彭志潔　賴琪　滕逸飛　喬珍艷　陳毅飛

【摘 要】目的：研究木麒麟對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎（Adjuvant arthritis，AA ）大鼠足腫脹的影響。方法：將50只SD大鼠隨機(jī)分成5組，即空白組、模型組、陽性對(duì)照組和木麒麟高、低劑量組。除空白組外，其余各組用弗氏完全佐劑（Freunds complete adjuvant，CFA）誘導(dǎo)建立AA大鼠模型，造模第17天進(jìn)行藥物外敷浸泡治療，量取各組給藥前后的足跖及足關(guān)節(jié)直徑，觀察其腫脹度。結(jié)果：與模型組相比，木麒麟高劑量組和陽性對(duì)照組的足跖、足關(guān)節(jié)腫脹度減輕（P<0.05）。結(jié)論：木麒麟對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹有明顯的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】木麒麟；佐劑性關(guān)節(jié)炎；足腫脹

中圖分類號(hào)： R283.6；R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）14-0124-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.14.055

The paw swelling effect of pereskia aculeate miller on adjuvant arthritisin rats

PENG Zhi-jie1 LAI Qi1 TENG Yi-fei1 QIAO Zhen-yan1 CHEN Yi-fei2

（1.College of Pharmacy， 2014， Guilin Medical College， Guilin， Guangxi 541004， China；

2.Department of Pharmacology， Guilin Medical College， Guilin， Guangxi 541004， China）

【Abstract】Objective：To study paw swelling effects of Pereskiaaculeate Miller on adjuvant arthritis（AA）in rats. Methods：50 spraguedawley rats were stochastic divided into five groups：blank group， model group，positive control group high and low dose group of Pereskia Aculeate Miller.Except the blank group，a rat model of AA induced by other groups using Freunds complete adjuvant（CFA），after seventeenth days of medicine soaking treatment.Then they were given the amount of foot and podarthrumdiameter before and after treatment，and to observe the degree of swelling. Results：Compared with the model group，the foot and podarthrum swelling degree of the high dose group was reduced（P<0.05）.Conclusions：Pereskia aculeate Miller has remarkable inhibitory effect on adjuvant arthritis of rats.

【Key words】Pereskia Aculeate Miller；Adjuvant Arthritis；Paw swelling

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis， RA）是一種以致殘性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕娘L(fēng)濕病，其病理表現(xiàn)主要是滑膜細(xì)胞異常增殖、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，累及周身關(guān)節(jié)滑膜，甚至嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致滑膜增厚，形成侵襲性血管翳，侵蝕軟骨與骨導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞[1]。木麒麟（Pereskia aculeate Miller）又稱虎刺，是仙人掌科木麒麟屬植物，在巴西的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，木麒麟常被用來做潤(rùn)膚劑、治療皮膚創(chuàng)傷和各種炎癥[2]。近年來隨著對(duì)木麒麟的深入研究，有報(bào)道木麒麟葉子甲醇提取物對(duì)急慢性炎癥小鼠具有抗炎作用，其相關(guān)機(jī)制在一定程度與抑制IL-1β，IL- 6和TNF-α炎癥因子釋放有關(guān)[3]，其甲醇提取物中的己烷分?jǐn)?shù)成分在促進(jìn)傷口愈合中發(fā)揮很大的作用[4]，還有研究指出其葉子粘液含量越多，傷口愈合速度越快[5]，但對(duì)于其治療各種炎癥的抗炎作用機(jī)制目前仍不完全清楚。AA模型是評(píng)價(jià)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物經(jīng)常使用的動(dòng)物模型之一，其發(fā)病機(jī)理，病變部位以及病變性質(zhì)都和人的RA基本類似。本研究以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型—AA大鼠模型作為研究對(duì)象，通過觀察大鼠足跖及足關(guān)節(jié)的腫脹度變化和檢測(cè)炎性因子的含量來驗(yàn)證木麒麟治療RA的作用效果，為今后木麒麟在臨床上治療類風(fēng)濕等疾病的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

隨機(jī)抽取SPF級(jí)的SD大鼠（桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK桂2007-0001）50只，體重（180±20）g。

1.2 藥物、試劑與主要儀器

木麒麟（在廣西賀州當(dāng)?shù)夭烧?，?jīng)桂林醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室王曉華副教授鑒定），雷公藤多苷片（遠(yuǎn)大醫(yī)藥黃石飛制藥有限公司生產(chǎn)， 批號(hào)20151202），弗氏完全佐劑（CFA，由美國(guó)SIGMA-ALDRICH公司提供，F(xiàn)5881-10X10ML），Elisa試劑盒（伊萊瑞特生物科技有限公司，產(chǎn)品編號(hào)E-EL-R0019c），酶標(biāo)儀（英國(guó)生物技術(shù)儀器公司），離心機(jī)（由德國(guó)SIGMA-ALDRICH公司生產(chǎn)）

1.3 分組

將適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后的50只SD大鼠隨機(jī)分成空白組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組、木麒麟高劑量組和木麒麟低劑量組，每組10只。測(cè)量正常狀態(tài)下各組大鼠右足足跖的厚度。

1.4 模型制備

除空白對(duì)照組外，其余的40只大鼠都進(jìn)行AA模型的制備，將0.05ml CFA（10mg/ml）于每只大鼠的右后足足跖皮內(nèi)注射[6]，誘發(fā)佐劑性關(guān)節(jié)炎，此期間注意觀察大鼠后足的活動(dòng)情況，對(duì)于腫脹程度不明顯的大鼠再給予注射0.05ml CFA加強(qiáng)免疫。

1.5 藥物配制

稱取95g木麒麟110ml自來水搗碎研磨成糊狀作為高劑量木麒麟，濃度為0.86g/ml（按生藥量計(jì)），取47.5g木麒麟加110ml搗碎研磨成糊狀作為低劑量木麒麟，濃度為0.43g/ml（按生藥量計(jì)）。SD大鼠造模第17d開始外敷浸泡藥物，每次外敷浸泡十分鐘，保證藥物的經(jīng)皮吸收。模型組外敷浸泡等容積自來水，陽性對(duì)照組灌胃雷公藤多苷片（12mg/kg），每個(gè)組每日一次，連續(xù)7d給藥?？瞻捉M大鼠與其余組別一樣在相同環(huán)境條件下喂養(yǎng)。

1.6 測(cè)量足腫脹度

采用精度0.01mm游標(biāo)卡尺，量取致炎足跖厚度，注射CFA前量取正常值，給藥最后一天后，量取各組大鼠足足跖厚度，并比較給藥前后的足跖厚度，觀察足跖腫脹的變化情況。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析，組間利用單因素方差分析方法。計(jì)量資料以x±s表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)AA大鼠足跖腫脹的影響

模型組大鼠的右后足（注射足）在致炎后開始發(fā)紅并逐漸腫脹（如圖1），24h左右腫脹到達(dá)高峰，16d左右出現(xiàn)右后足跖腫脹等繼發(fā)性病變，至第17d達(dá)到峰值，關(guān)節(jié)活動(dòng)受限，此后腫脹漸漸減輕一直到觀察結(jié)束。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組腫脹與正常組相比具有顯著性差異（P<0.05），說明炎癥反應(yīng)明顯。和模型組比較，給藥7d后木麒麟高劑量能夠顯著降低足跖腫脹程度，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。木麒麟低劑量組與模型組相比，而足跖腫脹度差異不明顯。木麒麟高劑量組與陽性對(duì)照組比較，足關(guān)節(jié)腫脹度沒有明顯差異（P>0.05）。足跖腫脹實(shí)驗(yàn)反應(yīng)木麒麟高劑量能夠抑制大鼠足跖及足關(guān)節(jié)腫脹。見圖2和圖3。

3 討論

目前對(duì)RA的病因還沒有完全清楚，但RA患者的炎性細(xì)胞因子異?；钴S。RA滑膜的炎癥反應(yīng)涉及多種細(xì)胞因子，其中TNF-α和IL-1β被認(rèn)為是關(guān)節(jié)疾病病理過程中促進(jìn)軟骨基質(zhì)的破壞及功能退化重要的細(xì)胞因子[7]。目前的研究表明，當(dāng)機(jī)體受到炎癥刺激后，IL-1β和TNF-α促進(jìn)膠原酶和前列腺素E2（PGE2）等小分子炎癥介質(zhì)的釋放，抑制各種生長(zhǎng)因子對(duì)軟骨細(xì)胞的促有絲分裂作用，最終導(dǎo)致軟骨和骨的破壞[8]。另外，IL-1β還可以使嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞聚集，從而加重炎癥反應(yīng)[9]。有研究表明，TNF-α阻滯劑能夠有效的抑制滑膜炎癥甚至骨侵蝕的加重[7]。有研究指出，足跖腫脹度是反應(yīng)AA模型后肢炎癥輕重程度的外部客觀指標(biāo)[10]。本研究通過大鼠足跖腫脹度變化來觀察木麒麟治療AA的效果，結(jié)果顯示，高劑量木麒麟能明顯抑制CFA誘導(dǎo)的足跖腫脹。下一步我們將探討木麒麟明顯的抑制AA大鼠足跖腫脹的作用，是否與抑制炎癥因子IL1β、TNF-α的產(chǎn)生與釋放密切相關(guān)，期望為其治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，**P<0.05； 與陽性對(duì)照組比較，#P<0.05.

圖2 木麒麟對(duì)AA大鼠足趾腫脹的影響

非甾體類抗炎藥是在臨床上用來治療RA最多的藥物之一，但中年患者長(zhǎng)期使用非甾體類抗炎藥時(shí)，有增加消化道出血及心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)[11-12]。本實(shí)驗(yàn)利用外敷方法治療，外敷療法可以減少對(duì)胃腸道的刺激及肝腎臟的損害，和創(chuàng)傷性的治療比較，疼痛反應(yīng)輕，且具有安全，方便等特點(diǎn)[13]。另外，木麒麟為天然植物，天然藥物具有良好的抗炎效果、毒副反應(yīng)小，并且天然藥物來源豐富、結(jié)構(gòu)多樣，具有良好的應(yīng)用前景[14]。今后應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)木麒麟的抗AA活性成分及活性部位的研究，從更多的抗炎途徑和環(huán)節(jié)對(duì)其進(jìn)行深入探究，以促進(jìn)木麒麟在臨床治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的推廣和應(yīng)用。

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