歐陽(yáng)偉強(qiáng)，陳盛文，溫 蕾，陳麗萍 ，王自強(qiáng)，張險(xiǎn)朋★

（1.東莞市厚街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523960；2.東莞市長(zhǎng)安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523846；3.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

豬流感（Swine Influenza,SI）是由正黏病毒科A型流感病毒引起豬的一種急性、高度接觸性呼吸道傳染病。豬流感不僅給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，引起全球的關(guān)注。豬流感疫情首先是在1918年西班牙流感大流行期間被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)發(fā)現(xiàn)人群感染流感后，豬群也隨后發(fā)病，豬群發(fā)病后，人也發(fā)病，后來(lái)證實(shí)流感病毒在豬和人之間可以相互傳染。1957年亞洲流感、1968年中國(guó)香港地區(qū)流感和2009年的甲型H1N1流感都是人-豬-禽流感病毒的重配病毒，因此，豬在流感的傳播中起到了“混合器”作用。目前，豬群中流行豬流感亞型主要是H1N1、H1N2以及H3N2。豬群中的H3N2亞型與人群中流行H3亞型甲型流感有相關(guān)性，因此，掌握豬群中H3N2亞型豬流感的流行情況，對(duì)做好人的季節(jié)性流感預(yù)警、預(yù)報(bào)具有很重要的意義。為了摸清東莞市豬群中H3N2亞型豬流感流行情況，在2015～2017年在東莞市豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集豬血清進(jìn)行調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬血清 2015～2017年采自東莞市本地豬養(yǎng)殖場(chǎng)，共873份。采用豬前腔靜脈采血，3000r/min,分離出血清，-20℃保存，備檢。

1.1.2 試 劑 H3N2亞型豬流感抗體ELISA試劑盒，購(gòu)自加拿大Biovet公司，批號(hào)：164806。

1.1.3 儀器設(shè)備 Sunrise酶標(biāo)儀購(gòu)自?shī)W地利Tecan公司，移液器購(gòu)自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 將包被H3N2亞型豬流感病毒抗原的酶標(biāo)條放在奇數(shù)列上，未包被抗原的酶標(biāo)條放在偶數(shù)列上。用稀釋緩沖液1:50稀釋豬血清。

1.2.2 A1和A2孔加入100μL陽(yáng)性對(duì)照，B1和B2孔加入100μL陰性性對(duì)照，其余孔加入100μL稀釋后的豬血清，每份樣品分別加入奇數(shù)孔和偶數(shù)孔。37±2°C孵育30min。

1.2.3 棄去孔內(nèi)所有液體，每孔加入300μL的1倍洗滌液進(jìn)行泡洗，重復(fù)洗板3次，最后一次在吸水紙上拍干孔內(nèi)液體。每孔加入100μL稀釋后的酶標(biāo)結(jié)合物，封板，37±2°C孵育30min。

1.2.4 棄去孔內(nèi)所有液體，每孔加入300μL的1倍洗滌液進(jìn)行泡洗，重復(fù)洗板3次，最后一次在吸水紙上拍干孔內(nèi)液體。每孔加入100μL的底物，23±2℃下避光孵育15min。

1.2.5 對(duì)每份樣品和陽(yáng)性、陰性對(duì)照，用含H3N2亞型豬流感病毒特異性抗原（A）的OD值減去對(duì)照孔（C）的OD值。用該值除以陽(yáng)性對(duì)照的OD值（P）得到比率值。

1.2.6 結(jié)果判定 陰性對(duì)照的比率值必須小于0.40，陽(yáng)性對(duì)照的OD值必須大于0.75，試驗(yàn)結(jié)果成立。樣品的比率值小于0.40，判為抗體陰性，樣品的比率值大于等于0.40，判為抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2015～2017年共檢測(cè)本地養(yǎng)豬場(chǎng)點(diǎn)64個(gè)次，873份豬血清，H3N2亞型豬流感抗體陽(yáng)性數(shù)501份，抗體陽(yáng)性率為57.39%，其中2015～2017年的抗體陽(yáng)性率分別為24.20%、66.21%、69.66%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表 1。2015～2017年，年度的抗體陽(yáng)性率呈上升趨勢(shì)，差異顯著，趨勢(shì)見(jiàn)圖1。

圖1 2015-2017年?yáng)|莞市H3N2豬流感抗體陽(yáng)性率趨勢(shì)圖

3 討論

根據(jù)調(diào)查，東莞市本地養(yǎng)豬場(chǎng)未免疫H3亞型豬流感疫苗，因此通過(guò)檢測(cè)豬群血清中的H3N2亞型豬流感抗體，可以判定豬群是否感染或曾經(jīng)感染H3N2亞型豬流感病毒。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，2015～2017年，東莞市H3N2亞型豬流感抗體的陽(yáng)性率為57.39%，結(jié)果表明，東莞市的豬群普遍存在H3N2亞型豬流感的感染。甘平等在2012～2015年對(duì)江西省的豬群進(jìn)行H3亞型豬流感血清抗體調(diào)查，結(jié)果為23.69%；王隆柏等在2009與2010年對(duì)福建省豬群進(jìn)行H3亞型豬流感血清學(xué)調(diào)查，2009年和2010年抗體陽(yáng)性率分別為21.0%、18.4%；徐敏等在2009年和2010年對(duì)廣東規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行H3亞型豬流感病毒抗體血清學(xué)調(diào)查，抗體陽(yáng)性率為16.8%；金凌艷等對(duì)上海某區(qū)豬群中豬流感（H3N2）血清學(xué)抗體檢測(cè)結(jié)果為抗體陽(yáng)性率18.8%。上述結(jié)果表明，H3N2亞型豬流感在我國(guó)不同地區(qū)均有流行，抗體陽(yáng)性率有所差異，可能與采集不同豬群的樣品有關(guān)。

表1 2015～2017年?yáng)|莞市H3N2亞型豬流感抗體檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，2015～2017年，東莞市H3N2亞型豬流感抗體陽(yáng)性率呈上升的趨勢(shì)，根據(jù)從衛(wèi)生部門的了解，東莞市近3年甲型流感流行的毒株從以前優(yōu)勢(shì)株甲型H1N1流感轉(zhuǎn)為以H3N2亞型為主。根據(jù)陳英安等對(duì)豬養(yǎng)殖場(chǎng)從業(yè)人員H3亞型流感抗體的調(diào)查，養(yǎng)豬場(chǎng)從業(yè)人員的抗體陽(yáng)性率明顯高于社區(qū)對(duì)照組，墨西哥的一項(xiàng)研究結(jié)果也表明，規(guī)模豬場(chǎng)從業(yè)人員的抗體陽(yáng)性率也明顯高于一般人群。結(jié)果表明，豬群中流行的豬流感與人群中的甲型流感有密切的相關(guān)性。

豬流感的流行給畜牧業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，因此做好豬流感的防控顯得尤為重要。（1）做好養(yǎng)豬場(chǎng)的生物安全措施，做好消毒和隔離，防止病原帶進(jìn)養(yǎng)殖場(chǎng)。（2）改善養(yǎng)豬場(chǎng)的養(yǎng)殖環(huán)境，做好通風(fēng)，降低飼養(yǎng)的密度。（3）加強(qiáng)養(yǎng)殖從業(yè)人員的管理，從業(yè)人員發(fā)現(xiàn)有流感癥狀，禁止進(jìn)入豬場(chǎng)，防止將人的流感傳染給豬。（4）加強(qiáng)養(yǎng)豬場(chǎng)豬流感的監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握豬群中豬流感流行毒株流行、變異情況，與衛(wèi)生部門建立聯(lián)防聯(lián)控的機(jī)制，相互通報(bào)監(jiān)測(cè)情況，為豬流感的防控提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。