY基因家族序列的分離與鑒定[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學，52（17）：83-91. [Wang L J，Lei J，Su W J，Yang X S. 2013. Isolation and identification of WRKY gene family from sweet potato[J]. Hubei Agricultural Sciences，52（17）：83-91.]

王明芳，李卓夫，王曉楠，付連雙，孫瑩璐，王濤. 2015. 低溫下冬小麥品種間WRKY轉錄因子的表達特性[J]. 麥類作物學報，35（2）：151-158. [Wang M F，Li Z F，Wang X N，F(xiàn)u L S，Sun Y L，Wang T. 2015. Expression characteristics of WRKY transcription factor between winter wheat varie-ties in low temperature[J]. Journal of Triticeae Crops，35（2）：151-158.]

王秋穎，薛東齊，陳秀玲，李景富，王傲雪. 2017. 番茄與葉霉菌互作過程中WRKY轉錄因子的生物信息學和功能分析[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學，46（11）：74-79. [Wang Q Y ，Xue D Q，Chen X L，Li J F，Wang A X. 2017. Bioinformatics and functional analysis of WRKY transcription factors in interaction between tomato and Cladosporium fulvum[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，46（11）：74-79.]

向小華，吳新儒，王元英. 2016. 普通煙草WRKY基因家族的鑒定及表達分析[J]. 遺傳，38（9）：840-856. [Xiang X H，Wu X R，Wang Y Y. 2016. Genome-wide identification and expression analysis of the WRKY gene family in common tabacco[J]. Hereditas，38（9）：840-856.]

謝政文，王連軍，陳錦洋，王嬌. 2016. 植物WRKY轉錄因子及其生物學功能研究進展[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導報，18（3）：46-54. [Xie Z W，Wang L J，Chen J Y，Wang J. 2016. Studies on WRKY transcription factors and their biological functions in plants[J]. Journal of Agricultural Science and Technology，18（3）：46-54.]

邢國芳，張莉，馮萬軍. 2016. 谷子WRKY轉錄因子基因家族分析[J]. 山西農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版），36（12）：837-845. [Xing G F，Zhang L，F(xiàn)eng W J. 2016. Analysis of WRKY transcription gene family in foxtail millet[J]. Journal of Shanxi Agricultural University（Natural Science Edition），36（12）：837-845.]

徐麗，陳新，宗曉娟，朱東姿，魏海蓉，王甲威，譚鉞，張力思，劉慶忠. 2018. 忠櫻桃砧木PcWRKY1基因的克隆與表達分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報，34（3）：636-641. [Xu L，Chen X，Zong X J，Zhu D Z，Wei H R，Wang J W，Tan Y，Zhang L S，Liu Q Z. 2018. Cloning and expression analysis of PcWRKY1 gene in cherry rootstocks[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，34（3）：636-641.]

徐群剛，鄺建飛，單偉，陸旺金，陳建業(yè). 2015. 香蕉果實冷脅迫相關MaWRKY11轉錄因子的特性、互作蛋白篩選與鑒定[J]. 熱帶亞熱帶植物學報，23（5）：543-552. [Xu Q G，Kuang J F，Shan W，Lu W J，Chen J Y. 2015. Characteri-zation and interacting-protein identification of MaWRKY11 transcription factor related to cold stress from banana fruits[J]. Journal of Tropical and Subtropical Botany，23（5）：543-552.]

閆棟，陳曉麗，孫麗娜，曾日中，楊禮富. 2016. 橡膠樹膠乳WRKY家族轉錄因子HbWRKY27基因的克隆與表達分析[J]. 熱帶作物學報，37（3）：517-524. [Yan D，Chen X L，Sun L N，Zeng R Z，Yang L F. 2016. Cloning and expression analysis of HbWRKY27 gene in the latex from Hevea brasiliensis[J]. Chinese Journal of Tropical Crop，37（3）：517-524.]

顏君，郭興啟，曹學成. 2015. WRKY轉錄因子的基因組水平研究現(xiàn)狀[J]. 生物技術通報，31（11）：9-17. [Yan J，Guo X Q，Cao X C. 2015. Progress of genome-wide researches on WRKY transcription factors[J]. Biotechnology Bulletin，31（11）：9-17.]

余迪求，陳利鋼，張利平. 2006. 轉錄調(diào)控因子WRKY超級家族起源，結構和功能[J]. 云南植物研究，28（1）：69-77. [Yu D Q，Chen L G，Zhang L P. 2006. Transcription factor WRKY superfamily：Origin，structure and function[J]. Acta Botanica Yunnanica，28（1）：69-77.]

張娜，趙佩，沈法富. 2012. 陸地棉三個WRKY基因的克隆及表達分析[J]. 分子植物育種，10（2）：169-173. [Zhang N，Zhao P，Shen F F. 2012. Cloning and expression ana-lysis of 3 WRKY genes from upland cotton[J]. Molecular Plant Breeding，10（2）：169-173.]

Basri W M， Abdullah S N A， Henson I E. 2005. Oil palm achievements and potential[J]. Plant Production Science，8： 288-297.

Deyholos M K，Rahman M H，Jiang Y，Yang B，Kav Nat N V. 2009. Identification and expression analysis of WRKY transcription factor genes in canola（Brassica napus L.） in response to fungal pathogens and hormone treatments[J]. BMC Plant Biology，9（1）：68-86.

Huang D，Wu W，Abrams S R，Cutler A J. 2008. The relationship of drought-related gene expression in Arabidopsis thaliana to hormonal and environmental factors[J]. Journal of Experimental Botany，59（11）：2991-3007.

Ishiguro S，Nakamura K. 1994. Characterization of a cDNA encoding a novel DNA-binding protein，SPF1，that recognizes SP8 sequences in the 5' upstream regions of genes coding for sporamin and β-amylase from sweet potato[J]. Molecular and General Genetics，244（6）：563-571.

Pater S，Greco V，Pham K，Memelink J，Kijne J. 1996. Cha-racterization of a zinc dependent transcriptional activator from Arabidopsis[J]. Nucleic Acids Research，24（23）：4624-4631.

Verheye W. 2010. Growth and production of oil palm[J]. Land Cover and Soil Sciences， 37（2）： 1970-1981.

Xu L，Chen X，Wei H R. 2014. Walnut WRKY7 gene cloning and expression analysis[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences，28（7）：1188-1196.

Yue H，Wang M，Liu S，Du X，Song W，Nie X. 2016. Transcriptome-wide identification and expression profiles of the WRKY transcription factor family in broomcorn mi-llet（Panicum miliaceum L.）[J]. BMC Genomics，17（1）：343-351.

（責任編輯 陳 燕）