郭玉霞

(暨南大學(xué)第二臨床附屬醫(yī)院,深圳市人民醫(yī)院婦科,深圳 518020)

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)中常見的三大惡性腫瘤之一,目前根據(jù)病因?qū)⒆訉m內(nèi)膜癌分為兩種不同類型,即:Ⅰ型和Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌[1,2]。其中以子宮內(nèi)膜樣腺癌較多見,目前尚缺乏早期篩查和診斷子宮內(nèi)膜癌的臨床指標(biāo)[3]。心臟神經(jīng)脊衍生物表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子2(heart and neural crest derivatives-expressed transcript 2,HAND2)是堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子家族的一員,國(guó)外有研究表明HAND2基因與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4,5],然而國(guó)內(nèi)尚無報(bào)道,本研究通過免疫組化方法研究HAND2基因與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

選擇2007-01～2018-01深圳市人民醫(yī)院病理科存檔的子宮內(nèi)膜樣腺癌患者86例,子宮內(nèi)膜不典型增生患者30例。按照2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn),子宮內(nèi)膜樣腺癌患者病理分期Ⅰ-Ⅱ期46例、Ⅲ-Ⅳ期40例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。隨機(jī)選擇同期的正常子宮內(nèi)膜組織28例作為對(duì)照。取材前均未接受放療、化療或激素治療。

1.2 試劑

兔抗人HAND2多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)

所有石蠟標(biāo)本進(jìn)行切片,切片厚度4 μm。采用SP法檢測(cè)HAND2蛋白的表達(dá)情況,工作濃度是1 ∶50。以無菌PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照,DAB顯色。

結(jié)果判定:HAND2蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核,以著色為棕黃色細(xì)顆粒狀為標(biāo)準(zhǔn),每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×40),計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,陽性細(xì)胞1%-25%為1分,25%-50%為2分,50%-75%為3分,76%-100%為4分。陽性強(qiáng)度:無色為0分,淡黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。二者之積0-2分為陰性,>2分為陽性[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HAND2蛋白主要表達(dá)在胞核,出現(xiàn)黃色或棕黃色的細(xì)小顆粒著色為陽性細(xì)胞。本研究通過免疫組化方法檢測(cè)了HAND2蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況,HAND2在正常子宮內(nèi)膜組織中高表達(dá),在不典型子宮內(nèi)膜增生組織和子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)下降,正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(89.3%,60.0%,34.9%,P<0.001,見圖1,表1)。

HAND2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與病理分期和肌層浸潤(rùn)有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P>0.05,見表2)。

A.正常子宮內(nèi)膜 B.子宮內(nèi)膜不典型增生 C.子宮內(nèi)膜樣腺癌圖1 采用免疫組化法檢測(cè)HAND2蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) (SP,×100)Figure 1 Expression of ING4 in different endometrial tissues (SP,×100)

表1HAND2在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況(例)

Table1TheexpressionofHAND2indifferentendometrialtissues(cases)

組織類型 nHAND2+-χ2P正常子宮內(nèi)膜2825326.3230.001子宮內(nèi)膜不典型增生301812子宮內(nèi)膜樣腺癌863056

3 討論

心臟神經(jīng)脊衍生物表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子(heart and neural crest derivatives-expressed transcript,HAND)是堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子家族的一員[7],有HANDl和HAND2兩種亞型,HAND2基因位于染色體4q33,基因長(zhǎng)度為2.3 kb,編碼217個(gè)氨基酸[8,9],通過參與多種信號(hào)通路及與其他基因之間相互作用,對(duì)心臟、血細(xì)胞、血管發(fā)育過程有著十分重要的作用[10,11]。HAND2基因及其蛋白在惡性腫瘤中的研究較少,在子宮內(nèi)膜癌中的研究甚少。

我們通過免疫組化方法對(duì)HAND2蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織以及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)與分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),HAND2在正常子宮內(nèi)膜組織中呈現(xiàn)了明顯的細(xì)胞核的陽性表達(dá),而在子宮內(nèi)膜不典型增生組織及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HAND2蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中,腫瘤肌層浸潤(rùn)越深,HAND2的表達(dá)越低;Ⅲ-Ⅳ期較Ⅰ-Ⅱ期的表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和組織學(xué)分級(jí)無關(guān)。研究表明HAND2在子宮內(nèi)膜癌和不典型增生中的表達(dá)下調(diào),HAND2的基因表達(dá)異常甚至缺失可能參與了啟動(dòng)子宮內(nèi)膜癌的惡變過程。

表2HAND2在子宮內(nèi)膜癌組織中與臨床參數(shù)的比較(例)

Table2RelationshipsbetweentheexpressionofHAND2andclinicopathologicparametersinendometrialcarcinoma(cases)

臨床病理特征 nHAND2+-χ2P病理分期20.3850.001 Ⅰ-Ⅱ期462620 Ⅲ-Ⅳ期40436組織學(xué)分級(jí)0.1470.701 高/中分化552035 低分化311021肌層浸潤(rùn)12.0160.001 無或淺502525 深36531淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.9100.167 無401723 有461333

隨著人們生活習(xí)慣及飲食結(jié)構(gòu)的改變,患有糖尿病、高血壓和肥胖的人群越來越多,表觀遺傳學(xué)對(duì)環(huán)境影響具有易感性,代謝綜合征可能會(huì)引起表觀遺傳發(fā)生變化,最終導(dǎo)致腫瘤的形成,陳美霞等[12]對(duì)子宮內(nèi)膜癌與DNA甲基化之間的關(guān)系做了簡(jiǎn)要概述。本研究通過免疫組織化學(xué)法發(fā)現(xiàn)HAND2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)量明顯少于正常子宮內(nèi)膜組織,但尚不能檢測(cè)HAND2基因的甲基化情況。石敏等[13]對(duì)HAND2甲基化在子宮內(nèi)膜癌中的研究現(xiàn)狀做了簡(jiǎn)要說明,HAND2甲基化是子宮內(nèi)膜癌中一種常見的分子改變,可能作為一項(xiàng)檢測(cè)標(biāo)志物來預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)。

HAND2基因在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)下降或缺失的分子機(jī)制仍需進(jìn)一步研究,我們相信HAND2基因甲基化在判斷子宮內(nèi)膜癌的病變程度、臨床治療效果和預(yù)后等方面有深遠(yuǎn)意義。