楊燕妮，曹景文，王毅，孫曉波，匡海學，王艷紅，劉恩臨，舒尊鵬，*

(1.廣東藥科大學 中藥學院，廣東 廣州 510006；2.黑龍江中醫(yī)藥大學 教育部北藥基礎與應用研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040；3.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193；4.哈爾濱市康隆藥業(yè)有限責任公司，黑龍江 哈爾濱 150025)

隨著抗生素的發(fā)現(xiàn)與應用，多種由致病菌引起的細菌感染性疾病有了很好的控制和治療效果，但抗菌藥物在發(fā)揮強大抗菌功效的同時，致病菌也不斷對現(xiàn)有藥物產(chǎn)生適應性，即耐藥性?？咕幬锏臑E用，使細菌的耐藥性迅速產(chǎn)生，且抗生素的使用還存在療程過長、更換頻繁、盲目選用、多種聯(lián)合等問題，導致多重耐藥及泛耐藥菌株不斷增加，可供臨床選擇的抗生素越來越局限。因此從中藥中篩選抗菌藥物進行細菌的非抗生素治療研究具有重要意義。相較中藥單味藥而言，中成藥制劑含有多種有效抗菌成分，具有多向性、多層面、多靶點等特點，使菌難以同時產(chǎn)生對抗多種抗菌成分的多重突變，能有效達到治療目的。

炎寧糖漿由鹿茸草、白花蛇舌草和鴨跖草3味中藥組成，臨床上主要用于上呼吸道感染、扁桃體炎、尿路感染、急性菌痢、腸炎等癥[1-2]。針對上述的感染性疾病，炎寧糖漿總提取物及其單味藥是否具有抗菌活性，又對哪些細菌具有殺菌效果，3種單味藥中哪味中藥抗菌效果最好？出于這些考慮，本文研究了炎寧糖漿總提取物對綠膿桿菌等12種常見細菌和白色念珠菌等4種真菌的體外抗菌效果以及對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌造成的小鼠全身性感染致死率的影響，進一步為臨床應用提供理論基礎和實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物及試劑

炎寧糖漿組成所需的3種中藥由哈爾濱市康隆藥業(yè)有限責任公司提供，并由廣東藥科大學中藥學院中藥資源系李書淵教授鑒定為玄參科鹿茸草屬多年生草本植物鹿茸草MonochasmasheareriMaxim.ex Franch.、茜草科耳草屬多年生草本植物白花蛇舌草HedyotisdiffusaWilld.、鴨跖草科鴨跖草屬多年生草本植物鴨跖草Commelinacommunis，樣本留存在廣東藥科大學中藥學院(樣品號分別為20170712A、20170712B和20170712C)。

蛋白胨(北京奧博星生物技術有限公司，批號：20171001)、牛肉膏(北京奧博星生物技術有限公司，批號：20171009)、營養(yǎng)瓊脂(北京奧博星生物技術有限公司，批號：20171012)、氯化鈉(西安化學試劑廠，批號：170128)、75%乙醇(山東利爾康消毒科技股份有限公司，批號：20170415)、DMSO(二亞基亞砜)(北京索萊寶科技有限公司，批號：20171023)、阿司匹林(濟南永寧制藥股份有限公司，批號：170504)。

1.2 動物及菌株

SPF級ICR種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，由廣東藥科大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(粵)20170029。細菌(12種)：綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，購于黑龍江省微生物檢疫所菌種保藏中心；大腸桿菌(Escherichiacoli)、沙門氏菌(Salmonella)、枯草桿菌(Bacillussubtilis)、福氏痢疾桿菌(Shigellaflexneri)、志賀氏菌(Shigella)、表皮葡萄球菌(白色葡萄球菌)(Staphylococcusepidermidis)、腐生葡萄球菌(檸檬色葡萄球菌)(Staphylococcussaprophyticus)、乙型副傷寒桿菌(Bacillusparatyphosus)、乙型溶血性鏈球菌(Betahemolyticstreptococcus)，購于北京市微生物檢疫所。真菌(4種)：白色念珠菌(Candidaalbicans)、曲霉菌(Aspergillus)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)、球孢子菌(Coccidiodes)，購于北京市微生物檢疫所。

1.3 儀器

YXQ-LS-50 S II型全自動立式壓力蒸氣滅菌器(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)、BI01500-II-A2型生物安全柜(上海振梓創(chuàng)空氣凈化設備有限公司)、DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學儀器有限公司)、TCP010096型96孔細胞培養(yǎng)板(BIOFIL公司)、9 cm一次性無菌培養(yǎng)皿(江蘇康健醫(yī)療用品有限公司)、10～200 μL微量移液器(Mettler Toledo公司)、D33型孔徑0.22 μm一次性無菌超微濾器(Millipore公司)。

2 方法

2.1 藥液的制備

按《中華人民共和國藥典》2015版進行藥品提取濃縮，即3味中藥按照鹿茸草、白花蛇舌草和鴨跖草2∶1∶1(共200.0 g)加水回流煎煮兩次，第一次煎煮1.5 h，第二次煎煮1 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10，加乙醇使含醇量達到60%，攪勻，靜置12 h，濾過，減壓揮干成粉(16.0 g，出膏率8.0%)。另取鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草藥材各200 g，按上述方法制備，分別得到干粉11.8 g(出膏率5.90%)、16.4 g(出膏率8.20%)和17.9 g(8.95%)，用于后續(xù)實驗的備用。

2.2 體外抗菌實驗

2.2.1 細菌 細菌菌落接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃孵育24 h使菌株復蘇，然后接種于5 mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中37 ℃孵育18 h，然后取其中500 μL至4.5 mL培養(yǎng)基中，37 ℃孵育6 h，取出后按上一步操作重復稀釋兩次，得到1∶1000的稀釋菌液備用。采用96孔板連續(xù)稀釋法進行最低抑菌濃度(MIC)測定，于96孔板加入100 μL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；向第一孔加入100 μL樣品，與培養(yǎng)基混勻后吸取100 μL加入第2孔，以此類推加至第10孔，吸取其中100 μL棄置廢液75%乙醇中；向第11孔再加入100 μL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；除第12孔外，向每孔中加入100 μL實驗用菌液混勻，以上過程為無菌操作。第n孔對應藥液濃度為C0/2n+1(C0為初始質(zhì)量濃度48 mg·mL-1)，其中第11孔作為藥液空白，第12孔作為菌液空白，每種樣品平行3次。置于37 ℃恒溫培養(yǎng)18 h，觀察結果，以澄清孔的最小稀釋濃度為該菌的最低抑菌濃度(MIC)。采用瓊脂板劃分區(qū)域法進行最低殺菌濃度(MBC)的測定，將上述無細菌生長澄清孔內(nèi)的各菌藥混合液接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察細菌生長情況，沒有細菌生長的最低藥液濃度即為最低殺菌濃度(MBC)。

2.2.2 真菌 將沙氏培養(yǎng)基斜面孵育3周左右的菌種，用接種鉤挑取適量菌落(約1×1 mm)放入消毒乳缽中，加入0.5 mL 0.9%氯化鈉溶液，研磨成真菌混懸液，再在血細胞計數(shù)板上用0.9%氯化鈉溶液調(diào)整菌液濃度到105～106·mL-1，備用。分別稱取總提取物和3個單味藥5.0 g，加入100 mL滅菌培養(yǎng)液，即得50 mg·mL-1的藥液，依次分別稀釋至質(zhì)量濃度為25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78 mg·mL-1，共6個藥物濃度梯度。將沙氏培養(yǎng)基分裝試管，每支試管1.7 mL，在121 ℃、0.15 MPa條件下滅菌15 min。當滅菌培養(yǎng)基冷卻至40～50 ℃時，在無菌條件下分別取總提取物和3個單味藥各濃度梯度的稀釋液0.3 mL，按濃度由低到高依次加入培養(yǎng)基，混勻制成斜面，使每管終體積為2 mL。陰性對照管為不加藥物的沙氏培養(yǎng)基2 mL。對照管和實驗管每管均用劃線法接種，接種后置28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每日觀察1次，在培養(yǎng)過程中由2人在自然光線下通過肉眼判讀。7 d后判讀結果，以無真菌生長試管內(nèi)藥物的最低濃度為該真菌的最低抑菌濃度(MIC)。在無菌條件下，將于121 ℃、0.15 MPa條件下滅菌20 min的沙氏液基3 mL，分別倒入上述抑菌實驗中試管內(nèi)無真菌生長的含藥培養(yǎng)基試管，用接種環(huán)輕刮取培養(yǎng)基表面，充分振蕩后倒入無菌試管中。將含藥的沙氏培養(yǎng)基繼續(xù)孵育12 d，每日觀察1次，觀察真菌菌落生長情況。12 d后判讀結果，以無真菌菌落生長的最低藥液濃度為最低殺菌濃度(MBC)。

2.3 體內(nèi)抗菌實驗的分組及給藥方法

取ICR小鼠，雌雄各半，按體重隨機分為17組，每組10只小鼠，即空白組，模型組(福氏痢疾桿菌組、綠膿桿菌組和大腸桿菌組)，陽性對照組(阿莫西林膠囊200.0 mg·kg-1)，炎寧糖漿總提取物高劑量組(300.0 mg·kg-1，相當于炎寧生藥6.0 g·kg-1)，炎寧糖漿總提取物中劑量組(150.0 mg·kg-1，相當于炎寧生藥3.0 g·kg-1)、炎寧糖漿總提取物低劑量組(75.0 mg·kg-1，相當于炎寧生藥1.5 g·kg-1)，鹿茸草高劑量組(300.0 mg·kg-1，相當于鹿茸草生藥6.0 g·kg-1)、鹿茸草中劑量組(150.0 mg·kg-1，相當于鹿茸草生藥3.0 g·kg-1)、鹿茸草低劑量組(75.0 mg·kg-1，相當于鹿茸草生藥1.5 g·kg-1)，白花蛇舌草高劑量組(300.0 mg·kg-1，相當于白花蛇舌草生藥6.0 g·kg-1)、白花蛇舌草中劑量組(150.0 mg·kg-1，相當于白花蛇舌草生藥3.0 g·kg-1)、白花蛇舌草低劑量組(75.0 mg·kg-1，相當于白花蛇舌草生藥1.5 g·kg-1)，鴨跖草高劑量組(300.0 mg·kg-1，相當于鴨跖草生藥6.0 g·kg-1)、鴨跖草中劑量組(150.0 mg·kg-1，相當于鴨跖草生藥3.0 g·kg-1)、鴨跖草低劑量組(75.0 mg·kg-1，相當于鴨跖草生藥1.5 g·kg-1)。

2.4 體內(nèi)感染菌液的配制

將福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌3種菌株分別接種于液體培養(yǎng)基中，振蕩混勻，其濁度與0.5麥氏比濁管比對，得1.5×108CFU·mL-1的菌液。37 ℃培養(yǎng)18 h后，用0.9%氯化鈉溶液稀釋為10-1、10-2、10-3……不同濃度菌液。再吸取不同濃度的菌液1 mL分別放于滅菌試管內(nèi)，分別加入5%干酵母0.9%氯化鈉溶液混懸液9 mL，即做成濃度為10-2、10-3……的細菌懸液備用。

2.5 體內(nèi)抗菌實驗

將不同質(zhì)量濃度的菌懸液分別腹腔注射于體質(zhì)量約20 g的小鼠，每濃度組6只，每只0.5 mL，觀察動物在3 d內(nèi)的死亡情況，選用引起小鼠80%～100%死亡的最小致死菌量即MLD進行正式實驗。預實驗得福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌的MLD值分別為1.0×108、1.8×107、2.8×106CFU·mL-1。吸取含福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌的MLD菌液，分別腹腔注射各組小鼠體內(nèi)，每只0.5 mL，給藥組及陽性對照組于感染前1天以及感染后1、6、12 h灌胃給藥，空白組給水，觀察并統(tǒng)計24 h內(nèi)各組動物死亡率。

2.6 統(tǒng)計學分析

死亡數(shù)據(jù)為分類資料，采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料與只數(shù)(n)，死亡率用百分數(shù)(%)表示，采用χ2檢驗，以P< 0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 各樣本對12種實驗細菌的MIC結果

由表1所示，炎寧糖漿總提取物對大腸桿菌、沙門氏菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌、綠膿桿菌均有一定的抑菌作用，其中對福氏痢疾桿菌及綠膿桿菌的抑菌效果最佳，最低殺菌濃度均為0.375 mg·mL-1。3種單味藥中，鹿茸草和鴨跖草均能抑制大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌和綠膿桿菌。此外，鹿茸草還對沙門氏菌表現(xiàn)出抑菌作用。白花蛇舌草未表現(xiàn)出任何抑菌作用。綜上所知，炎寧糖漿總提取物具有較好的抑菌作用，在配方中主要起抑菌作用的單味藥為鹿茸草和鴨跖草，且鹿茸草好于鴨跖草。

3.2 各樣本對12種實驗細菌的MBC結果

由表2所示，炎寧糖漿總提取物對大腸桿菌、沙門氏菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌、綠膿桿菌均有一定的殺菌作用，其中對福氏痢疾桿菌、志賀氏菌和綠膿桿菌殺菌效果最佳，最低殺菌濃度均為1.5 mg·mL-1。鹿茸草和鴨跖草同樣表現(xiàn)出殺死大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌和綠膿桿菌的作用，鹿茸草還對沙門氏菌表現(xiàn)出殺菌作用，白花蛇舌草未表現(xiàn)出任何殺菌作用。綜上所知，炎寧糖漿總提取物具有較好的殺菌作用，在配方中主要起到殺菌作用的單味藥為鹿茸草和鴨跖草，鹿茸草好于鴨跖草。此結果與上述的MIC結果基本一致。

3.3 各樣本對4種實驗真菌的MIC結果

表3實驗數(shù)據(jù)顯示，炎寧糖漿總提取物質(zhì)量濃度在12.5、25 mg·mL-1時，分別對白色念珠菌和皮炎芽生菌表現(xiàn)出一定的抑制效果，但對曲霉菌和球孢子菌則無明顯作用。單味藥中鹿茸草和鴨跖草分別在濃度為12.5、25 mg·mL-1時對白色念珠菌表現(xiàn)出抑制作用。此外，鹿茸草還對皮炎芽生菌具有抑制作用，白花蛇舌草未表現(xiàn)出活性。此結果說明，炎寧糖漿總提取物具有抑制真菌活性的作用，在配方中主要起到抑制真菌活性的單味藥為鹿茸草和鴨跖草。

注：+表示有少量細菌生長，++表示有較多細菌生長，下同。

表2 炎寧糖漿總提取物及3個單味藥對標準菌株的 MBC(n=3) mg·mL-1

表3炎寧糖漿總提取物及3個單味藥對4種
真菌標準菌株的MIC(n=3) mg·mL-1

3.4 各樣本對4種實驗真菌的MBC結果

表4實驗數(shù)據(jù)顯示，在4種真菌的MIC實驗后，繼續(xù)經(jīng)過12 h的培養(yǎng)，總提取物和鹿茸草質(zhì)量濃度在25 mg·mL-1時對白色念珠菌表現(xiàn)出明顯的殺滅作用；鴨跖草和白花蛇舌草未表現(xiàn)出活性。此結果表明，總提取物表現(xiàn)出的殺真菌作用主要是鹿茸草起到的作用。

表4炎寧糖漿總提取物及3個單味藥對4種真菌
標準菌株的MBC(n=3) mg·mL-1

3.5 各樣本體內(nèi)抗菌實驗結果

實驗結果如表5所示，對于福氏痢疾桿菌感染的小鼠，給藥24 h后模型組小鼠的死亡率為100%，炎寧糖漿總提取物高、中和低劑量組的死亡率分別為40%、40%和50%，與模型組相比都具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。同樣，炎寧糖漿總提取物高和中劑量組對綠膿桿菌導致的小鼠全身感染模型具有保護作用，死亡率分別為50%和40%，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，低劑量組無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。此外，炎寧糖漿總提取物高、中和低劑量組對大腸桿菌誘導的全身感染模型均表現(xiàn)出保護作用，具有統(tǒng)計學差異(P<0.01，P<0.05)。陽性對照組的小鼠存活率為100%，與模型組相比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。上述實驗結果提示，炎寧糖漿總提取物高、中和低劑量組對3種細菌導致的小鼠全身感染模型具有一定的保護作用。

表6實驗結果顯示，3種細菌感染小鼠24 h后，其死亡率均為100%。對于福氏痢疾桿菌感染的小鼠，鹿茸草高、中和低劑量組的死亡率分別為20%、20%和40%，與模型組相比均具有統(tǒng)計學差異(P<0.01，P<0.05)。鹿茸草高、中和低劑量組對于綠膿桿菌和大腸桿菌導致的小鼠全身感染模型同樣具有保護作用，死亡率分別為20%、40%和50%，具有統(tǒng)計學差異(P<0.01，P<0.05)。陽性對照組的小鼠存活率為100%，與模型組相比具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。上述實驗結果提示，鹿茸草高、中和低劑量組對3種細菌導致的小鼠全身感染模型都具有保護作用。

表7實驗結果表明，白花蛇舌草僅高劑量組表現(xiàn)出對大腸桿菌誘導的小鼠全身感染具有保護作用(P<0.05)，其余各組均無作用。陽性對照組的小鼠存活率為100%，與模型組相比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。上述實驗結果提示，白花蛇舌草對3種細菌導致的小鼠全身感染模型基本未表現(xiàn)出活性，與體外實驗結果基本一致。

表8結果顯示，小鼠被3種細菌感染24 h后，其死亡率均為100%，而陽性對照組的小鼠存活率為100%。對于福氏痢疾桿菌感染的小鼠，鴨跖草高、中劑量組的死亡率均為50%，與模型組相比具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，低劑量無統(tǒng)計學意義。同樣，鴨跖草高和中劑量組對綠膿桿菌導致的小鼠全身感染模型具有保護作用，死亡率分別為30%和40%，具有統(tǒng)計學差異(P<0.01，P<0.05)。此外，鴨跖草高、中劑量組對大腸桿菌誘導的全身感染模型均表現(xiàn)出保護作用，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。上述實驗結果提示，鴨跖草高、中劑量組對3種細菌導致的小鼠全身感染模型具有一定的保護作用。

表5炎寧糖漿總提取物對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌感染小鼠的保護作用(n=10)

組別劑量/mg·kg-1n/只福氏痢疾桿菌綠膿桿菌大腸桿菌死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)模型組10101001010010100阿莫西林組200.01000**00**00**總提取物高劑量組300.010440*550*220**總提取物中劑量組150.010440*440*440*總提取物低劑量組75.010550*770440*

注：與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01；下同。

表6鹿茸草對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌感染小鼠的保護作用(n=10)

組別劑量/mg·kg-1n/只福氏痢疾桿菌綠膿桿菌大腸桿菌死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)模型組—10101001010010100阿莫西林組200.01000**00**00**鹿茸草高劑量組300.010220**220**220**鹿茸草中劑量組150.010220**440*440*鹿茸草低劑量組75.010440*550*550*

表7白花蛇舌草對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌感染小鼠的保護作用(n=10)

組別劑量/mg·kg-1n/只福氏痢疾桿菌綠膿桿菌大腸桿菌死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)模型組—10101001010010100阿莫西林組200.01000**00**00**白花蛇舌草高劑量組300.010770880550*白花蛇舌草中劑量組150.010880100100990白花蛇舌草低劑量組75.0101010010010010100

表8鴨跖草對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌感染小鼠的保護作用(n=10)

組別劑量/mg·kg-1n/只福氏痢疾桿菌綠膿桿菌大腸桿菌死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)死亡數(shù)/只死亡率(%)模型組—10101001010010100阿莫西林組200.01000**00**00**鴨跖草高劑量組300.010550*330**440*鴨跖草中劑量組150.010550*440*440*鴨跖草低劑量組75.010880770660

4 討論

現(xiàn)代研究顯示，許多中藥具有抗菌活性，能夠有效抑制及殺滅細菌和真菌。中藥的抗菌活性成分復雜，主要包括生物堿、黃酮、有機酸、萜類、多糖、蒽醌類等[3-4]。中藥抗菌藥在臨床應用時多采取單味用藥形式，但隨著細菌的種類不斷增多，耐藥性增強等多種問題出現(xiàn)，聯(lián)合用藥以及在中藥范圍內(nèi)尋找有針對性療效的抗菌消炎藥也成為中醫(yī)藥工作者積極探尋的方向。大腸桿菌為革蘭氏陰性菌，多導致內(nèi)源性感染，以泌尿系感染為主，如尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎，也可引起腹膜炎、膽囊炎、闌尾炎等。大腸桿菌侵入血液，可引起敗血癥，尤其是早產(chǎn)兒或生后30 d內(nèi)的新生兒，并易患化膿性腦膜炎[5]。此外，某些血清型大腸桿菌能引起人類急性腹瀉。福氏痢疾桿菌、志賀氏菌為革蘭氏陰性菌，主要可引起急、慢細菌性痢疾[6]，包括典型菌痢、非典型菌痢和中毒性菌痢3種。綠膿桿菌是革蘭氏陰性桿菌感染中僅次于大腸桿菌、克雷伯菌的常見病原菌。臨床上常見的有皮膚和皮下組織感染，中耳炎、腦膜炎、呼吸道感染、尿道感染、敗血癥[7]等。沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一，可引起食物中毒，導致胃腸炎。炎寧糖漿總提取物可對大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、志賀氏菌、綠膿桿菌、沙門氏菌表現(xiàn)出抑菌及殺菌效果，可通過抑菌和殺菌作用，用于治療細菌感染所引起的尿路疾病、腸道疾病以及呼吸系統(tǒng)疾病。其中炎寧糖漿總提取物對于細菌的最低抑菌濃度為0.375 mg·mL-1，最低殺菌濃度為1.5 mg·mL-1；而對于真菌的最低抑菌濃度為12.5 mg·mL-1，最低殺菌濃度為25 mg·mL-1。此外，炎寧糖漿總提取物對福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌和大腸桿菌3種細菌誘導的小鼠全身性感染所導致的死亡率具有明顯的抑制作用，通過體內(nèi)實驗進一步證明了炎寧糖漿總提取物具有良好的抗菌效果。前期文獻研究中發(fā)現(xiàn)關于白花蛇舌草抗菌的報道多集中于其有效部位的抗菌作用，如黃酮類成分、有機酸類及乙醇提取部位[8-9]。本實驗結果顯示，在炎寧糖漿規(guī)定的藥物濃度范圍內(nèi)白花蛇舌草提取物在體外無明顯的抗菌活性，其原因可能在于白花蛇舌草提取物的抗菌濃度達不到其有效部位的抑菌濃度。李濤等[10]研究中也發(fā)現(xiàn)，當白花蛇舌草乙醇提取物質(zhì)量分數(shù)≤0.2%時，其對金黃色葡萄球菌和鐮刀菌的抑菌效果差異不明顯，基本不存在抑菌作用。體內(nèi)抗菌實驗中白花蛇舌草高劑量組減少死亡率有明顯降低，呈統(tǒng)計學差異(P<0.05)，其他劑量組無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。白花蛇舌草含有蒽醌類、黃酮類、環(huán)烯醚萜類化合物以及甾醇成分，在眾多文獻中顯示有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和保肝等作用，推測可能由于白花蛇舌草能增強巨噬細胞活性，從而起到免疫調(diào)節(jié)以及抗炎作用，但體內(nèi)抗菌實驗中小鼠死亡率降低的原因還需要其他藥理實驗在小鼠體內(nèi)進一步驗證。在體內(nèi)外抗菌實驗中，鹿茸草和鴨跖草都表現(xiàn)出很好的抗菌活性，其中鹿茸草中富含苯乙醇苷類化合物、黃酮類化合物、環(huán)烯醚萜類化合物等，苯乙醇苷類化合物具有良好的抗菌活性，對金黃色葡萄球菌的生長能起到中強度的抑制作用[11]。而鴨跖草中富含生物堿與黃酮類化合物，萬京華等[12]研究發(fā)現(xiàn)鴨跖草提取液對大腸桿菌、痢疾桿菌等8種細菌有很好的抑菌作用，與常用的化學防腐劑相比抑菌作用更強。苯乙醇苷類成分及黃酮類成分都可能是炎寧糖漿發(fā)揮抗菌活性的藥效物質(zhì)基礎。

白色念珠菌可侵犯人體許多部位，可引起皮膚念珠菌病，好發(fā)于皮膚皺褶處(腑窩、腹股溝、乳房下、肛門周圍及甲溝、指間)，導致皮膚潮紅、潮濕、發(fā)亮，有時蓋上一層白色或呈破裂狀物，病變周圍有小水泡，也可患于黏膜念珠菌病，以鵝口瘡、口角炎、陰道炎最常見，還可患于內(nèi)臟及中樞神經(jīng)念珠菌病，可由黏膜皮膚等處病菌播散引起，發(fā)生肺炎、腸胃炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、腦炎等，偶爾也可發(fā)生敗血癥[13]。根據(jù)實驗結果，炎寧糖漿總提取物在4種真菌體外實驗中對白色念珠菌具有抑菌和殺菌作用，其單味藥中鹿茸草也同樣表現(xiàn)出對白色念珠菌具有抑菌和殺菌作用。白色念珠菌一旦生成生物被，即對抗真菌藥和機體防御機能產(chǎn)生很強的抵抗力，病菌的黏附性和侵襲性增強，故推測炎寧糖漿總提取物及鹿茸草可能對白色念珠菌早期黏附和中期生物膜的形成有抑制作用。炎寧糖漿的應用與研究不僅有助于認清組方中單味藥的抗菌活性成分，更有助于指導臨床科學用藥，提高臨床療效，對進一步闡明組方科學內(nèi)涵及充實中醫(yī)藥理論有重大意義。