唐明先，陳 杭，羅孝貴，何曉蘭，羊玉蓉，馬 薇，戴旭光，降初拉爾布

（1．甘孜州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626000；2．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，四川 成都 610066）

靈芝（Ganoderma lucidum） 為大型藥用真菌，古代醫(yī)書《神農(nóng)本草經(jīng)》將靈芝列為上品，現(xiàn)代中醫(yī)認(rèn)為，靈芝具有強(qiáng)心、保肝、鎮(zhèn)靜的功效[1]。甘孜州靈芝栽培起步晚，面積小、品種單一，因市場及品種原因，迫切需要馴化選育出產(chǎn)量高、商品性好的新品種來促進(jìn)甘孜州靈芝等食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。2012年上半年，課題組走訪菇農(nóng)，發(fā)現(xiàn)了與目前市場上的靈芝品種不同的1種野生靈芝，菇農(nóng)俗稱為藏靈芝。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，藏靈芝市場需求量大，價格是市場赤芝或紫芝的10倍～20倍。由于菇農(nóng)常年過度采摘，致使野生藏靈芝資源逐年減少，甚至面臨枯竭的危險，因此為了保護(hù)這一珍稀野生資源，在四川省食用菌創(chuàng)新團(tuán)隊項(xiàng)目支持下，課題組從2012年上半年起開始了野生藏靈芝的馴化選育工作，以期選育出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、商品性好的藏靈芝新品種。

1 材料與方法

1.1 菌株

2012年5月8日，課題組在海螺溝景區(qū)海拔2 200 m的闊葉林下，采集到生長在青杠腐木樁上的野生藏靈芝菌株并編號。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基。

原種和栽培種配方：木屑78%、麥麩20%、石膏1%、糖1%，含水量60%～65%。

1.3 組織分離

采收的子實(shí)體帶回室內(nèi)攤晾，通過無菌操作，提取生長點(diǎn)，在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23℃～25℃，待長出菌絲后分離、純化。

1.4 菌種的系統(tǒng)選育

將純化的菌株進(jìn)行ISSR聚類分析，鑒定菌株的遺傳特異性。將分離、純化的菌株進(jìn)行出芝篩選試驗(yàn)，選擇遺傳穩(wěn)定性高且具有優(yōu)良商品性的菌株。

1.5 區(qū)域試驗(yàn)

2014年～2016年在瀘定縣田壩鄉(xiāng)上松基地和磨西新興點(diǎn)安排試驗(yàn)，以川芝6號作為對照，采用靈芝短段木熟料栽培方法進(jìn)行栽培。供試菌株接種發(fā)菌結(jié)束后，及時覆土出芝管理，每個菌株設(shè)為1個處理，3次重復(fù)，每個重復(fù)200 kg（段木截段裝袋處理）。每袋約2 kg，每小區(qū)100袋，面積6 m2。

1.6 生產(chǎn)試驗(yàn)

2015年～2016年在瀘定縣田壩鄉(xiāng)上松基地進(jìn)行試驗(yàn)，以川芝6號作為對照，采用靈芝短段木袋裝熟料栽培方法進(jìn)行栽培。供試菌株接種發(fā)菌結(jié)束后，及時覆土出芝管理，每個菌株設(shè)為1個處理，3次重復(fù)，每個重復(fù)2 000 kg（段木截段裝袋處理）。每袋約2 kg，每小區(qū)1 000袋，面積60 m2。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)選育結(jié)果

2013年將分離獲得的3個菌株在袋料上接種，進(jìn)行初篩試驗(yàn)，通過觀測記錄其朵型、產(chǎn)量等指標(biāo)，最后篩選出優(yōu)良菌株G31，暫定為“康定靈芝”。該菌株菌絲體無色、透明，薄壁，有隔，直徑2 μm～5 μm，具分枝和鎖狀聯(lián)合。在PDA培養(yǎng)基上菌絲呈白色絨毛狀，纖細(xì)、整齊，菌落表面形成淡黃色韌性菌膜，子實(shí)體形成的菌蓋為腎形或半圓形，菌蓋大小為 （7～9） cm× （5～18） cm，厚 1．5 cm～2．8 cm。菌蓋表面有同心環(huán)紋和放射性條紋，菌肉為白色，有特殊香味，味微苦；菌柄長11 cm～15 cm，直徑2 cm～3 cm，組織緊密?？刀`芝特征性狀詳見圖1、圖2。

圖1 康定靈芝子實(shí)體

圖2 康定靈芝菌落特征

2.2 分類學(xué)鑒定

經(jīng)廣東省微生物分析檢測中心對康定靈芝馴化栽培樣品進(jìn)行分子學(xué)鑒定，確認(rèn)篩選出的康定靈芝菌株為白肉靈芝[2]（Ganoderma leucocontextumT．H．Li,W．Q．Deng,Dong M．Wang＆H．P．Hu）。

2.3 藥效成份分析

康靈芝1號標(biāo)本經(jīng)四川省中醫(yī)藥科學(xué)院檢測，檢測結(jié)果顯示，總灰分含量為3．42%，水溶性浸出物含量為6．94%，多糖含量為1．16%，三萜和甾醇成分含量為0．89%，經(jīng)與《中國藥典》2015版對比，這四類成分分別比赤芝或紫芝增加6．9%、131．3%、28．9%、78%。

2.4 產(chǎn)量結(jié)果

2．4．1 區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果

康定靈芝的區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果見表1和表2。

表1 2014年～2015年度康定靈芝與對照產(chǎn)量結(jié)果比較

表2 2015年～2016年度康定靈芝與對照產(chǎn)量結(jié)果比較

由表1和表2可以看出，不同點(diǎn)區(qū)域試驗(yàn)結(jié)果趨向一致，平均每100千克菌材干芝單產(chǎn)達(dá)4．36kg，與川芝6號（CK） 相比增產(chǎn)差異明顯，增產(chǎn)幅度達(dá)13．1%。

2．4．2 生產(chǎn)試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果

康定靈芝的生產(chǎn)試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果見表3。

表3 康定靈芝生產(chǎn)試驗(yàn)與對照產(chǎn)量結(jié)果比較

由表3可以看出，每100千克菌材康定靈芝菌株單產(chǎn)達(dá)4．04 kg，比菌株川芝6號（CK） 平均增產(chǎn)10．7%，增產(chǎn)效果顯著。

2.5 主要農(nóng)藝性狀分析

康定靈芝的主要農(nóng)藝性狀比較結(jié)果見表4。

由表4可以看出，康定靈芝與川芝6號（CK）相比，新鮮的康定靈芝子實(shí)體個體較大，出芝整齊，形態(tài)美觀，朵型為腎形或半圓形，菌肉白色，有特殊香味，味微苦，發(fā)菌期153 d左右，每100千克菌材生產(chǎn)干芝4．04 kg，孢子粉彈射較強(qiáng)。

表4 康定靈芝與CK的主要形態(tài)特征及農(nóng)藝性狀比較

2.6 適應(yīng)地區(qū)和栽培技術(shù)要點(diǎn)

適宜種植區(qū)域?yàn)榇ㄎ鞲咴０? 500 m～2 500 m。栽培原料的主料為殼斗科櫟屬青杠段木，輔料為麥麩。大田覆土栽培。出芝期間溫度控制在18℃～30℃，空氣相對濕度85%～90%，光照強(qiáng)度1 000 lx～15 000 lx，通風(fēng)良好，保持空氣清新。瀘定縣自然條件下接種時間適宜安排在11月～12月，下地覆土出芝時間為次年4月下旬。

3 結(jié)論

康定靈芝屬于白肉靈芝，該菌株子實(shí)體為腎形或半圓形，菌蓋表面具同心環(huán)紋和放射性條紋，幼嫩子實(shí)體有漆樣光澤，成熟子實(shí)體皺褶，黃褐色，菌肉白色，有特殊香味，味微苦，組織緊密。其菌絲體生長溫度8℃～34℃，最適生長溫度22℃～25℃；子實(shí)體形成和發(fā)育溫度18℃～30℃，最適溫度23℃～25℃，發(fā)菌期153 d左右。多點(diǎn)試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌株出芝整齊、農(nóng)藝性狀穩(wěn)定，每100千克菌材干芝單產(chǎn)達(dá)4．04 kg，比對照菌株川芝 6號增產(chǎn)10．7%。同時，其功能成分含量較高，是不同于現(xiàn)有栽培品種的靈芝新菌株。2016年12月31日獲得四川省農(nóng)作物品審委品種審定證書，定名康定靈芝，品種審定編號為川審菌2016002。