張秀華

【摘要】目的：研究分析三種金黃色葡萄球菌選擇性分離培養(yǎng)基的檢測(cè)效果。方法：分別使用Baird-Parker培養(yǎng)基（BP）、兔血漿纖維蛋白原培養(yǎng)基（RPF）和科瑪嘉葡萄球菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagarTMStaph aureus）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株、食品分離株以及食品樣品進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)。結(jié)果：三種選擇性培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌的回收率均達(dá)到95%以上；RPF和CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基的檢測(cè)效率明顯高于BP培養(yǎng)基；且兩種培養(yǎng)基敏感性、特異性均優(yōu)于傳統(tǒng)的BP培養(yǎng)基。結(jié)論：應(yīng)用RPF和CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌，較傳統(tǒng)的BP培養(yǎng)基具有更好的檢測(cè)效果，建議將RPF和CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基作為可靠的分離檢測(cè)培養(yǎng)基應(yīng)用于食品中金黃色葡萄球菌的分離檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】金黃色葡萄球菌；Baird-Parker培養(yǎng)基；檢測(cè)效果

【中圖分類號(hào)】R3781+1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B

【文章編號(hào)】1005-0019（2018）09-238-01

金黃色葡萄球菌是引起人類食源性疾病的重要病原菌之一，對(duì)其的微生物檢測(cè)方法目前仍以常規(guī)分離培養(yǎng)為主[1]。由于金黃色葡萄球菌是重要的食源性致病菌，而培養(yǎng)基的選擇又是檢驗(yàn)工作的關(guān)鍵，因此本研究采用標(biāo)準(zhǔn)菌株、食品分離株及各類食品樣品，比較BP、RPF及CHROMagarTMStaph aureus三種培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌分離培養(yǎng)的檢測(cè)效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1材料與方法

11材料

111菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株：金黃色葡萄球菌ATCC6538及金黃色葡萄球菌ATCC25923；實(shí)驗(yàn)室保存菌株：食品中分離的金黃色葡萄球菌菌株40 株，非金黃色葡萄球菌菌株50株。

112培養(yǎng)基和試劑RPF培養(yǎng)基（貨號(hào)：44003）、凍干兔血漿（貨號(hào)：55181）由法國(guó)生物梅里埃公司提供；CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基（貨號(hào)：CP60015 ）由鄭州人福博賽生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；BP培養(yǎng)基（貨號(hào)：CMD023）、胰胨大豆（TSA）培養(yǎng)基（貨號(hào)：CMD027）、血瓊脂培養(yǎng)基（貨號(hào)：CMD002）、75%氯化鈉肉湯（貨號(hào)：CMA058）、牛肉湯（貨號(hào)：CMA001）由上海市疾病預(yù)防控制中心提供。

113樣品來源2017年1月—4月在大興安嶺地區(qū)食品超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集的調(diào)理肉制品、熟肉制品、生牛奶等食品共計(jì)243份，經(jīng)冷鏈送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。

12方法選擇性培養(yǎng)基目標(biāo)菌株回收率、檢測(cè)效率測(cè)試 回收率是選擇性培養(yǎng)基分離效果的重要指標(biāo)。選用金黃色葡萄球菌ATCC6538、ATCC25923菌株，經(jīng)血瓊脂培養(yǎng)基純培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落轉(zhuǎn)種（36±1）℃牛肉湯增菌過夜，將此增菌液用無菌生理鹽水調(diào)成05麥?zhǔn)蠞舛染鷳乙?，?0倍梯度稀釋至10-8，選擇10-5、10-6、10-7稀釋度的菌懸液，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品混勻液以03、03、04 mL接種量分別加入3塊BP、RPF、CHROMagarTMStaph aureus、TSA培養(yǎng)基[8]，然后用無菌涂布棒涂布整個(gè)培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。各種選擇性瓊脂與TSA培養(yǎng)基的菌落數(shù)的比值，即為選擇性培養(yǎng)基的回收率。同時(shí)觀察菌株在18 h、24 h、48 h生長(zhǎng)情況并記錄。各培養(yǎng)基預(yù)期的典型菌落形態(tài)： RPF培養(yǎng)基呈黑色、灰色或白色，外圍有沉淀暈環(huán)的菌落；CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基呈紫紅色至粉紅色菌落；BP培養(yǎng)基呈灰黑色至黑色，周圍繞以不透明圈（沉淀）菌落。

2結(jié)果

21選擇性培養(yǎng)基目標(biāo)菌株的回收率金黃色葡萄球菌ATCC6538、ATCC25923菌株在BP 、RPF、CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基回收率：ATCC6538分別為985%、969%、1000%；ATCC25923分別為966%、1014%、1007%。三種選擇性培養(yǎng)基的回收率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。

22選擇性培養(yǎng)基目標(biāo)菌株的檢測(cè)效率2株金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在三種不同選擇性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況分別為：在BP培養(yǎng)基上培養(yǎng)18～24 h時(shí)，菌落較小，黑色，無暈圈，生長(zhǎng)沒有呈現(xiàn)典型菌落特征或者特征表現(xiàn)不明顯，培養(yǎng)至48 h后菌落呈現(xiàn)典型生長(zhǎng)形態(tài)，黑色，有暈圈。

3討論

在選擇性增菌后使用分離培養(yǎng)基進(jìn)行目標(biāo)菌的分離鑒定是目前金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)的關(guān)鍵步驟之一。由于不同的分離培養(yǎng)基應(yīng)用的原理不一樣，檢測(cè)方法的適用性、檢測(cè)人員技術(shù)差異等因素，對(duì)各種分離培養(yǎng)基做好實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和應(yīng)用評(píng)估非常重要。

此次實(shí)驗(yàn)顯示，RPF、CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基在測(cè)試菌株敏感性和特異性方面均優(yōu)于BP培養(yǎng)基，但是沒有一種選擇型培養(yǎng)基的敏感性、特異性達(dá)到100%，在實(shí)驗(yàn)過程中僅僅采用單一的選擇性培養(yǎng)基，不可避免會(huì)有漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。因此，采用多種選擇性培養(yǎng)基是避免漏檢現(xiàn)象發(fā)生的可行而有效的方法。建議將RPF、CHROMagarTMStaph aureus培養(yǎng)基作為一種可靠的檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于食品中金黃色葡萄球菌的分離檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)：GB 478910—2016[S].北京： 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017

[2]陳炯，顧其芳，劉誠(chéng)，等.2011—2012年上海市食品中食源性致病菌的監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，26（4）：169-172

[3]趙貴明，劉沛，邊凌淳，等.自制兔血漿纖維蛋白原瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌的效果觀察[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2004，16（6）：501-503